Enterococcus faecium isolated from Lombo, a Portuguese traditional meat product: characterisation of antibacterial compounds and factors affecting bacteriocin production

Strain ST211CH, identified as a strain of Enterococcus faecium, isolated from Lombo produced a bacteriocin that inhibited the growth of Enterococcus spp., Listeria spp., Klebsiella spp., Lactobacillus spp., Pseudomonas spp., Staphylococcus spp. and Streptococcus spp. The mode of action of the bacteriocin named as bacteriocin ST211Ch was bactericidal against Enterococcus faecalis ATCC19443. As determined by Tricine-SDS-PAGE, the approximate molecular mass of the bacteriocin was 8.0 kDa. Loss in antimicrobial activity was recorded after treatment with proteolytic enzymes. Maximum activity of bacteriocin ST211Ch was measured in broth cultures of E. faecium strain ST211Ch after 24 h; thereafter, the activity was reduced. Bacteriocin ST211Ch remained active after exposure to various temperatures and pHs, as well as to Triton X-100, Tween-80, Tween-20, sodium dodecyl sulfate, NaCl, urea and EDTA. Effect of media components on production of bacteriocin ST211Ch was also studied. On the basis of PCR reactions targeting different bacteriocin genes, i.e. enterocins, curvacins and sakacins, no evidences for the presence of these genes in the total DNA of E. faecium strain ST211Ch was obtained. The bacterium most probably produced a bacteriocin different from those mentioned above. Based on the antimicrobial spectrum, stability and mode of action of bacteriocin ST211CH, E. faecium strain ST211Ch might be considered as a potential candidate with beneficial properties for use in biopreservation to control food spoilage bacteria.

Application of bacteriocinogenic Enterococcus mundtii CRL35 and Enterococcus faecium ST88Ch in the control of Listeria monocytogenes in fresh Minas cheese

Several strains of Enterococcus spp. are capable of producing bacteriocins with antimicrobial activity against important bacterial pathogens in dairy products. In this study, the bacteriocins produced by two Enterococcus strains (Enterococcus mundtii CRL35 and Enterococcus faecium ST88Ch), isolated from cheeses, were characterized and tested for their capability to control growth of Listeria monocytogenes 426 in experimentally contaminated fresh Minas cheese during refrigerated storage. Both strains were active against a variety of pathogenic and non-pathogenic microorganisms and bacteriocin absorption to various L. monocytogenes, Enterococcus faecalis ATCC 19443 and Lactobacillus sakei ATCC 15521 varied according to the strain and the testing conditions (pH, temperature, presence of salts and surfactants). Growth of L. monocytogenes 426 was inhibited in cheeses containing E. mundtii CRL35 up to 12 days at 8 degrees C, evidencing a bacteriostatic effect. E. faecium ST88Ch was less effective, as the bacteriostatic affect occurred only after 6 days at 8 degrees C. In cheeses containing nisin (12.5 mg/kg), less than one log reduction was observed. This research underlines the potential application of E. mundtii CRL35 in the control of L. monocytogenes in Minas cheese. (c) 2012 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Streptococcus spp. and related bacteria: Their identification and their pathogenic potential for chronic mastitis - A molecular approach

