O uso da técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real em doadores de sangue soropositivos para o anti-HCV

O HCV é um vírus esférico, que apresenta um genoma de RNA com polaridade positiva. Atualmente está classificado na família Flaviviridae num gênero separado que é o Hepacivirus, apresenta cerca de 9,4 Kb constituído por uma única e longa fase de leitura aberta (ORF) que compreende quase todo o genoma. Apresenta duas regiões não traduzidas nas extremidades 5' e 3' denominadas 5' UTR e 3' UTR. A poli proteína precursora é clivada em dez proteínas, resultando em proteínas virais estruturais e proteínas nãoestruturais. É um vírus de transmissão preferencialmente parenteral, com distribuição universal, cujo diagnóstico é feito na grande maioria de maneira acidental, sendo atualmente utilizado os testes sorológico e molecular. Este trabalho tem como objetivo comparar o teste sorológico de imunoensaio enzimático (ELISA) e a reação em cadeia da polimerase (PCR) na ocasião da seleção de pré-doadores de sangue. Foram feitos testes de detecção do vírus C por PCR em 290 amostras com resultado positivo ou indeterminado para o teste ELISA. A análise dos resultados revelou que as amostras com testes ELISA positivo/PCR positivo e ELISA positivo/PCR negativo são duas amostras diferentes e independentes (p=0,0006). Esta diferença pode ser supostamente devido a resposta imune diferenciada nas amostras que apresentaram resultado no teste PCR positivas. Esperava-se que houvesse correlação entre os resultados do DO/Cutoff (ELISA) e carga viral (PCR) como o que ocorre em outros vírus como o HIV, no entanto os resultados apresentaram-se totalmente dispersos (R²=0,025), confirmando a não correlação entre os dois testes: ELISA e PCR para o vírus C.

ABSTRACT: The HCV is a spherical virus that presents a RNA genome with a positive polarity. Actually classified into the flaviridae family, and Hepacivirus genre, presenting a 9.4 Kb constituted by a unique and long open reading frame (ORF) which comprises almost all the genome. It presents two untranslated regions (UTR) at the 5' and 3' extremities. The major polyprotein is clivated in ten minors proteins, resulting in structural and non-structural proteins. This virus shows preferentially the blood transmission and is distributed around the world. The diagnosis has been done accidentally in the most of cases while sorological and molecular screening is done. This work has as the main objective, to compare the imuno-enzematic assay (ELISA) with polimerase chain reaction test (PCR) in the occasion of pre-selection of blood donors. Detection screening by PCR was done in 290 samples that were positive or indeterminate for ELISA assay. The result analysis showed that the samples positive-ELISA/positive- PCR and positive-ELISA/negative-PCR are two different and independent samples (p=0,0006). This difference is supposed to be due a differential immunologic response of the samples that presented positive PCR result. We attended a correlation between DO/cut-off (ELISA) and viral load in PCR as we see in other virus like HIV, however the results appears totally disperse (R²=0,025), confirming the non-correlation between the two testes, ELISA and PCR for detection of virus C.