986 resultados para sous-unité p28 de l’IL-27
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Linterleukine 6 (IL-6) est une cytokine qui joue un rle essentiel dans linflammation. Son rcepteur (IL-6R) est compos de la chane non signaltique IL-6R et de la chane transductrice du signal gp130, commune aux cytokines de la famille IL-6. La liaison de lIL-6 son rcepteur permet lactivation de plusieurs voies de signalisation, notamment des voies Jak/STAT1 et prfrentiellement Jak/STAT3. De faon complmentaire, nous avons dmontr que lIL-6 est capable dactiver la voie Jak/STAT5 dans les lymphocytes T CD4. Lactivation de cette voie de signalisation pourrait tre implique dans le rtrocontrle des effets pro-inflammatoires de lIL-6 sur les cellules T CD4. Le facteur neurotrophique ciliaire (CNTF) et la cardiotrophin-like cytokine/cytokine-like factor 1 (CLC/CLF) sont deux cytokines de la famille de lIL-6 qui signalent travers un rcepteur commun, le rcepteur au CNTF (CNTFR), compos du CNTFR, leukaemia inhibitory factor receptor (LIFR) et gp130. Toutes deux exercent des actions au niveau du systme immunitaire, or la chane CNTFR de leur rcepteur ny est pas exprime. Il a t montr que le CNTFR humain peut galement activer un rcepteur form des sous-unités IL-6R, LIFR et gp130. Nous avons compar les effets du CNTF et du CLC/CLF de souris sur des transfectants exprimant LIFR et gp130 et les chaines connues de la famille IL-6 (IL-6R, IL-11R et CNTFR). Nos rsultats indiquent que le CNTF de souris, comme le CNTF humain est capable dactiver un rcepteur form de lIL-6R, LIFR et gp130. Toutefois cette proprit nest pas partage par CLC/CLF et le rcepteur impliqu dans les effets de cette cytokine sur le systme immunitaire reste donc identifier. L’IL-27 appartient la famille de lIL-6 compose dune sous-unité cytokinique, p28, associe un rcepteur soluble lEpstein-Barr virus-induced gene 3 (EBI3). La sous-unité p28 peut sassocier avec le rcepteur soluble CLF pour former une cytokine capable dactiver les lymphocytes T. Dans le but de caractriser cette cytokine, nous avons montr que p28/CLF agit aussi sur les lymphocytes B et permet leur diffrenciation en plasmocytes. Le partage de lIL-6R par lIL-6 et p28/CLF semble tre lorigine de la similarit des effets de ces deux cytokines. De plus, nous avons observ des effets semblables ceux de lIL-6 suite lassociation de la sous-unité p28 seule avec la chane IL-6R. En effet, afin de mieux caractriser la cytokine p28/CLF, nous avons tudi les effets dus au recrutement de la chane IL-6R par la sous-unité p28. Les cytokines de la famille de lIL-6 sont composes de quatre hlices disposes de faon anti-parallle deux deux. La sous-unité p28 possde, au niveau dune boucle reliant deux hlices , un motif de plusieurs acides glutamiques conscutifs (motif polyE) qui nest retrouv dans aucune autre cytokine de cette famille. Nous avons dmontr que ce motif est impliqu dans la liaison de cette sous-unité avec lhydroxyapatite et los. Cette caractristique de p28 pourrait permettre un ciblage de l’IL-27 (p28/EBI3) et de p28/CLF prfrentiellement vers la niche endostale des cellules souches et des cellules immunitaires.