Streptococcus spp. and related bacteria form a large group of organisms which are associated with bovine intramammary Infections (IMI). Some of them are the well-known mastitis pathogens Streptococcus uberis and Streptococcus agalactiae. In addition, there are a considerable number of these gram-positive, catalase-negative cocci (PNC) with unclear mastitic pathogenicity such as Aerococcus viridans which make the conventional diagnostics of PNC difficult. One diagnostic, API 20 Strep (API, Biomerieux) is recommended which, as a phenotypic assay, involves a series of miniaturized biochemical tests. Recently, preference is given to genotypic identification methods. In particular, sequencing of the 16S rRNA gene allows highly reproducible and accurate identification of bacteria and permits discovery of novel, clinically relevant bacteria. As a consequence, the aim of the present study was to compare identification of IMI-associated PNC by the API method as well as by sequencing of their 16S rRNA gene (16S). Furthermore, the correlation of these bacteria to bovine chronic mastitis and their phylogeny was investigated. 102 PNC isolated from single quarter milk samples were identified by API and 16S sequencing. Considering Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalactiae subsp. dysgalactiae and Streptococcus agalactiae, both methods generated fully concordant results. In contrast, a very high disconcordance was observed for most of the other PNC, in particular Enterococcus spp., Aerococcus viridans and the viridans streptococci were shown as apathogenic. Lactococcus garvieae was found to be an opportunistic pathogen causing IMI during late lactation. In addition, PNC isolated from milk were frequently observed together with other bacteria, in particular with Staphylococcus spp. In these cases, the levels of somatic cell counts (SCC) were determined by the specific PNC present in the sample. Considering PNC phylogeny based on 16S sequencing, 3 major clusters were observed. They included all the common mastitis pathogens (cluster I), the Lactococcus spp., Enterococcus spp. and Aerococcus spp. (cluster II) and all the viridans streptococci (cluster III).

Detecção de Enterococcus resistentes a vancomicina em criações comerciais de ovinos e caprinos das regiões centro-leste e nordeste do Estado de São Paulo

As exigências das condições higiênico-sanitárias na produção de animais de interesse zootécnico vêm aumentando progressivamente dada à necessidade de aliar-se produtividade a produtos de alta qualidade para atender a mercados consumidores cada vez mais exigentes. Nesse sentido, a utilização de antimicrobianos, tanto na profilaxia como na terapêutica, permanece como estratégia de controle para vários microrganismos patogênicos, de importância não apenas para a produção animal como também para a saúde humana, ainda que restrições ao uso indiscriminado desses produtos têm se intensificado. Não obstante, o uso excessivo desses produtos está associado à seleção de microrganismos resistentes nas áreas de produção. Por outro lado, investigações sobre circulação de cepas resistentes em rebanhos animais, até então restritas a populações humanas, ainda permanecem limitadas no Brasil. Bactérias do gênero Enterococcus, integrantes usuais da microbiota gastrointestinal animal e humana, são indicadoras ambientais de contaminação fecal e tem-se tornado objeto de preocupação em saúde pública e veterinária dada a ocorrência de cepas resistentes à vancomicina (VRE). O presente trabalho teve como objetivo isolar, quantificar e caracterizar VRE presentes em amostras fecais de ovinos oriundos de pequenas propriedades das regiões centro-leste e nordeste do estado de São Paulo. Para tanto, 132 amostras fecais foram coletadas diretamente do reto dos animais ou do piso das instalações. As amostras foram semeadas em ágar m-Enterococcus e subcultivadas em Ágar Bile Esculina acrescido de 6 µg/mL de vancomicina (ABEV), para confirmação de Enterococcus spp e detecção de cepas resistentes. Procedeu-se igualmente a observação da morfologia, características tintoriais, bioquímicas e moleculares. O número máximo de Enterococcus spp. encontrado foi de 2,6 × 105 e 1,70 × 105 UFC/g de fezes do ambiente e dos animais, respectivamente. Na caracterização bioquímica espécies mais prevalentes foram: Enterococcus faecalis e Vagococcus fluvialis. No ABEV, houve crescimento de colônias VRE em 33 das 84 amostras de ovinos-caprinos e em 21 das 48 amostras ambientais, representando, respectivamente 46,7% e 29,3% das amostras analisadas. A análise por multiplex PCR das 54 cepas VRE obtidas indicaram que 23 (43%), 22 (41%), 2 (3,5%) e 2 (3,5%) foram positivas, respectivamente, para os genes vanC2/C3, vanC1, vanA e vanB, sendo que para 5,3% dos isolados nenhum produto foi amplificado, sugerindo a possível ocorrência de genes dos demais grupos van conhecidos entre os isolados. Os resultados obtidos indicam, de forma inédita no país, a circulação de VRE em propriedades produtoras de ovinos e caprinos, sem ocorrência de manifestações clínicas aparentes nos animais, porém com possíveis riscos à saúde dos produtores e profissionais envolvidos, bem como a eventuais consumidores.

