27 resultados para Cromatografia líquida de alta resolução (HPLC)
em Biblioteca de Teses e Dissertações da USP
Resumo:
No presente trabalho foram estudadas as separaes de 18 flavonides (9 agliconas e 9 glicosdeos) pelas tcnicas de Cromatografia Líquida de Alta Eficincia em fase reversa (RP-HPLC) e Cromatografia Micelar Eletrocintica em fluxo reverso (RF-Meck). Em ambas as tcnicas foram avaliados solventes puros (metanol, acetonitrila e tetrahidrofurano) e suas misturas como formas de promover a variao de seletividade, atravs da modificao da fase mvel em HPLC, e da natureza do aditivo orgnico em RF-Meck. Nos estudos efetuados em HPLC utilizando-se gradiente, pode-se comprovar a possibilidade da modelagem do fator de reteno em fun da proporo de solvente utilizados (MeOH, ACN, THF e suas misturas). Pode-se ainda, com base nos dados de reteno e na anlise hierrquica de c1usters, diferenciar quatro diferentes grupos de sistemas cromatogrficos com diferentes seletividades para flavonides agliconas, e outros quatro com diferentes seletividades para glicosdeos. Os sistemas cromatogrficos mais ortogonais (cada um pertencente a um grupo de seletividade) foram aplicados na separao de uma planta modelo (Azadirachta indica), de onde pode-se escolher a fase mvel mais seletiva para se otimizar a separao dos flavonides glicosilados presentes nas folhas desta planta. No mtodo final otimizado pode-se identificar e quantificar cinco dos flavonides majoritrios presentes, sendo trs glicosdeos de quercetina (rutina, isoquercitrina e quercitrina) e dois glicosdeos de kaempferol (astragalin e nicotiflorin), em amostras de duas diferentes procedncias (Piracicaba-SP e Silvnia-GO). Nos estudos envolvendo a separao dos dezoito flavonides por RFMEKC pode-se comprovar diferenas significativas de seletividade quando se varia a natureza do solvente orgnico utilizado como aditivo, alm de se observar tendncias na migrao em funo das propriedades do solvente adicionado e da estrutura molecular do flavonide. O solvente de menor eficincia para separao dos flavonides foi o MeOH. Atravs da anlise dos eletroferogramas obtidos atravs de um planejamento experimental de misturas, e das trocas de pares crticos observadas nos vrios eletrlitos utilizados, obteve-se um mtodo de separao com apenas um par crtico em menos de 12 minutos de corrida. O coeficiente de variao obtido para o fator de reteno foi de 1,5% e para rea de 3%, considerando-se cinco injees. O mtodo desenvolvido foi aplicado com sucesso na identificao dos flavonides majoritrios presentes na planta modelo (Neem), obtendo-se o mesmo resultado do estudo anterior. Como forma de avaliar a concentrao de flavonides totais presentes em espcies vegetais comum a anlise de extratos aps hidrlise cida (converso de todos glicosdeos em agliconas). Desta forma otimizou-se uma metodologia de separao em RP-HPLC de 8 flavonides agliconas comumente presentes em alimentos e extratos vegetais de uso cosmtico. A otimizao foi efetuada mediante um planejamento experimental de misturas, para escolha da fase mvel mais seletiva, e de um planejamento fatorial composto central, para otimizao das condies de gradiente. O mtodo obtido foi o mais rpido j visto dentro da literatura consultada. A separao em linha de base foi efetuada em menos de 15 minutos, com coeficientes de variao de rea entre 0,1 e 1,8%, coeficiente de correlao de 0,9993 a 0,9994 na faixa de 5 a 100 µg/mL, e limites de quantificao estimados na faixa de 0,1 a 0,21µg/mL. O mtodo desenvolvido foi aplicado na otimizao das condies de hidrlise de um extrato de Neem. A otimizao foi efetuada atravs de metodologia de superfcie de resposta, levando-se em considerao a concentrao de cido adicionada, o tempo de reao, a temperatura, e a concentrao de um antioxidante (cido ascrbico) adicionado. O resultado da otimizao foi uma metodologia de hidrlise com tempo de reao igual a 5 minutos, utilizando-se 1,4 mol/L de HCI, 119C e 500 µg/mL de cido ascrbico. Atravs das metodologias de anlise e de hidrlise desenvolvidas pode-se constatar a presena e quantificar no extrato de Neem os flavonides agliconas quercetina, kaempferol e miricetina. Com o objetivo de se avaliar quais os componentes presentes em extratos vegetais so os responsveis pelo poder antioxidante atribudo a determinadas plantas, foi montado um sistema de avaliao de poder antioxidante \"on-line\" com reao ps-coluna em HPLC (baseado na literatura) utilizando-se como \"radical livre modelo\" o ABTS. A anlise da planta modelo (Neem) neste sistema mostrou que os flavonides glicosilados identificados nas partes anteriores deste trabalho so os responsveis pelo poder antioxidante atribudo a esta planta. De posse desta informao, e visando a obteno de extratos para aplicaes cosmticas com poder antioxidante, modelou-se a extrao dos flavonide do Neem em funo da composio do solvente extrator (gua, etanol , propilenoglicol e suas misturas), de acordo com um planejamento simplex centride ampliado. Alm da previso da concentrao dos princpios ativos pode-se ainda prever outras propriedades dos extratos obtidos, tais como, ndice de refrao e densidade, muitas vezes constituintes de especificaes tcnicas de acordo com as aplicaes a que se destinam (cremes, xamps, etc).