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Mmoire numris par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral
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La scrtion des protines est un processus essentiel la vie. Chez les eucaryotes, les protines scrtes transitent dans le rticulum endoplasmique par le pore de translocation. Le translocon est compos de trois sous-unités fondamentales nommes Sec61, et chez les mammifres, ou Sec61p, Sbh1p et Sss1p chez les levures. Tandis que le rle des sous-unités et est bien connu, celui de la sous-unité demeure nigmatique. Plusieurs phnotypes distincts sont associs cette protine dans diffrents organismes, mais le haut niveau de conservation de squence suggre plutt une fonction universelle conserve. Rcemment, Feng et al. (2007) ont montr que le domaine transmembranaire (TMD) de Sbh1p tait suffisant pour complmenter plusieurs phnotypes associs la dltion du gne chez Saccharomyces cerevisiae, suggrant un rle important de cette rgion. Lobjectif de mon projet de recherche consiste tudier la fonction biologique de la sous-unité du translocon et de son TMD chez Schizosaccharomyces pombe. Dans cette levure, jai dcouvert que le gne sbh1+ ntait pas essentiel la viabilit 30oC, mais quil tait requis pour la croissance basse temprature. La dltion de sbh1+ entrane une sensibilit aux stress de la paroi cellulaire et une diminution de la scrtion des protines 23oC. La surexpression de Sbh1p diminue elle aussi la scrtion des protines et altre la morphologie cellulaire. Ces phnotypes sont distincts de ceux observs chez S. cerevisiae, o la dltion des deux paralogues de Sec61 entrane une sensibilit haute temprature plutt qu basse temprature. Malgr cela, les homologues de Sec61 de S. pombe et de S. cerevisiae sont tout deux capables de complmenter la thermosensibilit respective de chaque levure. La complmentation est possible mme avec lhomologue humain de Sec61, indiquant la conservation dune fonction de Sec61 de la levure lhomme. Remarquablement, le TMD de Sec61 de S. pombe, de S. cerevisiae et de lhumain sont suffisants pour complmenter la dltion gnomique autant chez la levure fission que chez la levure bourgeons. Globalement, ces observations indiquent que le TMD de Sec61 exerce une fonction cellulaire conserve travers les espces.
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Llimination des cellules infectes par apoptose constitue un mcanisme de dfense antivirale. Les virus de lherps simplex (HSV) de type 1 et 2 encodent des facteurs qui inhibent lapoptose induite par la rponse antivirale. La sous-unité R1 de la ribonuclotide rductase dHSV-2 (ICP10) possde une fonction anti-apoptotique qui protge les cellules pithliales de lapoptose induite par les rcepteurs de mort en agissant en amont ou au niveau de lactivation de la procaspase-8. Puisquune infection avec un mutant HSV-1 dficient pour la R1 diminue la rsistance des cellules infectes vis vis du TNF, il a t suggr que la R1 dHSV-1 (ICP6) pourrait possder une fonction anti-apoptotique. Le but principal de cette thse est dtudier le mcanisme et le potentiel de la fonction anti-apoptotique de la R1 dHSV-1 et de la R1 d'HSV-2. Dans une premire tude, nous avons investigu le mcanisme de la fonction anti-apoptotique de la R1 dHSV en utilisant le TNF et le FasL, deux inducteurs des rcepteurs de mort impliqus dans la rponse immune anti-HSV. Cette tude a permis dobtenir trois principaux rsultats concernant la fonction anti-apoptotique de la R1 dHSV. Premirement, la R1 dHSV-1 inhibe lapoptose induite par le TNF et par le FasL aussi efficacement que la R1 dHSV-2. Deuximement, la R1 dHSV-1 est essentielle linhibition de lapoptose induite par le FasL. Troisimement, la R1 dHSV interagit constitutivement avec la procaspase-8 dune manire qui inhibe la dimrisation et donc lactivation de la caspase-8. Ces rsultats suggrent quen plus dinhiber lapoptose induite par les rcepteurs de mort la R1 dHSV peut prvenir lactivation de la caspase-8 induite par dautres stimuli pro-apoptotiques. Les ARN double-brins (ARNdb) constituant un intermdiaire de la transcription du gnome des HSV et activant lapoptose par une voie dpendante de la caspase-8, nous avons test dans une seconde tude limpact de la R1 dHSV sur lapoptose induite par lacide polyriboinosinique : polyribocytidylique (poly(I:C)), un analogue synthtique des ARNdb. Ces travaux ont montr quune infection avec les HSV protge les cellules pithliales de lapoptose induite par le poly(I:C). La R1 dHSV-1 joue un rle majeur dans linhibition de lactivation de la caspase-8 induite par le poly(I:C). La R1 dHSV interagit non seulement avec la procaspase-8 mais aussi avec RIP1 (receptor interacting protein 1). En interagissant avec RIP1, la R1 dHSV-2 inhibe linteraction entre RIP1 et TRIF (Toll/interleukine-1 receptor-domain-containing adapter-inducing interferon ), ladaptateur du Toll-like receptor 3 qui est un dtecteur dARNdb , laquelle est essentielle pour signaler lapoptose induite par le poly(I:C) extracellulaire et la surexpression de TRIF. Ces travaux dmontrent la capacit de la R1 dHSV inhiber lapoptose induite par divers stimuli et ils ont permis de dterminer le mcanisme de lactivit anti-apoptotique de la R1 dHSV. Trs tt durant linfection, cFLIP, un inhibiteur cellulaire de la caspase-8, est dgrad alors que la R1 dHSV saccumule de manire concomitante. En interagissant avec la procapsase-8 et RIP1, la R1 dHSV se comporte comme un inhibiteur viral de lactivation de la procaspase-8 inhibant lapoptose induite par les rcepteurs de mort et les dtecteurs aux ARNdb.