Molecular characterisation of environmental enterococci derived from water samples and assessment of associated public health hazards

Enterococci are versatile Gram-positive bacteria that can survive under extreme conditions. Most enterococci are non-virulent and found in the gastrointestinal tract of humans and animals. Other strains are opportunistic pathogens that contribute to a large number of nosocomial infections globally. Epidemiological studies demonstrated a direct relationship between the density of enterococci in surface waters and the risk of swimmer-associated gastroenteritis. The distribution of infectious enterococcal strains from the hospital environment or other sources to environmental water bodies through sewage discharge or other means, could increase the prevalence of these strains in the human population. Environmental water quality studies may benefit from focusing on a subset of Enterococcus spp. that are consistently associated with sources of faecal pollution such as domestic sewage, rather than testing for the entire genus. E. faecalis and E. faecium are potentially good focal species for such studies, as they have been consistently identified as the dominant Enterococcus spp. in human faeces and sewage. On the other hand enterococcal infections are predominantly caused by E. faecalis and E. faecium. The characterisation of E. faecalis and E. faecium is important in studying their population structures, particularly in environmental samples. In developing and implementing rapid, robust molecular genotyping techniques, it is possible to more accurately establish the relationship between human and environmental enterococci. Of particular importance, is to determine the distribution of high risk enterococcal clonal complexes, such as E. faecium clonal complex 17 and E. faecalis clonal complexes 2 and 9 in recreational waters. These clonal complexes are recognized as particularly pathogenic enterococcal genotypes that cause severe disease in humans globally. The Pimpama-Coomera watershed is located in South East Queensland, Australia and was investigated in this study mainly because it is used intensively for agriculture and recreational purposes and has a strong anthropogenic impact. The primary aim of this study was to develop novel, universally applicable, robust, rapid and cost effective genotyping methods which are likely to yield more definitive results for the routine monitoring of E. faecalis and E. faecium, particularly in environmental water sources. To fullfill this aim, new genotyping methods were developed based on the interrogation of highly informative single nucleotide polymorphisms (SNPs) located in housekeeping genes of both E. faecalis and E. faecium. SNP genotyping was successfully applied in field investigations of the Coomera watershed, South-East Queensland, Australia. E. faecalis and E. faecium isolates were grouped into 29 and 23 SNP profiles respectively. This study showed the high longitudinal diversity of E. faecalis and E. faecium over a period of two years, and both human-related and human-specific SNP profiles were identified. Furthermore, 4.25% of E. faecium strains isolated from water was found to correspond to the important clonal complex-17 (CC17). Strains that belong to CC17 cause the majority of hospital outbreaks and clinical infections globally. Of the six sampling sites of the Coomera River, Paradise Point had the highest number of human-related and human-specific E. faecalis and E. faecium SNP profiles. The secondary aim of this study was to determine the antibiotic-resistance profiles and virulence traits associated with environmental E. faecalis and E. faecium isolates compared to human pathogenic E. faecalis and E. faecium isolates. This was performed to predict the potential health risks associated with coming into contact with these strains in the Coomera watershed. In general, clinical isolates were found to be more resistant to all the antibiotics tested compared to water isolates and they harbored more virulence traits. Multi-drug resistance was more prevalent in clinical isolates (71.18% of E. faecalis and 70.3 % of E. faecium) compared to water isolates (only 5.66 % E. faecium). However, tetracycline, gentamicin, ciprofloxacin and ampicillin resistance was observed in water isolates. The virulence gene esp was the most prevalent virulence determinant observed in clinical isolates (67.79% of E. faecalis and 70.37 % of E. faecium), and this gene has been described as a human-specific marker used for microbial source tracking (MST). The presence of esp in water isolates (16.36% of E. faecalis and 19.14% of E. faecium) could be indicative of human faecal contamination in these waterways. Finally, in order to compare overall gene expression between environmental and clinical strains of E. faecalis, a comparative gene hybridization study was performed. The results of this investigation clearly demonstrated the up-regulation of genes associated with pathogenicity in E. faecalis isolated from water. The expression study was performed at physiological temperatures relative to ambient temperatures. The up-regulation of virulence genes demonstrates that environmental strains of E. faecalis can pose an increased health risk which can lead to serious disease, particularly if these strains belong to the virulent CC17 group. The genotyping techniques developed in this study not only provide a rapid, robust and highly discriminatory tool to characterize E. faecalis and E. faecium, but also enables the efficient identification of virulent enterococci that are distributed in environmental water sources.

