935 resultados para Reação em cadeia da polimerase - Teses
Resumo:
O papilomavrus humano (HPV) est associado a um largo espectro de leses em humanos e tem sido ligado carcinognese oral. O objetivo deste estudo foi investigar a presena do DNA do HPV em pacientes com carcinoma espinocelular de lbio e correlacion-la com aspectos clnicos e fatores de risco. Foram estudados 33 pacientes com carcinoma espinocelular de lbio. Destes, 30 pacientes foram positivos para o gene da beta-globina humana e ento foram testados para o DNA do HPV com uso da reação em cadeia de polimerase em duas etapas (PCR e nPCR) com os oligonucleotdeos iniciadores MY11/MY09 e GP5+/ GP6+. O DNA do HPV foi detectado em 43,33% dos 30 pacientes analisados. No houve associao com os fatores de risco analisados.
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Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
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O objetivo deste trabalho foi caracterizar biolgica e molecularmente trs isolados de Sugarcane mosaic virus (SCMV) de lavouras de milho, analis-los filogeneticamente e discriminar polimorfismos do genoma. Plantas com sintomas de mosaico e nanismo foram coletadas em lavouras de milho, no Estado de So Paulo e no Municpio de Rio Verde, GO, e seus extratos foliares foram inoculados em plantas indicadoras e submetidos anlise sorolgica com antissoros contra o SCMV, contra o Maize dwarf mosaic virus (MDMV) e contra o Johnsongrass mosaic virus (JGMV). Mudas de sorgo 'Rio' e 'TX 2786' apresentaram sintomas de mosaico aps a inoculao dos trs isolados, e o DAS-ELISA confirmou a infeco pelo SCMV. O RNA total foi extrado e usado para amplificao por transcriptase reversa seguida de reação em cadeia de polimerase (RT-PCR). Fragmentos especficos foram amplificados, submetidos anlise por polimorfismo de comprimento de fragmento de restrio (RFLP) e sequenciados. Foi possvel discriminar os gentipos de SCMV isolados de milho de outros isolados brasileiros do vrus. Alinhamentos mltiplos e anlises dos perfis filogenticos corroboram esses dados e mostram diversidade nas sequncias de nucleotdeos que codificam para a protena capsidial, o que explica o agrupamento separado desses isolados e sugere sua classificao como estirpes distintas, em lugar de simples isolados geogrficos.
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FUNDAMENTO: Treinamento fsico (TF) aumenta a sensibilidade dos hormnios tireoidianos (HT) e a expresso gnica de estruturas moleculares envolvidas no movimento intracelular de clcio do miocrdio, enquanto a restrio alimentar (RIA) promove efeitos contrrios ao TF. OBJETIVO: Avaliar os efeitos da associao TF e RIA sobre os nveis plasmticos dos HT e a produo de mRNA dos receptores HT e estruturas moleculares do movimento de clcio do miocrdio de ratos. MTODOS: Utilizaram-se ratos Wistar Kyoto divididos em: controle (C, n = 7), RIA (R50, n = 7), exerccio fsico (EX, n = 7) e exerccio fsico + RIA (EX50, n = 7). A RIA foi de 50% e o TF foi natao (1 hora/dia, cinco sesses/semana, 12 semanas consecutivas). Avaliaram-se as concentraes sricas de triiodotironina (T3), tiroxina (T4) e hormnio tireotrfico (TSH). O mRNA da bomba de clcio do retculo sarcoplasmtico (SERCA2a), fosfolamban (PLB), trocador Na+/Ca+2 (NCX), canal lento de clcio (canal-L), rianodina (RYR), calsequestrina (CQS) e receptor de HT (TR1 e TR1) do miocrdio foram avaliados por reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. RESULTADOS: RIA reduziu o T4, TSH e mRNA do TR1 e aumentou a expresso da PLB, NCX e canal-L. TF aumentou a expresso do TR1, canal-L e NCX. A associao TF e RIA reduziu T4 e TSH e aumentou o mRNA do TR1, SERCA2a, NCX, PLB e correlao do TR1 com a CQS e NCX. CONCLUSO: Associao TF e RIA aumentou o mRNA das estruturas moleculares clcio transiente, porm o eixo HT-receptor no parece participar da transcrio gnica dessas estruturas.
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Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
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Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
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Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
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A importncia do co como reservatrio de L. infantum chagasi no meio urbano tem estimulado a realizao de inmeros trabalhos de avaliao de tcnicas de diagnstico, uma vez que este procedimento, quando realizado corretamente, torna-se um importante passo na preveno da doena em humanos. Dentre os mtodos de diagnstico, as tcnicas moleculares tm adquirido destaque. Objetivou-se neste trabalho verificar o desempenho da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e da PCR em tempo real (qPCR) para diagnstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) utilizando diferentes amostras biolgicas. Para tanto foram utilizados 35 ces provenientes de uma rea endmica para LVC, onde foram utilizados para o diagnstico molecular, aspirado de medula ssea, fragmentos de linfonodo e bao. Neste estudo a qPCR foi capaz de detectar um maior nmero de animais positivos quando comparada com a PCR. J entre as diferentes amostras biolgicas utilizadas no foi observada diferena significativa na deteco de DNA de L. infantumchagasi por meio da PCR e qPCR. Mesmo assim, considerando a facilidade de obteno, o linfonodo pode ser considerada como a melhor amostra para diagnstico molecular da infeco por L. infantum chagasi.
