Estudo fitoquímico preliminar e bioensaio toxicológico frente a larvas de Artemia salina Leach. de extrato obtido de frutos de Solanum lycocarpum A. St.-Hill (Solanaceae)

The phytochemical profile of ethanolic extract of Solanum lycocarpum fruits was analyzed and preliminary toxicity tests were performed against brine shrimp larvae. The extract was subjected to preliminary phytochemical analysis to identify the main classes of secondary metabolites and tested against the larvae of A. salina to obtain the median lethal concentrations (LC50%). The phytochemical tests showed the presence of phenols, tannins, saponins, alkaloids and free steroids. The extract was fractionated with various solvents for toxicity testing against the larvae and the hydroalcoholic fraction showed considerable cytotoxicity (CL50% = 285.546 g/mL).

Anti-nociceptive effects of Carpolobia lutea G. Don (Polygalaceae) leaf fractions in animal models

Leaves from Carpolobia lutea (Polygalaceae) were screened to establish the antiulcer ethnomedicinal claim and to quantitatively isolate, elucidate the active compounds by semi-preparative HPLC. The anti-nociceptive effects of Carpolobia lutea (CL) G. Don (Polygalaceae) organic leaf extracts were tested in experimental models in mice. The anti-nociceptive mechanism was determined using tail-flick test, acetic acid-induced abdominal constrictions, formalin-induced hind paw licking and the hot plate test. The fractions (ethanol, ethyl acetate, chloroform, n-hexane) and crude ethyl acetate extract of CL (770 mg/kg, i.p.) produced significant inhibitions of both phases of the formalin-induced pain in mice, a reduction in acetic acid-induced writhing as well as and an elevation of the pain threshold in the hot plate test in mice. The inhibitions were greater to those produced by indomethacin (5 mg/kg, i.p.). Ethyl acetate fraction revealed cinnamic and coumaric acids derivatives, which are described for the first time in literature. These cinnamalglucosides polyphenols characterised from CL may in part account for the pharmacological activities. These findings confirm its ethnomedical use in anti-inflammatory pain and in pains from gastric ulcer-associated symptoms. © 2011 Springer Basel AG.

Antiprotozoal activity of quinonemethide triterpenes from Maytenus ilicifolia (Celastraceae)

The present study describes the leishmanicidal and trypanocidal activities of two quinonemethide triterpenes, maytenin (1) and pristimerin (2), isolated from Maytenus ilicifolia root barks (Celastraceae). The compounds were effective against the Trypanosomatidae Leishmania amazonensis and Leishmania chagasi and Trypanosoma cruzi, etiologic agents of leishmaniasis and Chagas' disease, respectively. The quinonemethide triterpenes 1 and 2 exhibited a marked in vitro leishmanicidal activity against promastigotes and amastigotes with 50% inhibitory concentration (IC50) values of less than 0.88 nM. Both compounds showed IC50 lower than 0.3 nM against Trypanosoma cruzi epimastigotes. The selectivity indexes (SI) based on BALB/c macrophages for L. amazonensis and L. chagasi were 243.65 and 46.61 for (1) and 193.63 and 23.85 for (2) indicating that both compounds presented high selectivity for Leishmania sp. The data here presented suggests that these compounds should be considered in the development of new and more potent drugs for the treatment of leishmaniasis and Chagas' disease. © 2013 by the authors.

Anti-inflammatory and analgesic evaluation of hydroalcoholic extract and fractions from seeds of Piper cubeba L. (Piperaceae)

Some of the Piper species have been applied for the treatment of several diseases (anti-oxidant, antimicrobial, anti-inflammatory, and analgesic), considering multiple applications used in traditional medicine of different countries. About these, the present study evaluated some biological activities of Piper cubeba, as writhing test induced by acetic acid, ear edema induced by croton oil and paw edema induced by carrageenan were used by evaluated the analgesic and anti-inflammatory activities of crude hydroalcoholic extract (PCE) and its fractions of different polarities of P. cubeba L. seeds. The lethal dose (LD50) and the effective dose (ED50) were evaluated too. Both the PCE and dichloromethane fraction showed decrease values of edema and abdominal constrictions. The results obtained in this study confirm the low toxicity and analgesic and anti-inflammatory activities of PCE from P. cubeba seeds, justifying its use in folk medicine. Copyright © 2013, Phcog.Net, Published by Reed Elsevier India Pvt. Ltd. All rights reserved.