Fecal indicators and bacterial pathogens in bottled water from Dhaka, Bangladesh

Forty-six bottled water samples representing 16 brands from Dhaka, Bangladesh were tested for the numbers of total coliforms, fecal indicator bacteria (i.e., thermotolerant Escherichia coli and Enterococcus spp.) and potential bacterial pathogens (i.e., Aeromonas hydrophil, Pseudomonas aeruginos, Salmonella spp., and Shigella spp.). Among the 16 brands tested, 14 (86%), ten (63%) and seven (44%) were positive for total coliforms, E. coil and Enterococcus spp., respectively. Additionally, a further nine (56%), eight (50%), six (37%), and four (25%) brands were PCR positive for A. hydrophila lip, P. aeruginosa ETA, Salmonella spp. invA, and Shigella spp. ipaH genes, respectively. The numbers of bacterial pathogens in bottled water samples ranged from 28 ± 12 to 600 ± 45 (A. hydrophila lip gene), 180 ± 40 to 900 ± 200 (Salmonella spp. invA gene), 180 ± 40 to 1,300 ± 400 (P. aeruginosa ETA gene) genomic units per L of water. Shigella spp. ipaH gene was not quantifiable. Discrepancies were observed in terms of the occurrence of fecal indicators and bacterial pathogens. No correlations were observed between fecal indicators numbers and presence/absence of A. hydrophila lip (p = 0.245), Salmonella spp. invA (p = 0.433), Shigella spp. ipaH gene (p = 0.078), and P. aeruginosa ETA (p = 0.059) genes. Our results suggest that microbiological quality of bottled waters sold in Dhaka, Bangladesh is highly variable. To protect public health, stringent quality control is recommended for the bottled water industry in Bangladesh. Key words: bottled water, fecal indicator bacteria, quantitative PCR, bacterial pathogens, public health risk.

UV dosimetry for solar water disinfection (SODIS) carried out in different plastic bottles and bags

Solar water disinfection (SODIS) is a well-established inexpensive means of water disinfection in developing countries, but lacks an indicator to illustrate its end-point. A study of the solar UV dosage required for SODIS, in order to achieve a bacteria concentration below the detection limit for: Escherichia coli, Enterococcus spp. and Clostridium perfringens, in water in PET bottles, PE and PE/EVA bags showed disinfection to be most efficient in PE bags, with a solar UV (290–385 nm) dose of 389 kJ m−2 required. In parallel to the disinfection experiments, a range of polyoxometalate, semiconductor photocatalysis and photodegradable dye-based solar UV dosimeter indicators were tested under the same solar UV irradiation conditions. All three types of dosimeter produced indicators that largely and significantly change colour upon exposure to 389 kJ m−2 solar UV; further indicators are reported which change colour at higher doses and hence would be suitable for the less efficient SODIS containers tested. All indicators tested were robust, easy to use and inexpensive so as not to add significantly to the attractive low cost of SODIS. Furthermore, whilst semiconductor photocatalyst and photodegradable dye based indicators are disposable, one-use systems, the polyoxometalate based indicators recover colour in the dark overnight, allowing them to be reused, and hence further decreasing the cost of using indicators during the implementation of the SODIS method.