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Les canaux calciques de type L CaV1.2 sont principalement responsables de lentree des ions calcium pendant la phase plateau du potentiel daction des cardiomyocytes ventriculaires. Cet influx calcique est requis pour initier la contraction du muscle cardiaque. Le canal CaV1.2 est un complexe oligomerique qui est compose de la sous-unite principale CaV1 et des sous-unites auxiliaires CaV et CaV21. CaV joue un role determinant dans ladressage membranaire de la sous-unite CaV1. CaV21 stabilise letat ouvert du canal mais le mecanisme moleculaire responsable de cette modulation na pas ete encore identifie. Nous avons recemment montre que cette modulation requiert une expression membranaire significative de CaV21 (Bourdin et al. 2015). CaV21 est une glycoproteine qui possede 16 sites potentiels de glycosylation de type N. Nous avons donc evalue le role de la glycosylation de type-N dans ladressage membranaire et la stabilite de CaV21. Nous avons dabord confirme que la proteine CaV21 recombinante, telle la proteine endogene, est significativement glycosylee puisque le traitement a la PNGase F se traduit par une diminution de 50 kDa de sa masse moleculaire, ce qui est compatible avec la presence de 16 sites Asn. Il sest avere par ailleurs que la mutation simultanee de 6/16 sites (6xNQ) est suffisante pour 1) reduire significativement la densite de surface de! CaV21 telle que mesuree par cytometrie en flux et par imagerie confocale 2) accelerer les cinetiques de degradation telle questimee apres arret de la synthese proteique et 3) diminuer la modulation fonctionnelle des courants generes par CaV1.2 telle quevaluee par la methode du patch-clamp . Les effets les plus importants ont toutefois ete obtenus avec les mutants N663Q, et les doubles mutants N348Q/N468Q, N348Q/N812Q, N468Q/N812Q. Ensemble, ces resultats montrent que Asn663 et a un moindre degre Asn348, Asn468 et Asn812 contribuent a la biogenese et la stabilite de CaV21 et confirment que la glycosylation de type N de CaV21 est necessaire a la fonction du canal calcique cardiaque de type L.
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Les canaux calciques de type L CaV1.2 sont principalement responsables de lentree des ions calcium pendant la phase plateau du potentiel daction des cardiomyocytes ventriculaires. Cet influx calcique est requis pour initier la contraction du muscle cardiaque. Le canal CaV1.2 est un complexe oligomerique qui est compose de la sous-unite principale CaV1 et des sous-unites auxiliaires CaV et CaV21. CaV joue un role determinant dans ladressage membranaire de la sous-unite CaV1. CaV21 stabilise letat ouvert du canal mais le mecanisme moleculaire responsable de cette modulation na pas ete encore identifie. Nous avons recemment montre que cette modulation requiert une expression membranaire significative de CaV21 (Bourdin et al. 2015). CaV21 est une glycoproteine qui possede 16 sites potentiels de glycosylation de type N. Nous avons donc evalue le role de la glycosylation de type-N dans ladressage membranaire et la stabilite de CaV21. Nous avons dabord confirme que la proteine CaV21 recombinante, telle la proteine endogene, est significativement glycosylee puisque le traitement a la PNGase F se traduit par une diminution de 50 kDa de sa masse moleculaire, ce qui est compatible avec la presence de 16 sites Asn. Il sest avere par ailleurs que la mutation simultanee de 6/16 sites (6xNQ) est suffisante pour 1) reduire significativement la densite de surface de! CaV21 telle que mesuree par cytometrie en flux et par imagerie confocale 2) accelerer les cinetiques de degradation telle questimee apres arret de la synthese proteique et 3) diminuer la modulation fonctionnelle des courants generes par CaV1.2 telle quevaluee par la methode du patch-clamp . Les effets les plus importants ont toutefois ete obtenus avec les mutants N663Q, et les doubles mutants N348Q/N468Q, N348Q/N812Q, N468Q/N812Q. Ensemble, ces resultats montrent que Asn663 et a un moindre degre Asn348, Asn468 et Asn812 contribuent a la biogenese et la stabilite de CaV21 et confirment que la glycosylation de type N de CaV21 est necessaire a la fonction du canal calcique cardiaque de type L.
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Thse numrise par la Direction des bibliothques de l'Universit de Montral.
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Thse numrise par la Direction des bibliothques de l'Universit de Montral.