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OBJETIVO: identificar espcies de lactobacilos isolados do contedo vaginal de mulheres saudveis e assintomticas; determinar as espcies mais prevalentes e caracteriz-las fenotipicamente. MTODOS: lactobacilos foram isolados em meio seletivo a partir de amostras de contedo vaginal de 135 mulheres, sem queixa de corrimento e com diagnstico laboratorial negativo para infeces vaginais, acompanhadas em um ambulatrio de Planejamento Familiar. Os isolados foram identificados por PCR multiplex e, quando necessrio, submetidos ao sequenciamento do gene RNAr 16S. Foram tambm avaliados quanto acidificao do meio de cultura, produo de cido lctico, de H2O2, bacteriocinas e a capacidade de adeso s clulas epiteliais. RESULTADOS: oitenta e trs cepas de lactobacilos foram isoladas e identificadas, sendo as espcies predominantes L. crispatus (30,1%), L. jensenii (26,5%), L. gasseri (22,9%) e L. vaginalis (8,4%). Apenas 20 destes isolados no produziram H2O2 em quantidades detectveis. Das 37 linhagens selecionadas para teste de adeso a clulas epiteliais, 12 apresentaram adeso entre 50 a 69%, 10 apresentaram 70% ou mais, e as restantes pouca ou nenhuma adeso. Nenhum dos isolados produziu bacteriocinas. CONCLUSES: as espcies de lactobacilos mais prevalentes em mulheres sem vulvovaginites, isoladas em meio de cultura seletivo e identificadas por mtodos moleculares, foram L. crispatus, L. jensenii e L. gasseri. Alm de mais frequentes, tais linhagens tambm apresentaram melhor produo de H2O2 e atingiram menores valores de pH em meio de cultura.
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Dezoito bovinos foram inoculados com Toxoplasma gondii e distribudos aleatoriamente em trs grupos de seis bovinos cada: GI (2,5x10(5) oocistos da cepa P), GII (5,0x10(6) taquizotos da cepa RH) e GIII (controle). Exames clnicos, sorolgicos e parasitmicos foram realizados. Pesquisas do parasito, por meio da bioprova e pela tcnica de Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), foram realizadas no smen e em fragmentos de musculatura esqueltica, linfonodos, crebro, retina, bao, fgado, pulmo, testculo, epiddimo e vescula seminal. Amostras de sangue e smen foram colhidas nos dias -2, -1, 1, 3, 5, 7, 14 e, semanalmente, at o 84 dia ps-infeco (DPI). Os bovinos inoculados (GI e GII) apresentaram hipertermia do 3 ao 16 DPI. Anticorpos contra T. gondii foram detectados (IFI) no 5 DPI (1:16), em ambos grupos inoculados (oocistos e taquizotos), atingindo picos de 1:4096 no 7 DPI. Surtos parasitmicos ocorreram em todos os bovinos infectados, principalmente do 7 ao 28 DPI, independente da cepa e inculo utilizados. O bioensaio revelou a presena do parasito em amostras seminais dos bovinos infectados com oocistos (GI) e taquizotos (GII), em diversas datas experimentais, entre o 7 e 84 DPI. Parasitismo tissular por T. gondii foi diagnosticado por meio da bioprova e pela tcnica da PCR, em vrios fragmentos de tecidos e/ou rgos. Os achados sugerem a possibilidade da ocorrncia da transmisso sexual do T. gondii na espcie bovina.
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Pesquisou-se a ocorrncia de Escherichia coli toxignica, em queijo produzido com leite no pasteurizado, na Regio Centro Oeste do Brazil. Foram utilizados 50 queijos adquiridos em diferentes supermercados. As amostras isoladas foram classificadas por sorogrupo, avaliadas em relao sensibilidade para 13 agentes antimicrobianos e submetidas reação em cadeia da polimerase para a presena de genes caractersticos de E. coli verotoxignica (VTEC) e enterotoxignica (ETEC). E. coli foi recuperada em 48(96,0%) dos queijos. Foram identificados os sorogrupos O125 (6,0%), O111 (4,0%), O55 (2,0%) e O119 (2,0%). Trs (6,0%) amostras de E. coli foram classificadas como VTEC e uma (2,0%) como ETEC. Os maiores ndices de resistncia foram verificados para: cefalotina (60,0%), cido nalidxico (40,0%), doxiciclina (33,0%), tetraciclina (31,0%) e ampicilina (29,0%).
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Determinou-se a prevalncia dos genes de virulncia expressando fimbrias, produo de hemolisina, colicina e aerobactina em cepas de Escherichia coli obtidas do trato genital de vacas saudveis que no apresentam sinais clnicos indicativos de infeco. A presena dos genes responsveis pela expresso de fimbrias (pap, sfa, afa) foi avaliada atravs de reação em cadeia da polimerase utilizando primers especificos para cada um dos genes, nenhum deles foi detectado em qualquer uma das cepas isoladas. A prevalncia dos fatores de virulncia foi de 90,4%, 69,8%, 28,5% para colicina, hemolisina e aerobactina, respectivamente. A anlise da patogenicidade das cepas do trato genital pode contribuir para o entendimento do comportamento das cepas de E. coli.
Resumo:
Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
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Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
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