Antimicrobial activity of essential oils against multiresistant aeromonads and enterococci

Tese de mestrado. Biologia (Microbiologia Aplicada). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2014

Caracterização molecular da resistência a antimicrobianos em Escherichia coli produtoras de β-lactamases de espectro alargado isoladas em cães e estudo da partilha de clones bacterianos entre animais de companhia e coabitantes humanos

A pressão seletiva originada pelo uso excessivo de antimicrobianos na medicina humana e veterinária tem contribuído para a emergência de estirpes bacterianas multirresistentes, sendo os estudos mais escassos relativamente à sua presença nos animais de companhia. Porque os animais e os seus proprietários partilham o mesmo espaço habitacional, apresentando comportamentos de contacto próximo, existe uma hipótese elevada de transferência microbiana inter-espécie. Ante esta possibilidade é importante escrutinar o papel dos animais de companhia enquanto reservatórios de estirpes e de genes de resistência, bem como a sua envolvência na disseminação de estirpes bacterianas multirresistentes. Importa também, investigar o papel das superfícies e objetos domésticos partilhados por ambos, como potenciadores deste fenómeno. O objetivo deste trabalho foi, identificar o filogrupo e fazer a caracterização molecular dos genes que conferem resistência aos β-lactâmicos e às quinolonas, em quarenta isolados de Escherichia coli produtoras de β-lactamases de espectro alargado (ESBL), obtidas em zaragatoas fecais de cães consultados no Hospital Veterinário do ICBAS-UP. Complementarmente pretendeu-se inferir sobre a partilha de clones de Escherichia coli e Enterococcus spp. com elevadas resistências, em cinco agregados familiares (humanos e seus animais de companhia) assim como avaliar a potencial disseminação de estirpes multirresistentes no ambiente doméstico. Previamente foram recolhidas zaragatoas de fezes, pelo e mucosa oral dos animais e em alguns casos, dos seus proprietários, e ainda do ambiente doméstico. As zaragatoas foram processadas e as estirpes isoladas com base em meios seletivos. Foram realizados testes de suscetibilidade antimicrobiana de modo a estabelecer o fenótipo de resistência de cada isolado. O DNA foi extraído por varias metodologias e técnicas de PCR foram utilizadas para caracterização de filogrupos (Escherichia coli) e identificação da espécie (Enterococcus spp.). A avaliação da proximidade filogenética entre isolados foi efetuada por ERIC PCR e PFGE. No conjunto de quarenta isolados produtores de ESBL e/ou resistentes a quinolonas verificou-se que 47,5% pertenciam ao filogrupo A, havendo uma menor prevalência do filogrupo D (25,0%), B1 (17,5%), e B2 (10,0%).A frequência de resistência nestes isolados é factualmente elevada, sendo reveladora de uma elevada pressão seletiva. Com exceção de dois isolados, os fenótipos foram justificados pela presença de β-lactamases. A frequência da presença de genes foi: 47% blaTEM, 34% blaSHV, 24% blaOXA , 18% blaCTX-M-15, 8% blaCTX-M-2, 3% blaCTX-M-9. Nos isolados resistentes às quinolonas verificou-se maioritariamente a presença de mutações nos genes cromossomais gyrA e parC, e em alguns casos a presença de um determinante de resistência mediado por plasmídeo – qnrS. Nos cinco “agregados familiares” (humanos e animais) estudados foi observada uma partilha frequente de clones de E. coli e Enterococcus faecalis com múltiplas resistências, isolados em fezes e mucosa oral de cães e gatos e fezes e mãos dos respetivos proprietários, evidenciando-se assim uma possível transferência direta entre coabitantes (agregados A, C, D, E). Ficou também comprovado com percentagens de similaridade genotípica superiores a 94% que essa disseminação também ocorre para o ambiente doméstico, envolvendo objetos dos animais e de uso comum (agregados A, E). Os resultados obtidos reforçam a necessidade de um uso prudente dos antimicrobianos, pois elevados padrões de resistências terão um impacto não só na qualidade de vida dos animais mas também na saúde humana. Adicionalmente importa sensibilizar os proprietários para a necessidade de uma maior vigilância relativamente às formas de interação com os animais, bem como para a adoção de medidas higiénicas cautelares após essa mesma interação.

