UHPLC-epäpuhtausmenetelmän kehittäminen ja validointi inhalaatiovalmisteelle

Tämän diplomityön tarkoituksena on kehittää menetelmä, jolla voidaan seurata inhalaatiovalmisteen sisältämiä epäpuhtauksia. Menetelmä kehitetään erittäin korkean suorituskyvyn kromatografialaitteistolle (Ultra High Performance Liquid Chromatography, UHPLC) jo olemassa olevan HPLC-epäpuhtausmenetelmän pohjalta. Uusi menetelmä kehitetään analyysiajan lyhentämiseksi ja erotuksen resoluution parantamiseksi. Työn kirjallisuusosa esittelee lyhyesti inhalaatiovalmisteet sekä nestekromatografian perusteet. Korkean erotuskyvyn nestekromatografia ja analysoinnin apuna käytettävät parametrit selvitetään laskukaavoineen. Kirjallisuusosa keskittyy epäpuhtausmenetelmän kehittämisen kulkuun ja menetelmän validoinnissa suoritettaviin kokeisiin. Soveltavassa osassa Orion Oyj:n kehitteillä olevalle kahden vaikuttavan aineen inhalaatiovalmisteelle kehitetään UHPLC-epäpuhtausmenetelmä kirjallisuusosiossa esitellyn menetelmäkehitysrungon pohjalta. Menetelmäkehityksen kulku ja analyysin olosuhteiden valinta esitellään pääpiirteittäin, jonka jälkeen kehitetty menetelmä validoidaan sille tehdyn validointisuunnitelman mukaisesti. Kehitetystä UHPLC-epäpuhtausmenetelmästä saatiin 16 minuuttia lyhyempi kuin vastaava HPLC-epäpuhtausmenetelmä. Myös analyysin resoluutio parantui merkittävästi. Toistuvien injektioiden jälkeen kromatogrammissa esiintyi kuitenkin häntimistä, joka johti merkittävään resoluution heikkenemiseen. Häntimisen syyksi epäiltiin toisen vaikuttavan aineen kiinnittymistä kolonnimateriaaliin, mutta sen estämiseksi ehdotetut toimenpiteet eivät sopineet kehitettyyn menetelmään.

This paper examines the development of a method for observing the impurities of the inhalation product. The equipment used in this method development is Ultra High Performance Liquid Chromagraphy (UHPLC). The method is developed using a method transfer from the existing HPLC impurity method. The aim of this method transfer is to cut the duration of the analysis and to improve the resolution. The literature review introduces the principles of inhalation products as well as liquid chromatography focusing in the high performance liquid chromatography. The parameters and equations used in the analysis of chromatographic data are presented. The main focus of the literature review lays in the course of the impurity method development and in the experiments needed in the validation process. The purpose of the empirical part is to develop a method for indentification of the impurities of inhalation product. The inhalation product is manufactured at Orion Corporation and includes two active pharmaceutical ingredients. The course of the method development and the process of choosing the conditions used is reported. Completed method is validated by the validation plan. The new developed method shortened analysis time by 16 minutes. Also the resolution of the method was improved. However, after repetitive injections the resolution of the method weakened significantly due to the increasing peak tailing. It was suspected that the tailing was consequence of the other active pharmaceutical ingredient attaching to the column material. Actions taken to prevent attaching were proposed but the suggested measures were otherwise unsuitable.