Resumo:
O metabolismo do triptofano (Trp) se d pela via das quinureninas (QUIN), pela via serotoninrgica (SER) e pela via das aminas trao. A primeira gera QUIN e uma variedade de outros metablitos secundrios. Quando conduzida pela enzima indolamina 2,3 dioxigenase (IDO) contribui para os fenmenos de tolerncia e imune escape de clulas tumorais; e quando conduzida pela triptofano 2,3 dioxigenase (TDO) no fgado, participa na sntese da niacina e NAD. A via SER leva formao do neurotransmissor serotonina (SER), que pode gerar o hormnio melatonina (MEL), respectivamente e outros metablitos biologicamente ativos. Outra via menos estudada, a via das aminas trao, produz produtos neuroativos. Dada a abrangncia e importncia das rotas metablicas do Trp, ns desenvolvemos e validamos uma metodologia bioanaltica robusta, seletiva e sensvel por cromatografia líquida de alta eficincia (HPLC), acoplado espectrometria de massas (MS) para a determinao simultnea do Trp e seus 15 metablitos. Para tanto, escolhemos para a avaliao das trs vias, linhagens de glioma humano. A escolha por este tipo celular deveu-se ao grande interesse de estudos de metabolismo de Trp em clulas tumorais, no qual clulas de glioma tem sido modelo. Nos ensaios com as clulas de glioma acompanhamos os efeitos de um indutor e inibidores da primeira etapa de metabolizao do Trp pela via das quinureninas, ou seja, IFN-γ (indutor da IDO), 1-metiltriptofano (1-MT; inibidor competitivo da IDO) e 680C91 (inibidor seletivo da TDO). Pudemos observar o impacto que a induo ou a inibio do primeiro passo teve sobre os metablitos subsequentes e as diferenas no metabolismo das duas linhagens estudadas, A172 e T98G. A linhagem T98G s tem atividade de IDO, enquanto que a A172 tem tanto atividade IDO quanto TDO. A induo por IFN-γ mostrou que essa citocina no s atua na formao da via QUIN, mas possui um impacto modesto nas demais rotas. Observamos tambm que a inibio do 1-MT mostrou seu impacto nos metablitos invdividualmente, do que a simples relao Trp-QUIN. Contudo, nosso resultados nos permitiu mostrar pela primeira vez a descrio completa dessas vias, em especial nessas linhagens celulares, podendo supor estratgias teraputicas nessas rotas que esto relacionadas a progresso ou no tumoral.
Resumo:
Processos de fotodegradao de compostos orgnicos txicos tm sido bastante estudados. Este trabalho trata da aplicao do processo foto-Fenton para a degradao de atrazina em gua (composto modelo). O efeito das concentraes dos seguintes compostos foi avaliado: perxido de hidrognio (2 a 6 mmol L-1) e ferrioxalato de potssio (0,2 a 1 mmol L-1). Os experimentos foram realizados em um reator com lmpada UV - 8W (254nm). O processo de fotodegradao foi monitorado por medidas de espectrofotometria de absoro molecular automatizada por injeo seqencial (SIA) para determinao de perxido de hidrognio e por cromatografia a lquido de alta eficincia (CLAE) para determinao de atrazina e metablitos. Os experimentos demonstram que o processo de foto-Fenton vivel para o tratamento de atrazina em gua.
Resumo:
A necropsia essencial para a identificao da causa de morte e dos processos que culminaram no bito do animal. O presente estudo visou pesquisa da real ocorrncia de morte sbita e inesperada em ces submetidos necropsia, e determinao da discrepncia entre as suspeitas dos proprietrios em relao ao estado de sade prvio e causa de morte de seus ces, quando comparadas s concluses necroscpicas. Este trabalho tambm focou nas alteraes morfolgicas e funcionais nas glndulas adrenais de ces necropsiados, a fim de se estudar a aplicao de possveis marcadores da resposta adrenal ao estresse sofrido pelo animal na iminncia do bito. Foram utilizados os dados de 82 ces necropsiados na FMVZ-USP para anlise da ocorrncia real de morte sbita nestes animais. As alteraes morfolgicas nas adrenais de 46 ces necropsiados foram avaliadas atravs de anlises morfomtricas e histopatolgicas. Tambm foram avaliados os ndices de proliferao e apoptose nas clulas do crtex adrenal em relao causa de morte do animal, atravs da marcao imunoistoqumica para o antgeno nuclear de proliferao celular (PCNA) e para BAX e Bcl-2, protenas envolvidas na regulao da apoptose. A anlise das alteraes funcionais sofridas pelas adrenais focou na quantificao das concentraes das catecolaminas adrenalina e noradrenalina na medula adrenal dos ces por cromatografia líquida de alta eficincia com deteco eletroqumica (CLAE-DE). Dentre os resultados encontrados, a suspeita do proprietrio de que seu co sofreu uma morte sbita e inesperada muito maior do que a real ocorrncia deste tipo de morte em ces, sendo o bito por decorrncia de complicaes de doenas muito mais frequente. As caractersticas morfomtricas das adrenais dos ces apresentaram