Avaliação do efeito de um probiótico na performance zootécnica e microbiota entérica em coelhos (Oryctolagus cuniculus) de produção

A cunicultura é uma atividade pecuária em crescente desenvolvimento e isso traduz-se em novos desafios. Durante muitos anos a criação de coelhos recorreu em demasia ao uso de antimicrobianos com o objetivo de tratar e prevenir o aparecimento de diversas doenças. Paralelamente, estes compostos foram também usados como “promotores de crescimento”, visando essencialmente uma melhoria da eficiência digestiva. Porém, o uso indiscriminado destas substâncias levantou questões de saúde pública, como a emergência de estirpes bacterianas multirresistentes e a inerente disseminação de genes de resistência, possivelmente transferíveis ao Homem através da cadeia alimentar. No presente, existe uma enorme pressão para a adoção de estratégias que possibilitem uma redução massiva na quantidade de antimicrobianos administrados a espécies pecuárias. Este trabalho visou contribuir para o estudo de uma alternativa ao uso de antimicrobianos - os probióticos – enquanto suplementos alimentares constituídos por microrganismos vivos capazes de equilibrar a microbiota intestinal do hospedeiro. Para tal, foram constituídos dois grupos de coelhos com base na alimentação: i) grupo antibiótico, com acesso a um alimento composto suplementado com antibióticos e ii) o grupo probiótico alimentado com a mesma dieta, mas sem antibióticos e inoculado com um probiótico constituído por Escherichia coli e Enterococcus spp.. Ao longo de 22 dias de estudo foram monitorizados alguns indicadores produtivos e efetuadas recolhas periódicas de fezes para estudo microbiológico. A análise dos resultados zootécnicos permitiram verificar que o uso de probióticos em detrimento de antibióticos parece promover o crescimento de coelhos, tornando-se um método mais rentável na produção cunícula. Através de genotipagem por ERIC-PCR e PFGE, pretendeu-se verificar se as estirpes estranhas ao trato gastrointestinal dos coelhos seriam capazes de coloniza-lo, permanecendo ao longo do tempo de estudo. O facto de as estirpes inoculadas no probiótico terem sido encontradas ao longo dos dias de estudo nos coelhos aos quais foram administradas, sugere que os efeitos observados na performance zootécnica estejam relacionados com as estirpes administradas no probiótico, pelo que este poderá ser um sistema viável na substituição de antibióticos na alimentação de coelhos de produção.

Factores asociados a fracaso terapéutico en pacientes con sepsis abdominal

Introducción: La sepsis severa de origen abdominal es la segunda causa de ingreso a UCI en Colombia con mortalidad de 30%, por lo que es necesario determinar factores asociados a evolución clínica tórpida para su identificación y manejo temprano y establecer pronóstico. Metodología: Se realizó un estudio de casos y controles de pacientes que ingresan a UCI con diagnóstico de sepsis abdominal. Se describieron las variables cuantitativas y cualitativas y se realizó regresión logística con las variables significativas para establecer las asociadas a fracaso terapéutico, definido como mortalidad. Resultados: Se incluyeron 235 pacientes, 62 casos y 173 controles, con edad promedio 58 años, en su mayoría hombres. El origen de infección más frecuente fue gastrointestinal, hígado y vía biliar. Se observó SOFA y APACHE II más elevados en los pacientes que fallecieron, así como persistencia de choque y SIRS a las 96 horas de seguimiento. En la regresión logística se encontraron las siguientes variables asociadas a fracaso terapéutico: edad, falla renal (OR 3.19, p 0.003), complicaciones cardiovasculares (OR 2.3, p 0.029), coagulopatía (OR 3.57, p 0.001, y la presencia de Enterococcus spp (OR 10.5, p 0.004). Discusión: La población descrita en el trabajo presenta características similares previas a lo encontrado en la literatura. Las variables asociadas a fracaso terapéutico encontradas, no están descritas previamente, especialmente falla renal y cardiovascular, y la presencia de Enterococcus spp, lo que permite establecerlos como factores de riesgo asociados a mortalidad en este tipo de pacientes, para hacer intervenciones médicas y quirúrgicas más tempranas.