In vitro activity of pineapple extracts (Ananas comosus, Bromeliaceae) on Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae)

Measures to control the cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, based only on chemical products are becoming unsustainable, mainly because of the development of resistance. The objective of this study was to test the effect of the aqueous extract of pineapple skin (AEPS) and bromelain extracted from the stem (Sigma-Aldrich®, B4882) on engorged females and larvae of R. (B.) microplus in vitro. These substances were diluted in water and evaluated at eight concentrations. Engorged females were collected and distributed in groups of 10, with three repetitions for each treatment. After immersion in the solutions, the females were placed in an incubator for observation of survival, oviposition and larval hatching. The larval packet method was used, also with three repetitions with about 100 larvae each. The packets were incubated and the readings were performed after 24h. The estimated reproduction and efficacy of the solutions were calculated. The LC50 and LC90 were estimated using the Probit procedure of the SAS program. The eight concentrations were compared within each treatment by the Tukey test. For the experiment with engorged females, the most effective concentrations were 125, 250 and 500mg/mL: 33%, 48% and 59% for the AEPS and 27%, 51% and 55% for the bromelain. The LC50 and LC90 values were, respectively, 276 and 8691mg/mL for AEPS and 373 and 5172mg/mL for bromelain. None of the dilutions tested was effective against the larvae of R. (B.) microplus. This is the first report of the action of pineapple extracts or their constituents on cattle ticks. The results demonstrate that further studies regarding composition of tick cuticle, with evaluation of other solvents and formulations, should be conducted seeking to enhance the effect of pineapple extracts and compounds against this ectoparasite. © 2013 Elsevier Inc.

Acute toxicity and environmental risk of teflubenzuron to Daphnia magna, Poecilia reticulata and Lemna minor in the absence and presence of sediment

This study aimed to estimate the acute toxicity of teflubenzuron (1-(3,5-dichloro-2,4-difluorophenyl)-3-(2,6-difluorobenzoyl)urea) (TFB) for Daphnia magna, Lemna minor and Poecilia reticulata, in the absence and presence of sediment; evaluate the effect of sediment on the TFB bioavailability; and to classify this insecticide according to its environmental poisoning risk for agricultural and aquaculture uses. The tests of TFB acute toxicity were conducted in static system in a completely randomized design with increasing TFB concentrations, and a control group. The TFB has been classified according to the estimated values of EC50 and LC50 by its acute toxicity and environmental risk. The sediment significantly reduced toxicity and bioavailability of TFB in water column. Therefore, the insecticide can be classified as being highly toxic to Daphnia magna, which means the agricultural and aquacultural uses of TFB pose a high risk of environmental toxicity to non-target organisms. However, it was practically non-toxic to L. minor and P. reticulata. © 2013 Copyright Taylor and Francis Group, LLC.

Avaliação da atividade antinociceptiva e antiinflamatória do óleo essencial de Hyptis crenata (Pohl) ex Benth

Hyptis crenata (Pohl) ex Benth. é uma planta herbácea, medicinal e aromática, pertencente à família lamiaceae, conhecida popularmente como salva-do-marajó, malva-do-marajó e hortelã-bravo. Distribui-se no estuário do Rio Amazonas, Pantanal e no estado de Minas-Gerais. Seu óleo essencial é caracterizado pela presença de monoterpenos e sesquiterpenos. É utilizada popularmente como sudorífico, tônico, estimulante, bem como para tratar inflamação de olhos e garganta, constipação e artrite. Baseado nessas informações, decidiu-se avaliar a atividade antinociceptiva e antiinflamatória do óleo essencial desta espécie (OEHc) através dos seguintes testes: teste das contorções abdominais induzidas por ácido acético, placa quente, formalina, dermatite induzida pelo óleo de croton, edemas induzidos por dextrana e carragenina e peritonite induzida por carragenina. Para a análise estatística utilizou-se ANOVA seguida de um método de múltiplas comparações (Teste de Student-Newman-Keuls ou teste "t" de Student). O óleo foi extraído por hidrodestilação, obtendo um rendimento de 0,6%. É composto predominantemente por monoterpenos (94,5%). A dose letal media DL50 foi de 5000 mg/kg. Nas contorções abdominais induzidas por ácido acético o óleo (250, 350 e 500 mg/kg) reduziu de forma significante de maneira dose-dependente estas contorções em 22,56%, 60,76% e 75,53%, respectivamente, cujo coeficiente de correlação linear foi de r = 0,9341 e DE50 = 364,22 mg/kg. No teste da placa quente, o óleo não foi capaz de aumentar o tempo de latência de maneira significante. No teste da formalina, o OEHc produziu uma inibição da 1 fase em 26,49% e da 2 fase em 43,39%. Além disso, a naloxona reverteu o efeito do OEHc neste teste. Na dermatite induzida pelo óleo de croton, o OEHc reduziu o edema de maneira significante em 44,26%. No edema induzido por dextrana, o óleo foi capaz de impedir o desenvolvimento do edema na dose de 364,22 mg/kg de maneira significante em relação ao grupo controle. Porém, no edema induzido por carragenina esta inibição não foi observada. Na peritonite induzida por carragenina, o OEHc reduziu o número de leucócitos e o de neutrófilos em 47,55% e 66,47%, respectivamente. A partir dos resultados obtidos, sugere-se que o OEHc apresenta atividade antinociceptiva provavelmente através da ação direta sobre as fibras nociceptivas, além de sugerir que os receptores opióides possam estar envolvidos neste processo; e atividade antiinflamatória provavelmente de origem periférica. Pode-se sugerir, também, que os possíveis componentes responsáveis por essas ações sejam os compostos monoterpênicos presentes no OEHc.