maior influncia pelo peso corpreo do animal e pela presena ou ausncia de hiperplasia cortical do que pela associao com doenas crnicas ou condies agudas. Ces que vieram a bito em decorrncia de complicaes de doenas crnicas exibiram fibrose em regio corticomedular e focos de infiltrado inflamatrio, ausentes nos animais com morte sbita ou doenas agudas, alm de maior ocorrncia de hiperplasia adrenocortical. Ces que sofriam de alteraes cardacas crnicas apresentaram alteraes histopatolgicas significativas mais marcantes em suas adrenais, como necrose, fibrose e depleo vacuolar cortical. Por outro lado, a congesto severa nas adrenais foi um achado mais frequente nos animais previamente saudveis que sofreram morte sbita ou que vieram a bito por doenas agudas. A avaliao dos ndices de proliferao celular e apoptose no crtex das adrenais atravs da marcao imunoistoqumica para PCNA e BAX e Bcl-2, respectivamente, no apresentou potencial relevante para o estudo dos efeitos do estresse por doenas crnicas sobre as adrenais de ces. As concentraes de adrenalina e noradrenalina na medula adrenal se mostraram muito maiores em ces machos quando comparados s fmeas. Os achados deste estudo podem auxiliar nas concluses da necropsia, sendo especialmente relevantes em casos mdico-legais, nos quais todos os achados possveis devem ser relatados e analisados a fim de se prover um diagnstico preciso, seguro e incontroverso
Resumo:
Introduo: Diante das mudanas nos hbitos de consumo alimentar da populao brasileira, suplementos vitamnicos e alimentos enriquecidos so veculos comumente empregados para atender as necessidades de ingesto de micronutrientes. A diversidade de suplementos vitamnicos comercializados atualmente leva necessidade de desenvolvimento de mtodos analticos de fcil execuo e alta produtividade. Informaes confiveis sobre os teores de vitaminas podero ser obtidas somente com mtodos analticos validados. Objetivos: Validar metodologias analticas e avaliar o teor de vitaminas antioxidantes em suplementos adquiridos no comrcio do municpio de So Paulo - Brasil, o efeito do armazenamento nestes compostos e confrontar os valores analisados com os valores declarados na rotulagem. Mtodos: As metodologias analticas para determinao de vitaminas antioxidantes por cromatografia líquida de alta eficincia com detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD) e de vitamina C por titulao potenciomtrica foram validadas para as matrizes slidas, oleosas e líquidas de suplementos vitamnicos. A estabilidade das vitaminas foi avaliada a cada 6 meses durante 12 meses de armazenamento e a avaliao da rotulagem foi realizada de acordo com as legislaes vigentes no Brasil. Resultados: Para os mtodos cromatogrficos, os limites de deteco (LDs) e de quantificao (LQs) variaram entre 0,3 e 4,3 g/mL, e entre 0,5 e 14,0 g/mL respectivamente. As recuperaes dos padres adicionados nas matrizes variaram entre 92 por cento e 109 por cento e entre 86 por cento e 108 por cento no material de referncia. A repetitividade foi calculada pelo desvio padro relativo (RSD), apresentando valores entre 0,2 por cento e 9,6 por cento . Para a determinao de vitamina C pelo mtodo potenciomtrico, o LD e o LQ foram respectivamente 1 mg e 3 mg; a recuperao no material de referncia foi de 99,8 por cento e a preciso variou entre 0,4 e 3,9 por cento . Das 57 amostras avaliadas, 59 por cento e 35 por cento apresentaram teores de vitaminas A e E respectivamente, abaixo dos valores declarados no rtulo; por outro lado, 20 por cento das amostras apresentaram teores de vitamina E acima dos valores declarados. Em relao aos teores de vitamina C, 60 por cento das amostras estavam de acordo com os valores declarados. O estudo da estabilidade demonstrou degradao significativa das vitaminas A, E e C em aproximadamente 90 por cento das amostras com 12 meses de armazenamento. Na avaliao da rotulagem dos suplementos vitamnicos, 47 das amostras apresentaram uma ou mais irregularidades. Concluso: Os mtodos propostos se mostraram adequados para anlise de diferentes matrizes de suplementos vitamnicos. Os resultados das anlises de vitaminas nestes produtos mostraram a necessidade urgente de monitoramento em conjunto com aes de fiscalizao, pois verificou-se que a maioria das amostras no atenderam a legislao, principalmente quanto aos teores declarados na informao nutricional da rotulagem. A sobredosagem de vitaminas pode ser necessria para manter os teores declarados durante o armazenamento, porm, a quantidade adicional de vitamina a ser includa no suplemento deve estar dentro de limites seguros e depende de cada amostra, pois alm da matriz, diversos fatores relacionados aos compostos e embalagem tambm podem influenciar na estabilidade das vitaminas.