Frequência de infecções urinárias em ambulatório : dados de um laboratório de Lisboa. Parte I

As infecções urinárias são uma das principais causas de doença em Portugal, variando conforme sejam infecções urinárias adquiridas na comunidade ou infecções urinárias nosocomiais. Neste estudo determinou-se a prevalência dos microrganismos, presentes nas amostras de urina obtidas pela técnica asséptica em doentes com infecções urinárias em ambulatório.Este estudo foi realizado no primeiro semestre do ano 2006, utilizando os dados recolhidos num laboratório de Lisboa. Foi um estudo observacional, descritivo e transversal. Foram incluídos todos os indivíduos que obtiveram um diagnóstico positivo na realização dos exames bacteriológicos (urinoculturas). Nos meses de Janeiro a Junho de 2006, primeiro semestre, foram realizadas 2820 urinoculturas, das quais 385 foram positivas. Destas, 334 (86,75%) pertenciam a indivíduos do sexo feminino e 53 a indivíduos sexo masculino (13,25%).A média de idades dos indivíduos foi de 55,25 anos (± 24,18 DP). As bactérias responsáveis pelas infecções do tracto urinário com maior frequência foram a Escherichia coli (63,6 %), Proteus spp.. (11,9 %), Enterococcus spp.. (7%) e Klebsiella spp.. (6%). Deste estudo concluiu-se que as percentagens verificadas de agentes infecciosos, responsáveis pelas infecções urinárias na comunidade, coincidem com padrões encontrados em estudos internacionais. Estas conclusões referem-se a um laboratório de Lisboa, carecendo de estudos semelhantes ao nível nacional, para caracterização do fenómeno em Portugal.

Frequência e susceptibilidade bacteriana em infecções urinárias : dados de um laboratório de Lisboa. Parte II

Este estudo teve como objectivo identificar os agentes etiológicos causadores de infecções do tracto urinário (ITU) em amostras de urina para determinar e comparar o perfil de resistência aos antibióticos nas bactérias isoladas em uroculturas, num laboratório em Lisboa (LUMILABO), durante um período de seis meses em 1997 (Maio a Outubro), com os de um período de seis meses nove anos depois, correspondentes ao 2º semestre de 2006. É umestudo observacional, descritivo e transversal, que inclui todos os indivíduos que obtiveram um diagnóstico positivo nos exames bacteriológicos num total de 3535 e 2676 uroculturas em 1997 e 2006, respectivamente, com identificação de 20 estirpes bacterianas.AE.coli foi a bactéria identificada com maior frequência em ambos os anos, seguida de P.mirabilis, Klebsiella spp. e Enterococcus spp. Emrelação à susceptibilidade aos antibióticos, verificou-se que em 1997 a E.coli, P.mirabilis e Klebsiella spp. apresentam elevada frequência de resistência aos antibióticos Ampicilina, Trimetroprim+Sulfametoxazol (SXT), e Ácido Nalidíxico, no caso da E.coli, e Furadantina no caso do P.mirabilis e Klebsiella spp.; verificou-se que em 2006 a E.coli apresenta maior resistência à Tobramicina, Norfloxacina (NOR) e Ciprofloxacina (CIP), o P.mirabilis à Ampicilina, SXT e Amoxicilina+Ácido Clavulânico, a Klebsiella spp. à Cefalexina, Nitrofurantuina e SXT, e o Enterococcus spp. à Tretraciclina, CIPe NOR. Este estudo fornece dados para o conhecimento dos diferentes agentes etiológicos mais frequentes nas ITU no laboratório LUMIBABO em períodos de seis meses distanciados de 1997 a 2006 e disponibiliza informação sobre os seus padrões de resistências, necessários para um tratamento empírico adequado.

