Estudo do perfil salivar proteico de crianças obesas pré-púberes com foco nas alterações de mediadores da metainflamação

O objetivo deste estudo foi investigar na saliva de crianças pré-púberes obesas, em comparação com crianças eutróficas, a presença de possíveis diferenças na expressão de mediadores proteicos relacionados à metainflamação através de um estudo observacional transversal. Foram selecionadas 105 crianças pré-púberes com idade entre 5 e 9 anos, sem quaisquer outros comprometimentos sistêmicos ou bucais sendo realizada a mensuração do comprimento da circunferência da cintura (CC), além do peso e estatura para cálculo do IMC e seu escore Z (zscore IMC), de forma a compor 3 grupos: EU - eutrofia (-2SD≤ zscore IMC≤1SD), SP - sobrepeso (1SD < zscore IMC < 2SD) e OB obesidade (zscore IMC ≥ 2SD). Após o exame médico e odontológico foi feita a coleta de sangue e de saliva total não estimulada, de forma protocolada. Amostras séricas e salivares foram analisadas, individualmente, para a dosagem de IL1β, IL6, IL8. IL10, IL12p70, TNFα, MCP1, leptina, grelina e insulina, por Multiplex e adiponectina total e de alto peso molecular (adipoHMW), por ELISA. Além disso, as amostras séricas foram utilizadas para o delineamento hemodinâmico dos pacientes. As amostras salivares de EU e OB foram também analisadas em pools por espectrometria de massa (MS) e a presença de algumas proteínas foi validada por imunoblotting, para a comparação do perfil salivar proteico. As concentrações dos analitos foram comparadas tanto entre os grupos (teste de Kruswall-Wallis), como em relação ao zscore IMC e ao CC (Correlação de Spearman ou Pearson). Dos 12 analitos, somente a adipoHMW não foi detectada em nenhuma das amostras salivares. Na comparação OBxEU houve aumento na concentração total de proteínas salivares, da insulina e leptina sérica e salivar e do MCP1, além de diminuição da adiponectina sérica total e de adipoHMW e uma menor relação adiponectina/leptina (A/L) no grupo OB. As principais correlações obtidas com o zscore IMC foram com as concentrações séricas e salivares de insulina e leptina (positivas) e com a relação A/L (negativa), observando-se também a correlação negativa com a adiponectina total e adipoHMW séricas. Na comparação entre as concentrações séricas e salivares, foi possível detectar correlação positiva entre as dosagens de insulina e leptina, assim como com os valores da relação A/L. Na análise proteômica por MS foram identificadas 670 proteínas, sendo 163 delas com expressão diferenciada na saliva de OB em relação a EU. Dentre estas, encontram-se alteradas proteínas relacionadas à resposta inflamatória humoral, em especial com a via alternativa do sistema complemento e do metabolismo redox. Foram selecionadas três destas proteínas para validação por imunoblotting, que confirmou o aumento do Fator H e a diminuição do Fator B e da tioredoxina na saliva de OB em relação a EU. Considerando os resultados, podemos verificar que embora com menores concentrações absolutas dos mediadores, a saliva mostrou praticamente as mesmas associações observadas no sangue, em especial para a insulina, leptina e relação A/L, sendo possível admitir que a análise salivar venha a ser um bom método diagnóstico não invasivo para a obesidade infantil.

The aim of this study was to investigate possible different expressions of protein mediators related to metaflammation, in normal and obese prepubertal children`s saliva. For this cross-sectional observational study, 105 prepubertal children, between 5 and 9 years old, without oral or systemic disorders were selected. Weight, height and waist circumference (CC) were measured and body mass index (BMI) and BMI zscore were calculated in order to classify the children into the following groups: EU - lean (-2SD ≤ BMI zscore ≤ 1SD), SP - overweight (1SD < BMI zscore <2SD) and OB - obese (BMI zscore ≥ 2SD). Following medical and dental examination, blood and unstimulated whole saliva were sampled. The samples were individually analyzed by immunoassay for IL1β, IL6, IL8, IL10, IL12p70, TNF, MCP1, leptin, insulin and ghrelin, using Multiplex. Total and high molecular weight (adipoHMW) adiponectin were analyzed using ELISA. Additionally, serum samples were used to assess the patients lipid profile. Pools of EU and OB saliva samples were also analyzed by mass spectrometry (MS). The presence of some proteins was validated for by immunoblotting. The concentrations of analytes were compared between the groups EU, SP and OB (Kruswall-Wallis test), and in relation to BMI zscore and CC (Pearson or Spearman correlation). Only adipoHMW was not detected in any saliva sample. In comparison with EU, OB showed an increase in total concentration of salivary proteins, salivary and serum insulin, serum and salivary leptin and serum MCP1. Also, a decreased serum total adiponectin and adipoHMW and a lower A/L ratio were observed in the OB group. BMI zscore was positively correlated with insulin and leptin salivary and serum concentrations. A negative correlation with A/L ratio, serum total adiponectin and adipoHMW was also observed. These correlations were also found with CC. Comparing blood and saliva concentrations, significant associations between the dosages of insulin and leptin, as well as the values of A/L ratio were found. In proteomic analysis, by MS, 670 proteins were identified, and 163 of them with differential expression in saliva of OB in comparison to EU. Proteins related to the inflammatory response, in particular with the alternative pathway of the complement system and of redox metabolism were differently expressed between EU and OB. Three of these proteins were selected for validation by immunoblotting, which confirmed the increase of complement H Factor and reduced thioredoxin and complement B Factor expression in the saliva of OB compared to EU. Considering the results, it can be concluded that, although at lower absolute concentrations, the inflammatory mediators in saliva showed the same associations observed in blood, especially insulin, leptin, and A/L ratio. It is possible to assume that salivary analysis may become a useful noninvasive diagnosis method for childhood obesity.