“Papel dos recetores purinérgicos no crescimento e temodelação do tecido cavernoso”

A adenosina é um nucleósido ubíquo envolvido na regulação de controlo do tónus vascular do tecido cavernoso, desempenhando um papel importante na fisiopatologia da Disfunção Erétil (DE) resistente aos fármacos relaxantes musculares clássicos. Apesar da importância comprovada dos recetores da adenosina na fisiopatologia da DE no homem, pouca informação é conhecida no que diz respeito à expressão e localização dos recetores purinérgicos no Tecido Cavernoso de Ratazana (TCR). Neste trabalho avaliou-se o fenótipo dos recetores purinérgicos responsáveis pela regulação do tónus do tecido erétil de ratazana por imunofluorescência indireta aplicada à microscopia confocal em co-culturas de células endoteliais e musculares lisas do TCR. Para além da caracterização imunofenotípica, desenvolveu-se uma técnica que permite diferenciar funcionalmente em tempo real (por microscopia confocal funcional) células musculares lisas e células endoteliais isoladas de TCR em co-cultura marcadas com a sonda fluorescente Fluo-4NW. Esta técnica permite distinguir cada um dos subtipos celulares mediante o padrão e a magnitude das oscilações dos níveis intracelulares de Ca2+ ([Ca2+]i) em resposta ao ATP (agonista P2) e à fenilefrina (PE, agonista α-adrenérgico). Nas células musculares lisas, observou-se uma resposta mais acentuada ao agonista α-adrenérgico, PE, e uma resposta menos significativa ao ATP. O contrário foi observado relativamente às células endoteliais. A incubação das células musculares lisas e endoteliais com ATP (300 μM) causou um aumento dos níveis de [Ca2+]i. O efeito do ATP (300 μM) parece envolver a ativação de recetores dos subtipos P2X1 e P2X3 sensíveis ao bloqueio com NF023 (3μM) e A317491 (100 nM), respetivamente. Já o aumento dos níveis [Ca2+]i produzido pelo ADP (300 μM) parece envolver a ativação de recetores P2Y1, P2Y12 e P2Y13 mediante o antagonismo produzido pelos antagonistas MRS 2179 (0,3μM), AR-C66096 (0,1 μM) e MRS 2211 (10μM), respetivamente. Os dois tipos celulares expressam imunorreatividade contra recetores A2A, A2B, P2X1, P2X3, P2Y1, P2Y12 e P2Y13.

Adenosine is a ubiquitous nucleoside involved in the regulation of the vascular tone, namely in the corpus cavernosum. This renders the nucleoside an important role in the pathophysiology of drug-resistant vasculogenic erectile dysfunction in men. Although it has been pharmacologically proven that adenosine receptors exist in the human corpus cavernosum, there is a lack of information regarding the differential expression and localization of these receptors in the corpus cavernosum of the rat, which has been taken as a model for investigating erectile dysfunction. This study was designed to evaluate the phenotype of purinoceptors involved in the contractility of the rat corpus cavernosum by immunofluorescence confocal microscopy. Studies were performed in co-cultures of both endothelial and smooth muscle cells isolated from the rat corpus cavernosum. Besides the immunophenotypic characterization, we aimed at developing a methodology to allow the functional differentiation of endothelial and smooth muscle cells of the rat corpus cavernosum in culture using time-lapse confocal microscopy. To this end, cells were loaded with the cell-permeable fluorescent Ca2+ indicator, Fluo-4NW; intracellular Ca2+ oscillations were different in endothelial cells and smooth muscle fibers according to specific activators: ATP (a P2 agonist) and phenylephrine (PE, an α-adrenergic agonist). It was found that smooth muscle cells exhibited a more pronounced response to the α-adrenergic agonist PE, but barely reacted to the application of ATP. The opposite was observed regarding endothelial cells. The incubation of endothelial and smooth muscle cells with ATP (300 μM) caused a significant rise in [Ca2+]i. ATP effects may involve P2X1 e P2X3 receptors activation, because the responses were largely attenuated upon application of selective antagonists, namely NF 023 (3 μM) and A 317291 (100nM), respectively. Incubation of endothelial and smooth muscle cells with ADP (300 μM) also caused a rise of [Ca2+]i, which was attenuated upon blocking P2Y1, P2Y12 and P2Y13 receptors, respectively with MRS 2179 (0,3 μM), AR-C 66096 (0,1 μM) and MRS 2211 (10 μM). Co-cultured endothelial and smooth muscle cells exhibited immunoreactivity against A2A, A2B, P2X1, P2X3, P2Y1, P2Y12, and P2Y13.