Estudo comparativo da toxidez de Palicourea juruana (Rubiaceae) para búfalos e bovinos

O estudo foi realizado com os objetivos de estabelecer a sensibilidade dos búfalos a Palicourea juruana e agregar novos dados sobre a toxidez dessa planta para bovinos. Embora os quadros clínico-patológicos tenham sido semelhantes, a comparação das doses letais para búfalos (entre 1 e 2 g/kg) e para bovinos (0,25 g/kg) estabelece o búfalo como pelo menos quatro vezes mais resistente. Em experimentos realizados 10 anos antes - com amostras de P. juruana coletadas na mesma fazenda no Pará, em julho de 1993, início da época de seca, portanto apenas 2 meses mais tarde do que os agora realizados em maio de 2003 - a dose letal para bovinos foi de 2 g/kg. Não encontramos explicação para a toxicidade extremamente elevada da planta verificada nesse estudo.

Intoxicação natural e experimental por Metternichia princeps (Solanaceae) em caprinos

Entre os anos de 2007 e 2009 ocorreu uma doença nefrotóxica de evolução subaguda com alta mortandade em caprinos em uma propriedade no município de Itaguaí, estado do Rio de Janeiro. Levantou-se a suspeita de que Metternichia princeps, planta pertencente à família Solanaceae, seria a causa. Através de experimentação em caprinos o quadro clínico-patológico de intoxicação por esta planta e a dose letal foram estabelecidos. Na experimentação foram utilizados 12 caprinos de diferentes raças, de ambos os sexos, jovens a adultos, com pesos acima de 15 kg. Os animais que receberam as doses de 30g/kg em 5 dias, 15g/kg em 3 dias, doses únicas de 10g/kg e de 5g/kg, morreram. Dos três animais que receberam as doses únicas de 2,5g/kg, dois morreram e um não apresentou sinais clínicos e o animal que recebeu a dose única de 1,25g/kg, também não apresentou sinais clínicos. O início dos sinais clínicos após a administração da planta variou entre 7h e 46h45min. A evolução variou entre 3h6min e 126h40min. Os primeiros sinais clínicos apresentados foram inapetência, adipsia, apatia e relutância ao movimento. Em seguida os animais entravam em decúbito esternal e ao serem colocados em estação, mantinham os membros anteriores flexionados, apoiavam apenas os posteriores no chão até evoluírem para flexão dos quatro membros e seguia-se o decúbito lateral. À necropsia destacaram-se o edema de tecido adiposo perirrenal, rins pálidos e, ao corte, com estriação esbranquiçada desde o córtex até a região medular. À histopatologia foi verificada acentuada necrose coagulativa das células epiteliais dos túbulos uriníferos. Comparativamente aos casos naturais, os caprinos intoxicados experimentalmente por M. princeps apresentaram quadro clínico-patológico semelhante. Desta maneira foi comprovado que Metternichia princeps é responsável pela doença nefrotóxica em caprinos no Rio de Janeiro; a menor dose que causou a morte dos caprinos nos experimentos foi 2,5g/kg.