Resumo:
O presente trabalho est fundamentado no desenvolvimento de uma metodologia e/ou uma tecnologia de obteno e caracterizao de filtros pticos de interferncia de banda passante varivel [C.M. da Silva, 2010] e de banda de corte variveis, constitudos por refletores dieltricos multicamadas de filmes finos intercalados por cavidades de Fabry-Perot no planares com espessuras linearmente variveis, que apresentam a propriedade do deslocamento linear da transmitncia mxima espectral em funo da posio, isto , um Filtro de Interferncia Varivel (FIV). Este mtodo apresenta novas e abrangentes possibilidades de confeco de filtros pticos de interferncia varivel: lineares ou em outras formas desejadas, de comprimento de onda de corte varivel (passa baixa ou alta) e filtros de densidade neutra varivel, atravs da deposio de metais, alm de aplicaes em uma promissora e nova rea de pesquisa na deposio de filmes finos no uniformes. A etapa inicial deste desenvolvimento foi o estudo da teoria dos filtros pticos dieltricos de interferncia para projetar e construir um filtro ptico banda passante convencional de um comprimento de onda central com camadas homogneas. A etapa seguinte, com base na teoria ptica dos filmes finos j estabelecida, foi desenvolver a extenso destes conhecimentos para determinar que a variao da espessura em um perfil inclinado e linear da cavidade entre os refletores de Bragg o principal parmetro para produzir o deslocamento espacial da transmitncia espectral, possibilitando o uso de tcnicas especiais para se obter uma variao em faixas de bandas de grande amplitude, em um nico filtro. Um trabalho de modelagem analtica e anlise de tolerncia de espessuras dos filmes depositados foram necessrios para a seleo da estratgia do \"mascaramento\" seletivo do material evaporado formado na cmara e-Beam (eltron-Beam) com o objetivo da obteno do filtro espectral linear varivel de caractersticas desejadas. Para tanto, de acordo com os requisitos de projeto, foram necessrias adaptaes em uma evaporadora por e-Beam para receber um obliterador mecnico especialmente projetado para compatibilizar os parmetros das tcnicas convencionais de deposio com o objetivo de se obter um perfil inclinado, perfil este previsto em processos de simulao para ajustar e calibrar a geometria do obliterador e se obter um filme depositado na espessura, conformao e disposio pretendidos. Ao final destas etapas de modelagem analtica, simulao e refinamento recorrente, foram determinados os parmetros de projeto para obteno de um determinado FIV (Filtro de Interferncia Varivel) especificado. Baseadas nos FIVs muitas aplicaes so emergentes: dispositivos multi, hiper e ultra espectral para sensoriamento remoto e anlise ambiental, sistemas Lab-on-Chip, biossensores, detectores chip-sized, espectrofotometria de fluorescncia on-chip, detectores de deslocamento de comprimento de onda, sistemas de interrogao, sistemas de imageamento espectral, microespectrofotmetros e etc. No escopo deste trabalho se pretende abranger um estudo de uma referncia bsica do emprego do (FIV) filtro de interferncia varivel como detector de varredura de comprimento de ondas em sensores biolgicos e qumicos compatvel com ps processamento CMOS. Um sistema bsico que constitudo por um FIV montado sobre uma matriz de sensores pticos conectada a um mdulo eletrnico dedicado a medir a intensidade da radiao incidente e as bandas de absoro das molculas presentes em uma cmara de deteco de um sistema prprio de canais de microfluidos, configurando-se em um sistema de aquisio e armazenamento de dados (DAS), proposto para demonstrar as possibilidades do FIV e para servir de base para estudos exploratrios das suas diversas potencialidades que, entre tantas, algumas so mencionadas ao longo deste trabalho. O prottipo obtido capaz de analisar fluidos qumicos ou biolgicos e pode ser confrontado com os resultados obtidos por equipamentos homologados de uso corrente.
Resumo:
O setor agroindustrial tem se expandido muito nos ltimos anos, levando o pas a um aumento na gerao de resduos agroindustriais, sendo que a maior parte deles ainda descartada no meio ambiente, sem tratamento adequado, ou utilizada na alimentao animal, destinos que a priori, no geram ganhos econmicos para a agroindstria alm de representarem gargalos logsticos e ambientais na sua disposio. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivos otimizar o processo de extrao de compostos bioativos, avaliar in vitro as atividades antioxidante, por meio da desativao de espcies reativas de oxignio, e anti-inflamatria, bem como determinar a composio fenlica dos resduos agroindustriais a saber: pelcula de amendoim (Arachis hypogaea) (cultivares IAC886 e IAC505), pimenta-rosa (Schinus terebinthifolius Raddi) e pimenta-do-reino (Piper Nigrum L). O processo de otimizao da extrao de compostos antioxidantes foi realizado utilizando dois processos de extrao, extrao convencional e subcrtica, em delineamento composto central rotacional, utilizando como variveis a temperatura e tempo e a presso e temperatura, respectivamente, com os solventes etanol 80%, gua e propilenoglicol 80%. Durante o processo de otimizao a atividade antioxidante foi avaliada pelo mtodo de sequestro do radical ABTS. Os melhores resultados foram obtidos para a extrao convencional com os solventes etanol 80%, gua e propilenoglicol 80%. A pelcula de amendoim (IAC505) apresentou as maiores atividades antioxidantes (1.396,67, 580,44 e 859,89 μmol.g-1 em equivalentes de trolox, para os solventes etanol 80%, gua e propilenoglicol 80%, respectivamente). A partir dos resultados obtidos para os solventes testados, utilizando a extrao convencional, foram feitas outras anlises de atividade antioxidante considerando o tempo e temperatura ideal de extrao. Foram realizadas anlises de avaliao da capacidade de reduo de Folin-Ciocalteau e potencial de desativao dos radicais livres sintticos (DPPH e ABTS) e espcies reativas de oxignio (radicais peroxila, superxido e cido hipocloroso). O solvente de extrao que apresentou melhores resultados em todos os ensaios foi o etanol 80%, sendo, portanto o solvente utilizado nas anlises subsequentes. A partir da definio do melhor sistema extrator foram realizadas anlises da composio fenlica, por meio das tcnicas de cromatografia líquida de alta eficincia em modo analtico (HPLC-RP), cromatografia gasosa acoplada com espectrometria de massas (GC-MS), e avaliao in vitro da atividade anti-inflamatria. Foram identificados nos resduos estudados procianidinas B1 e B2, cido p-cumrico, miricetina, cido ferlico, cido sirngico, cido sinpico, epicatequina e catequina. A pimenta-do-reino diminui significativamente os nveis de TNF-α e nitritos, reduzindo assim o processo inflamatrio gerado. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram que estes resduos agroindstrias possuem grande potencial biolgico, podendo assim ser melhores aproveitados tanto pela indstria de alimentos quanto pela indstria farmacutica.
