Genetic polymorphism of Streptococcus mutans in Brazilian family members

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

O objetivo deste estudo foi determinar, através da técnica de reação em cadeia da polimerase com primers arbitrários (AP-PCR) a capacidade de diferenciar clones geneticamente distintos de Streptococcus mutans e estabelecer o grau de similaridade intrafamilial para os isolados. Para o presente estudo, foram selecionadas 22 famílias brasileiras. Amostras de saliva foram coletadas de todos os membros das famílias. Das crianças com idade entre 5-18 meses obteve-se amostras de placa dental. Após o isolamento das colônias com características morfológicas, realizou-se a identificação bioquímica com base na fermentação de carboidratos. O polimorfismo genético de Streptococcus mutans foi pesquisado através da técnica de AP-PCR utilizando-se o primer OPA-13. Os fragmentos de DNA obtidos foram amplificados e comparados através de eletroforese em gel de agarose. Dentre as espécies identificadas nas 22 famílias analisadas, o pai apresentou cepas com similaridade genética aos dos bebês em três das famílias analisadas; em 12 famílias a mãe apresentou cepas com similaridade com as cepas de Streptococcus mutans do bebê e 7 bebês apresentaram cepas de S. mutans com similaridade genética das cepas do irmão mais velho. A técnica de AP-PCR foi eficaz em demonstrar a heterogeneidade genética de Streptococcus mutans entre os membros das famílias brasileiras analisadas.

The aim of this study was to determine whether random amplified polymorphic DNA (AP-PCR) analysis is able to differentiate genetically different clones of mutans streptococci, in 22 Brazilian family members. Stimulated saliva samples were collected from fathers, mothers and infants. For 5-18 months babies with erupting primary dentition, plaque samples were collected using sterile tooth pick tips. From these samples, mutans streptococci were isolated on SB-20 agar plates. After growth, representative colonies were identified by biochemical methods on the basis of carbohydrate fermentation. Streptococcus mutans isolates were obtained from all family members and AP-PCR typed separately with a random primer (OPA-13). Bacterial cell lysates were used as template in PCR reactions and the amplified DNA fragments obtained were compared by agarose gel electrophoresis. Results demonstrated that the father shared the baby's genotype in three families and the mother shared the baby's genotype in 12 families seven babies harbored Streptococcus mutans strains similar to those of their siblings. The technique was able to demonstrate the genetic Streptococcus mutans in Brazilian family members.