Caracterização fitoquímica e avaliação da atividade anti-inflamatória e antinociceptiva do óleo fixo de Euterpe oleracea Mart.

Euterpe oleracea Mart. é uma típica palmeira da Amazônia, que cresce espontaneamente nos estados do Pará e Amapá, apreciada por sua atrativa beleza e valor nutricional. O fruto de Euterpe oleracea, comumente conhecido como açaí, tem demonstrado exibir significante capacidade anti-oxidante in vitro, o que pode ter benefícios à saúde. Estudos químicos revelaram a presença de ácidos graxos, antocianinas e esteroides. O objetivo deste trabalho foi caracterizar fitoquimícamente o óleo fixo dos frutos desta espécie (OEO) e avaliar em modelos inflamatórios e hiperalgésicos in vivo, o possível envolvimento dos compostos nas respostas inflamatória e analgésica. Para tanto, os modelos experimentais usados foram: teste de contorção induzida por ácido acético, edema de pata de rato, teste do granuloma em ratos, permeabilidade vascular em ratos, migração leucocitária em ratos e eritema de orelha induzida por óleo de cróton em camundongos. Doses orais de 500, 1000 e 1500 mg/kg de OEO inibiu o número de contorções em 33,67%, 45,88% e 55,58, respectivamente. O OEO produziu efeito dose-dependente, e a dose média efetiva encontrada foi de 1226,8mg/kg. Com a administração oral da dose de 1226,8 mg/kg, o OEO inibiu o processo inflamatório em 29,18% quando comparado ao grupo controle. A administração diária de OEO por 6 dias inibiu a formação do tecido granulomatoso em 36,66%. No eritema de orelha por óleo de cróton, o OEO provocou efeito inibitório significativo em 37,9%. No teste de permeabilidade vascular, o OEO inibiu a permeabilidade vascular em 54,5%. Na peritonite induzida por carragenina, o OEO reduziu o número de neutrófilos quando comparado ao grupo controle (inibição de 80,14%). A partir dos resultados obtidos, sugere-se que o OEO apresenta atividade anti-inflamatória, sobre os processos inflamatórios agudo e crônico, e atividade antinociceptiva, provavelmente de origem periférica.

Avaliação da atividade antinociceptiva e anti-inflamatória de Mikania lindleyana DC: validação do uso na medicina popular

Mikania lindleyana (Asteraceae), popularmente conhecida como sucuriju, é uma espécie nativa da região amazônica, cujo chá das folhas é a principal forma de uso popular para tratamento de gastrite, infecção, dor e inflamação. Para validar a forma e a alegação de uso decidiu-se avaliar a toxicidade aguda e as atividades antinociceptiva e anti-inflamatória do extrato bruto aquoso liofilizado de Mikania lindleyana devidamente identificada (EAML), bem como investigar sua composição química. Na análise fitoquímica do EAML detectou-se a presença de saponinas, proteínas, aminoácidos, fenóis, taninos, ácidos orgânicos e flavonoides. Por cromatografia em camada delgada (CCD) foram observadas zonas de fluorescência azul características de ácido o-cumárico. Por cromatografia liquida acoplada à espectrometria de massa (CLAE-DAD-EM) foram encontrados compostos altamente glicosilados. O EAML na dose de 5000mg/kg não provocou morte nos animais. No teste de contorções abdominais, o EAML (nas doses 125, 250, 500, 750, 1000 e 1500mg/kg) promoveu redução no número de contorções de maneira significante e dose-dependente. A dose efetiva mediana (DE₅₀) de 692,6 mg/kg não prolongou o tempo de latência sobre a placa quente. No teste de formalina, o EAML reduziu o tempo no qual os animais permaneceram lambendo a pata injetada com formalina nas duas fases sendo este efeito revertido pelo antagonista opioide naloxona. A dose de 692,6 mg/kg inibiu a formação de eritema, mas não o edema provocado por dextrana. A mesma dose inibiu a formação do edema por carragenina a partir da 2ª hora e reduziu a migração de neutrófilos para a cavidade peritonial. Estes resultados sugerem que o EAML, nas doses utilizadas, apresenta atividade antinociceptiva na qual pode haver a participação do sistema opioide e, apresenta atividade anti-inflamatória que pode ser atribuída à ação sobre mediadores inflamatórios, como PGs, e, ainda sobre moléculas de adesão, cuja participação de citocinas pode ser crucial.