Resumo:
A indstria de alimentos est constantemente desenvolvendo produtos que fornecem, alm de nutrientes, benefcios adicionais sade, tais como os enriquecidos com vitaminas. A vitamina D3 (colecalciferol) sintetizada na pele durante a exposio da luz solar, controla a homeostase de clcio e fsforo, metabolismo sseo, presso arterial e reabsoro renal de clcio. O processo de microencapsulao vem sendo bastante aplicado em alimentos e um dos objetivos principais o controle da liberao do agente ativo no momento e local desejado. A tecnologia de spray chilling interessante para a microencapsulao de vitaminas lipossolveis. O objetivo deste trabalho foi microencapsular vitamina D3, utilizando o mtodo de spray chilling para a produo das micropartculas lipdicas slidas (MLS). Para produo das MLS utilizou-se gordura vegetal com ponto de fuso em torno de 48 C como carreador. Trs tratamentos foram estabelecidos: sem aditivos (T1), com adio de 1% de cera de abelha (T2) e com 1% de lecitina de soja (T3). As micropartculas foram caracterizadas quanto morfologia por microscopia eletrnica de varredura, tamanho mdio por difrao a laser, espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e foi analisada a estabilidade da vitamina D3 durante o armazenamento a 10 e 25 C, por meio de quantificaes peridicas em cromatografia líquida de alta eficincia (CLAE). As micropartculas obtidas foram esfricas, semelhantes morfologicamente e com distribuio monocaudal de partculas. O tamanho mdio das partculas variou em funo dos seus ingredientes, sendo que as micropartculas produzidas apenas com vitamina e gordura foram menores em relao s demais (83,0% < 100 µm). A espectroscopia na regio do infravermelho (FTIR) demonstrou que no ocorreu interao entre os ingredientes. A estabilidade da vitamina D3 encapsulada foi satisfatria ao longo de 65 dias com valores superiores a 87% para os trs tratamentos e a temperatura apresentou influncia na estabilidade. As MLS produzidas com cera apresentaram melhores resultados de estabilidade de vitamina D3 com valores de 90,18 2,23 % aps 65 dias de estocagem. Esses resultados so promissores e demostram a viabilidade da tcnica de spray chilling na produo de MLS carregadas de vitamina D3, possibilitando uma futura aplicao em alimentos.
Resumo:
A via de administrao oral a forma favorita de administrao de frmacos em funo das vantagens que apresenta, dentre elas destacam-se: a adeso do paciente, convenincia e praticidade. Em funo disto, a maioria dos medicamentos comercializados encontra-se disponvel na forma farmacutica de administrao oral, entretanto, o sucesso de um tratamento medicamentoso por esta via requer que a absoro gastrointestinal do frmaco seja suficiente para assegurar a sua disponibilidade no local de ao (VOLPE, 2010). No entanto, a absoro do frmaco no trato gastrointestinal complexa e pode ser influenciada por vrios fatores, os quais tm impacto sobre a dissoluo, solubilidade e permeabilidade do frmaco. Com o intuito de aumentar a biodisponibilidade de frmacos, que possuem absoro dificultada pela via oral, a via de administrao pela mucosa bucal vem sendo uma alternativa na atualidade farmacutica. Esta mucosa um tecido no queratinizado, altamente vascularizado e apresenta poucas enzimas metabolizadoras. Tais caractersticas possibilitam boa absoro de frmacos sem que ocorra a metabolizao pr-sistmica, ou efeito de primeira passagem, somando-se ao fato desta apresentar fcil acessibilidade para a administrao de frmacos (VRIES, M. E et al., 1991; NIELSEN, H. M &RASSING, M. R, 1999). Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a permeabilidade dos frmacos antirretrovirais (lamivudina e estavudina) por meio de modelo ex vivo em segmentos da mucosa bucal de sunos, com emprego de cmaras de difuso do tipo clulas de Franz. Para avaliao da permeabilidade bucal dos frmacos antirretrovirais, lamivudina e estavudina, e dos marcadores para transporte transcelular (metoprolol) e paracelular (fluorescena sdica), empregou-se mtodo ex-vivo, em clulas de Franz, com segmento de mucosa bucal de suno ( a 37C, meio Ringer- Krebs- HEPES, pH 7,4), e Franz posterior anlise das concentraes das substncias permeadas (frmacos e marcadores) por cromatografia líquida de alta eficincia. Os resultados obtidos, por meio do protocolo desenvolvido, demonstram que o transporte atravs da via paracelular (marcador fluorescena) foi mais expressivo que o transporte transcelular (marcador metoprolol), o que provavelmente se deve ao fato dos espaos intercelulares da mucosa bucal serem mais frouxos do que aqueles observados na mucosa intestinal (junes ntimas). Quanto lamivudina e estavudina, os resultados de permeabilidade indicaram que estes frmacos permearam por mecanismo semelhante ao do metoprolol, isto , por via transcelular.