Profiling of composition and metabolic activities of the colonic microflora of growing pigs fed diets supplemented with prebiotic oligosaccharides

It is evident that quantitative information on different microbial groups and their contribution in terms of activity in the gastrointestinal (GI) tract of humans and animals is required in order to formulate functional diets targeting improved gut function and host health. In this work, quantitative information on levels and spatial distributions of Bacteroides spp, Eubacterium spp, Clostridium spp, Escherichia coli, Bifidobacterium spp and Lactobacillus/Enterococcus spp. along the porcine large intestine was investigated using 16S rRNA targeted probes and fluorescent in situ hybridisation (FISH). Caecum, ascending colon (AC) and rectum luminal digesta from three groups of individually housed growing pigs fed either a corn-soybean basal diet (CON diet) or a prebiotic diet containing 10 g/kg oligofructose (FOS diet) or trans-galactooligosaccharides (TOS diet) at the expense of cornstarch were analysed. DAPI staining was used to enumerate total number of cells in the samples. Populations of total cells, Bacteroides, Eubacterium, Clostridium and Bifidobacterium, declined significantly (P < 0.05) from caecum to rectum, and were not affected by dietary treatments. Populations of Lactobacillus/ Enterococcus and E coli did not differ throughout the large intestine. The relative percent (%) contribution of each bacterial group to the total cell count did not differ between caecum and rectum, with the exception of Eubacterium that was higher in the AC digesta. FISH analysis showed that the sum of all bacterial groups made up a small percentage of the total cells, which was 12.4%, 21.8% and 10.3% in caecum, AC and rectum, respectively. This supports the view that in swine, the diversity of GI microflora might be higher compared to other species. In terms of microflora metabolic activity, the substantially higher numerical trends seen in FOS and TOS treatments regarding total volatile fatty acid, acetate concentrations and glycolytic activities, it could be postulated that FOS and TOS promoted saccharolytic activities in the porcine colon. (c) 2006 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Prebiotic effect of fruit and vegetable shots containing Jerusalem artichoke inulin : a human intervention study

The present study aimed to determine the prebiotic effect of fruit and vegetable shots containing inulin derived from Jerusalem artichoke (JA). A three-arm parallel, placebo-controlled, double-blind study was carried out with sixty-six healthy human volunteers (thirty-three men and thirty-three women, age range: 18–50 years). Subjects were randomised into three groups (n 22) assigned to consume either the test shots, pear-carrot-sea buckthorn (PCS) or plum-pear-beetroot (PPB), containing JA inulin (5 g/d) or the placebo. Fluorescent in situ hybridisation was used to monitor populations of total bacteria, bacteroides, bifidobacteria, Clostridium perfringens/histolyticum subgroup, Eubacterium rectale/Clostridium coccoides group, Lactobacillus/Enterococcus spp., Atopobium spp., Faecalibacterium prausnitzii and propionibacteria. Bifidobacteria levels were significantly higher on consumption of both the PCS and PPB shots (10·0 (sd 0·24) and 9·8 (sd 0·22) log10 cells/g faeces, respectively) compared with placebo (9·3 (sd 0·42) log10 cells/g faeces) (P < 0·0001). A small though significant increase in Lactobacillus/Enterococcus group was also observed for both the PCS and PPB shots (8·3 (sd 0·49) and 8·3 (sd 0·36) log10 cells/g faeces, respectively) compared with placebo (8·1 (sd 0·37) log10 cells/g faeces) (P = 0·042). Other bacterial groups and faecal SCFA concentrations remained unaffected. No extremities were seen in the adverse events, medication or bowel habits. A slight significant increase in flatulence was reported in the subjects consuming the PCS and PPB shots compared with placebo, but overall flatulence levels remained mild. A very high level of compliance (>90 %) to the product was observed. The present study confirms the prebiotic efficacy of fruit and vegetable shots containing JA inulin.