Formulação e caracterização físico-química e biofarmacêutica de microemulsões lipídicas contendo doxorrubicina

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Toxicidade de inseticidas para abelhas Apis mellifera L

Pós-graduação em Zootecnia - FMVZ

Toxicidade in vitro e in vivo do ortobenzamol, análogo do paracetamol

O paracetamol (PAR) é um dos medicamentos de venda livre mais utilizado em todo o mundo. Entretanto, doses elevadas do PAR produzem toxicidade hepática e/ou renal. No intuito de minimizar a toxicidade do PAR e obter melhor atividade analgésica e anti-inflamatória, um estudo prévio realizou modificações na estrutura química do PAR por modelagem molecular, dando origem ao ortobenzamol (OBZ) – análogo do PAR. Assim, o OBZ foi sintetizado e avaliado em modelos de nocicepção e inflamação em animais. O estudo demonstrou atividade analgésica central do OBZ, com potência superior ao PAR. Além disso, nos testes de inflamação, essa droga apresentou inibição significativa no processo inflamatório. Entretanto, para que o OBZ possa ser considerado uma alternativa terapêutica nova e importante para o tratamento da dor e/ou da inflamação é necessário determinar sua toxicidade. Assim, este estudo objetivou avaliar a toxicidade in vitro e in vivo do OBZ e, compará-la com a do PAR. Para isso, a neurotoxicidade foi avaliada in vitro em culturas primárias de neurônios corticais, através de ensaios de viabilidade celular, determinação dos níveis de glutationa total e reduzida, assim como a possível capacidade neuroprotetora frente ao estresse oxidativo. Foram realizados estudos in vivo em camundongos, iniciados pela determinação da dose efetiva mediana (DE₅₀) do PAR, a fim de compará-la com a do OBZ nos modelos de toxicidade estudados. Determinou-se o estresse oxidativo hepático e cerebral pela análise dos níveis de peroxidação lipídica e nitritos. A possível disfunção hepática e renal foi determinada, por meio da análise dos níveis plasmáticos das enzimas aspartato aminotransferase (AST), de alanina aminotransferase (ALT), gama glutamiltransferase (GGT) e, da creatinina no sangue. Avaliaram-se alterações nos parâmetros clínicos através do hemograma, leucograma e plaquetograma e, realizou-se a determinação da toxicidade aguda. Os resultados obtidos neste estudo demonstraram que o ortobenzamol é mais seguro que o paracetamol. Registrou-se ao ortobenzamol ausência de neurotoxicidade, menor potencial hepatotóxico e hematotóxico, ausência de nefrotoxicidade e, ainda, foi classificado como um xenobiótico de baixa toxicidade após a avaliação da toxicidade aguda. Portanto, o ortobenzamol pode ser considerado como uma futura alternativa terapêutica segura ao paracetamol, no tratamento da dor e inflamação.

Anti-inflammatory and antinociceptive activities of Euterpe oleracea Mart., Arecaceae, oil

The oil of the fruits of Euterpe oleracea Mart., Arecaceae (OEO), was evaluated in models of inflammation and hyperalgesia in vivo to study its effects on these conditions. The experimental models contained the writhing test in mice, rat paw edema, granuloma test in rats, vascular permeability in rats, cell migration to the peritoneal cavity in rats and ear erythema induced by croton oil in mice. Doses of 500, 1000 and 1500 mg/kg of OEO were administered orally. The observed number of writhes was inhibited by 33.67, 45.88 and 55.58%, respectively. OEO produced a dose-dependent effect, with linear correlation coefficient R=0.99 (y=0.0219x+23.133), and the median effective dose found was 1226.8 mg/kg. The oral administration of 1226.8 mg/kg of OEO inhibited carrageenan-induced edema by 29.18% (p<0.05) when compared to the control group. The daily administration of OEO for six days inhibited the formation of granulomatous tissue by 36.66% (p<0.01). In ear erythema induced by croton oil, OEO presented a significant inhibition (37.9%). In the vascular permeability test, treatment with OEO decreased the response to histamine, inhibiting vascular permeability by 54.16%. In carrageenan-induced peritonitis, OEO reduced the number of neutrophils migrating compared to the control group by 80.14%. These results suggested that OEO has anti-inflammatory and antinociceptive activities, probably of peripheral origin and linked to prostaglandin biosynthesis inhibition.