Resumo:
O objetivo do presente estudo foi utilizar o extrato de jabuticaba microencapsulado como corante e avaliar o seu potencial antimicrobiano e antioxidante em produtos crneos embutidos do tipo linguia frescal e mortadela, em substituio ao corante tradicionalmente utilizado carmim de cochonilha. Uma primeira etapa consistiu na avaliao in vitro da capacidade antioxidante e antimicrobiana do extrato de jabuticaba aquoso e microencapsulado. O extrato de jabuticaba foi obtido a partir do resduo do despolpamento da fruta, com posterior desidratao (microencapsulao) por spray dryer, utilizando maltodextrina como agente carreador. A caracterizao foi efetuada por determinao do teor de antocianinas e identificao destas por cromatografia líquida de alta eficincia (CLAE) e espectrometria de massas (MS), determinao da sua capacidade antioxidante pelos mtodos Folin-Ciocalteu, capacidade redutora do ferro no plasma (FRAP) e capacidade antioxidante pelo radical DPPH. As caractersticas fsicas avaliadas no extrato aquoso foram o valor de pH e o teor de slidos solveis. O potencial antimicrobiano foi determinado pelo mtodo da concentrao inibitria mnima (CIM) sobre as bactrias Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Salmonella Enteritidis. O extrato de jabuticaba microencapsulado (EJM) foi utilizado para a elaborao de linguia frescal e mortadela em duas diferentes concentraes: 2 e 4% de EJM para a linguia frescal e 2% para mortadela. A linguia frescal ( base de carne suna) e a mortadela ( base de carne bovina e carne mecanicamente separada de frango) foram avaliadas quanto estabilidade durante armazenamento refrigerado a 11 e 41C, por 15 e 56 dias, respectivamente. Os produtos foram caracterizados quanto composio centesimal e foram realizadas anlises fsico-qumicas, microbiolgicas e sensoriais. Os resultados encontrados para a linguia frescal confirmaram que o uso de 2% e 4% de EJM contriburam para reduzir a oxidao lipdica durante os 15 dias de armazenamento e nas anlises microbiolgicas o EJM contribuiu para reduzir a contagem de microrganismos por quatro dias quando comparado com a linguia controle (sem adio de EJM). A anlise sensorial comprovou que 2% de EJM no comprometeu a maioria dos atributos sensoriais avaliados, com exceo da colorao mais escura. Recomenda-se, portanto, a utilizao de 2% de EJM na produo de linguia frescal. Nas mortadelas, os resultados no diferiram quando se comparou os produtos com 2% de EJM e sem adio do extrato (controle), porm, a utilizao de 2% de EJM pode ser considerada uma alternativa interessante devido as demandas atuais por novas fontes de baixo custo e a utilizao de pigmentos naturais que possam ser benficos sade. Com estes resultados, pode-se dizer que o aproveitamento de cascas de jabuticaba oriundos do processamento da fruta, na forma de extrato microencapsulado, pode representar uma boa alternativa como corante natural, trazendo uma nova concepo da utilizao de produtos mais saudveis em linguia frescal e mortadela.
Resumo:
As principais propriedades farmacolgicas da Casearia sylvestris, uma espcie de rvore cujas folhas so utilizadas na medicina popular, j foram descritas na literatura. Recentemente foi demonstrada a potente atividade citotxica in vitro da casearina X (CAS X), o diterpeno clerodnico majoritrio isolado das folhas de C. sylvestris, contra linhagens de clulas tumorais humanas. Apesar dos resultados promissores, sua potente atividade citotxica in vitro no pode ser extrapolada para uma potente atividade in vivo, a menos que possua boa biodisponibilidade e durao desejvel do seu efeito. Tendo em vista que o avano nas pesquisas de produtos naturais requer a avaliao pr-clnica de propriedades farmacocinticas, no presente trabalho foi realizada a caracterizao in vitro do metabolismo e da absoro intestinal da CAS X, com o objetivo de prever sua biodisponibilidade in vivo. Para os estudos de metabolismo in vitro, foi utilizado o modelo microssomal heptico de ratos e de humanos. Foi desenvolvido um mtodo analtico para a quantificao da CAS X em microssomas, empregando a precipitao de protenas com acetonitrila no preparo das amostras e a cromatografia líquida de alta eficincia para as anlises. O mtodo foi validado de acordo com os guias oficiais da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria e da European Medicine Agency (EMA). A CAS X demonstrou ser substrato para as reaes de hidrlise mediada pelas carboxilesterases (CES) e apresentou um perfil cintico de Michaelis-Menten. Foram estimados os parmetros de Vmax e KM, demonstrando que o clearance intrnseco em microssomas heptico de humanos foi 1,7 vezes maior que o de ratos. O clearance heptico foi estimado por extrapolao in vitro-in vivo, resultando em mais de 90% do fluxo sanguneo heptico em ambas as espcies. Um estudo qualitativo para a pesquisa de metablitos foi feito utilizando espectrometria de massas, pelo qual foi possvel sugerir a formao da casearina X dialdedo como produto de metabolismo. Nos estudos de absoro intestinal in vitro foi utilizado o modelo de monocamadas de clulas Caco-2. Um mtodo analtico por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas foi desenvolvido e validado de acordo com o EMA, para as etapas de quantificao da CAS X no sistema de clulas. Os parmetros cinticos de permeabilidade aparente absortiva e secretria da CAS X foram estimados em um sistema celular, no qual a atividade hidroltica da CES foi inibida. Assim, a CAS X foi capaz de permear a monocamada de clulas Caco-2, provavelmente por transporte ativo, sem a ocorrncia de efluxo, mas com significativa reteno do composto dentro das clulas. Em conjunto, os ensaios in vitro realizados demonstraram a susceptibilidade da CAS X ao metabolismo de primeira passagem, como substrato para as CES especficas expressas no fgado e intestino.
Resumo:
INTRODUO:A rigidez arterial aumentada um importante determinante do risco cardiovascular e um forte preditor de morbimortalidade. Alm disso, estudos demonstram que o enrijecimento vascular pode estar associado a fatores genticos e metablicos. Portanto,os objetivos do presente estudo so determinar a herdabilidade da velocidade de onda de pulso (VOP) e avaliar a associao do perfil lipdico e do controle glicmico com o fentipo de rigidez arterial em uma populao brasileira.MTODOS:Foram selecionados 1675 indivduos (ambos os gneros com idade entre 18 e 102 anos) distribudos em 109 famlias residentes no municpio de Baependi-MG. A VOP cartida-femoral foi avaliada de forma no invasiva atravs de um dispositivo automtico.As variveis lipdicas e a glicemia de jejum foram determinadas pelo mtodo enzimtico colorimtrico. Os nveis de hemoglobina glicada (HbA1c) foram determinados pelo mtodo de cromatografia líquida de alta eficincia. As estimativas da herdabilidade da VOP foram calculadas utilizando-se a metodologia de componentes de varincia implementadas no software SOLAR. RESULTADOS: A herdabilidade estimada para a VOP foi de 26%, sendo ajustada para idade, gnero, HbA1c e presso arterial mdia. Os nveis de HbA1c foram associados a rigidez arterial, onde a elevao de uma unidade percentual da HbA1c representou um incremento de 54% na chance de risco para rigidez arterial aumentada. As variveis lipdicas (LDL-c, HDL-c, colesterol no- HDL-c, colesterol total e triglicrides) apresentaram fraca correlao com a VOP. Alm disso, uma anlise de regresso linear estratificada para idade (ponto de corte >= 45 anos) demonstrou uma relao inversa entre LDL-c e VOP em mulheres com idade >= 45 anos. CONCLUSO: Os resultados indicam que a VOP apresenta herdabilidade intermediria (26%); a HbA1c esta fortemente associada a rigidez arterial aumentada; o LDL-c inversamente relacionado com a VOP em mulheres com idade >= 45 anos, possivelmente devido s alteraes metablicas associadas falncia ovariana
Resumo:
Introduo - A vitamina D desempenha funes na regulao da homeostase do clcio e fsforo, diferenciao celular, metabolismo de hormnios e regulao do sistema imune. Sua deficincia em crianas pode ocasionar raquitismo, convulses e insuficincia respiratria. Objetivo - Determinar a relao entre adiposidade materna e do recm-nascido com as concentraes de vitamina D materna e do cordo umbilical. Metodologia - Foram envolvidas 101 mes e seus respectivos recm-nascidos selecionados no Hospital Maternidade Vila Nova Cachoeirinha, So Paulo. A concentrao de vitamina D foi determinada por cromatografia líquida. A composio corporal materna foi determinada por bioimpedncia segmentada (InBody, Coria do Sul) e a dos recm-nascidos obtida por pletismografia por deslocamento de ar (PEA POD, USA). Para anlise estatstica, utilizou-se anlise de regresso linear mltipla e coeficiente de correlao de Spearman. Valores de p <0,05 foram considerados significantes. Resultados - As mdias das concentraes de vitamina D da me e do cordo umbilical foram de 30,16 (DP=21,16) ng/mL e 9,56 (DP=7,25) ng/mL, respectivamente. As mdias das porcentagens de massa gorda das mes e dos recm-nascidos foram de 32,32 (DP=7,74) por cento e 8,55 (DP=4,37) por cento , respectivamente. Foi observada relao positiva entre concentrao de vitamina D materna e do cordo umbilical (r=0,210; p<0,04). No foi observada associao entre adiposidade do recm-nascido e concentrao de vitamina D do cordo umbilical, nem entre adiposidade materna e concentraes de vitamina D materna e do cordo umbilical. Concluso Neste estudo, original na literatura internacional, foi utilizado mtodo de referncia, validado, de alta preciso e imparcial na estimativa do percentual de gordura neonatal, nem sempre utilizado em outros estudos. Foi observada relao positiva entre concentrao de vitamina D materna e do cordo umbilical. A ausncia de associao entre as variveis analisadas pode ser devido alta prevalncia de sobrepeso e obesidade entre as gestantes, baixas concentraes de vitamina D nas gestantes e recm-nascidos, alterao do metabolismo da vitamina D e da composio corporal no perodo da gestao e imaturidade do processo de sequestro da vitamina D pelo tecido adiposo 1 neonatal. Torna-se relevante o desenvolvimento de estudos prospectivos do tipo coorte para avaliar desde o incio da gestao a influncia da adiposidaidade materna nas concentraes de vitamina D materna e do cordo umbilical.
Resumo:
O uso de pesticidas levou ao aumento da produtividade e qualidade dos produtos agrcolas, porm o seu uso acarreta na intoxicao dos seres vivos pela ingesto gradativa de seus resduos que contaminam o solo, a gua e os alimentos. Dessa forma, h a necessidade do monitoramento constante de suas concentraes nos compartimentos ambientais. Para isto, busca-se o desenvolvimento de mtodos de extrao e enriquecimento de forma rpida, com baixo custo, gerando um baixo volume de resduos, contribuindo com a qumica verde. Dentre estes mtodos destacam-se a extrao por banho de ultrassom e a extrao por ponto nuvem. Aps o procedimento de extrao, o extrato obtido pode ser analisado por tcnicas de Cromatografia a Lquido de Alta Eficincia (HPLC) e a Cromatografia por Injeo Sequencial (SIC), empregando fases estacionrias modernas, tais como as monolticas e as partculas superficialmente porosas. O emprego de SIC com coluna monoltica (C18, 50 x 4,6 mm) e empacotada com partculas superficialmente porosas (C18, 30 x 4,6 mm, tamanho de partcula 2,7 m) foi estudado para separao de simazina (SIM) e atrazina (ATR), e seus metablitos, desetilatrazina (DEA), desisopropilatrazina (DIA) e hidroxiatrazina (HAT). A separao foi obtida por eluio passo-a-passo, com fases mveis compostas de acetonitrila (ACN) e tampo Acetato de Amnio/cido actico (NH4Ac/HAc) 2,5 mM pH 4,2. A separao na coluna monoltica foi realizada com duas fases mveis: MP1= 15:85 (v v-1) ACN:NH4Ac/HAc e MP2= 35:65 (v v-1) ACN:NH4Ac/HAc a uma vazo de 35 L s-1. A separao na coluna com partculas superficialmente porosas foi efetivada com as fases mveis MP1= 13:87 (v v-1) ACN: NH4Ac/HAc e MP2= 35:65 (v v-1) ACN:NH4Ac/HAc vazo de 8 L s-1. A extrao por banho de ultrassom em solo fortificado com os herbicidas (100 e 1000 g kg-1) resultou em recuperaes entre 42 e 160%. A separao de DEA, DIA, HAT, SIM e ATR empregando HPLC foi obtida por um gradiente linear de 13 a 35% para a coluna monoltica e de 10 a 35% ACN na coluna com partculas superficialmente porosas, sendo a fase aquosa constituda por tampo NH4Ac/HAc 2,5 mM pH 4,2. Em ambas as colunas a vazo foi de 1,5 mL min-1 e o tempo de anlise 15 min. A extrao por banho de ultrassom das amostras de solo com presena de ATR, fortificadas com concentraes de 250 a 1000 g kg-1, proporcionou recuperaes entre 40 e 86%. A presena de ATR foi confirmada por espectrometria de massas. Foram realizados estudos de fortificao com ATR e SIM em amostras de gua empregando a extrao por ponto nuvem com o surfactante Triton-X114. A separao empregando HPLC foi obtida por um gradiente linear de 13 a 90% de ACN para a coluna monoltica e de 10 a 90% de ACN para a coluna empacotada, sempre em tampo NH4Ac/HAc 2,5 mM pH 4,2. Em ambas as colunas a vazo foi de 1,5 mL min-1 e o tempo de anlise 16 min. Fortificaes entre 1 e 50 g L-1 resultaram em recuperaes entre 65 e 132%.
Resumo:
Plants produce a number of substances and products and primary and secondary metabolites (SM) are amongst them with many benefits but limitation as well. Usually, the fodder are not considered toxic to animals or as a source having higher SM. The Brachiaria decumbens has a considerable nutritional value, but it is considered as a toxic grass for causing photosensitization in animals, if the grass is not harvested for more than 30 days or solely. The absence of detailed information in the literature about SM in Brachiaria, metabolites production and its chemical profile enable us to focus not only on the nutritive value but to get answers in all aspects and especially on toxicity. The study was conducted in the period of december 2013 to december 2014; in greenhouse FZEA-USP. B. decumbens was used with two cutting heights (10 and 20 cm) and nitrogen doses (0, 150, 300 and 450 kg ha-1) in complete randomized block design. The bromatological analysis were carried out on near infrared spectroscopy. Generally, the application of 150 kg ha-1 N was sufficient to promote the nutritional value in B. decumbens but above it the nitrogen use efficiency decline significantly. The highest dry matter yield (99.97 g/pot) was observed in autumn and the lowest was in winter (30.20 g/pot). While, as per nitrogen dose the average highest dry matter yield was at 150 kg ha-1 (79.98 g/pot). The highest crude protein was observed in winter (11.88%) and the lowest in autumn (7.78%). By the cutting heights; the 10 cm proved to have high CP (9.51%). In respect of fibrous contents, the highest acid detergent fiber was noted in summer (36.37%) and lowest in winter (30.88%). While the neutral detergent fiber was being highest in autumn and lowest in spring (79.60%). The highest in vitro dry matter and organic matter digestibilities were noted at 300 kg ha-1 N; being 68.06 and 60.57%; respectively; with the lowest observed in without N treatments (62.63% and 57.97), respectively. For determination of the classes, types and concentration of SM in B. decumbens, phytochemical tests, thin layer and liquid chromatography-mass spectrometry and nuclear magnetic resonance analysis were carried out. Height, nitrogen and seasons significantly (P <0.0001) affected the secondary metabolic profile. A new protodioscin isomer (protoneodioscin (25S-)) was identified for first time in B. decumbens and is supposed to be the probable toxicity reason. Its structure was verified by 1D and 2D NMR techniques (1H, 13C) and 1D (COSY-45, edited HSQC, HMBC, H2BC, HSQC -TOCSY, NOESY and 1 H, 1 H, J). All factors influence the metabolic profile significantly (P <0.0001). The lowest phenols were at 300 kg ha-1 while the lowest flavones were at 0 kg ha-1. Season wise the highest phenols occurred in autumn (19.65 mg/g d.wt.) and highest flavones (28.87 mg/g d.wt.) in spring. Seasons effect the saponin production significantly (P <0.0001) and the results showed significant differences in the protodioscin (17.63±4.3 - 22.57±2.2 mg/g d.wt.) and protoneodioscin (23.3±1.2 - 31.07±2.9 mg/g d.wt.) concentrations. The highest protodioscin isomers concentrations were observed in winter and spring and by N doses the highest were noted in 300 kg ha-1. Simply, all factors significantly played their role in varying concentrations of secondary metabolites.