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Les maladies inflammatoires de l'intestin (MII) sont caractrises par des rponses immunitaires incontrles dans l'intestin. Des tudes gntiques ont associ un polymorphisme dans le gne de l'IL23R la rsistance aux MII. IL23R code pour la protine de lIL-23r, une sous-unité du rcepteur lIL-23 (IL-23R). Ce rcepteur appartient la famille de lIL-12R, contenant plusieurs rcepteurs htrodimriques. Dailleurs, IL-12R et IL-23R partagent la sous-unité IL12Rb1. Nanmoins, ces deux rcepteurs favorisent des rponses immunitaires distinctes (Th1 vs Th17). Ce mmoire caractrise les dynamiques dexpression cellulaires de lIL-23R et lIL-12R, afin dlucider leurs rles dans linflammation. Nous avons tabli quIL-23R et IL-12R ne sont jamais co-exprims, malgr quils partagent la sous-unité IL-12R1. Parmi les cellules de rates de souris, la protine IL-23r est trouve dans certaines cellules T TCR ou T CD4+, quelques cellules B et des cellules Lti-like. La protine IL-12R2 est exprime par quelques cellules B. Lanalyse de lexpression de lIL-23R et lIL-12R dans diffrents organes rvla que la plus grande proportion de cellules exprimant lIL-23R se retrouve dans la lamina propria de l'intestin grle, alors que les cellules exprimant lIL-12R2 ont t retrouves en proportion quivalente dans tous les organes lymphodes. Ces observations appuient les tudes gntiques suggrant un rle prdominant de lIL23R dans les intestins. Finalement, des cultures in vitro suggrent que lIL-23R ou lIL-12R avaient des ractions croises lIL-12 ou lIL-23. Ltude de lIL-23R dans les MII devrait donc tre complmente par ltude de lIL-12R, car les deux rcepteurs pourraient avoir des rles complmentaires.
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Des tudes antrieures ont indiqu que l’IL-27 supprime le dveloppement de lencphalomylite auto-immune exprimentale (EAE), un modle murin de la sclrose en plaques (SEP). Lexpression en ARNm dIL-27 est maximale au pic du dveloppement de lEAE. Cependant, sa contribution dans la pathogense de la SEP demeure irrsolue. Nous avons investigu si l’IL-27 contribue moduler les rponses immunes dans le systme nerveux central (SNC) de patients SEP. Nos rsultats dimmunohistochimie sur chantillons post-mortem de cerveaux humains ont rvl que la production des deux sous-unités dIL-27 (EBI-3 et p28) est plus leve chez des patients compars des contrles. De plus, les astrocytes (GFAP) et les microglies/macrophages (Iba1) reprsentent des sources biologiques importantes de l’IL-27 dans les lsions. Les lymphocytes T CD4 et CD8 qui infiltrent le SNC des patients expriment dailleurs le rcepteur de l’IL-27 compos des chanes gp130 et TCCR, supportant le concept que ces cellules pourraient rpondre aux sources locales dIL-27. Nous avons galement dmontr que des combinaisons de cytokines pro-inflammatoires (IFN, IL-1 et TNF) augmentent lexpression in vitro dIL-27 par les astrocytes et macrophages humains, et que les microglies/macrophages de phnotype M1 produisent l’IL-27. Enfin, nous avons dmontr que les astrocytes humains expriment aussi le rcepteur l’IL-27 et rpondent l’IL-27 par la phosphorylation de STAT1, mais pas de STAT3. Une telle signalisation dans ces cellules mne laugmentation dexpression de la molcule de co-inhibition PD-L1 et de la scrtion de la chimiokine CXCL10.
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Grce un grand nombre dtudes biochimiques, gntiques et structurales effectues dans les dernires annes, des avancements considrables ont t raliss et une nouvelle vision du processus par lequel la machinerie transcriptionnelle de lARN polymrase II (Pol II) dcode linformation gntique a merg. De nouveaux indices ont t apports sur la diversit des mcanismes de rgulation de la transcription, ainsi que sur le rle des facteurs gnraux de transcription (GTFs) dans cette diversification. Les travaux prsents dans cette thse amnent de nouvelles connaissances sur le rle des GTFs humains dans la rgulation des diffrentes tapes de la transcription. Dans la premire partie de la thse, nous avons analys la fonction de la Pol II et des GTFs humains, en examinant de faon systmatique leur localisation gnomique. Les patrons obtenus par immunoprcipitation de la chromatine (ChIP) des versions de GTFs portant une tiquette TAP (Tandem-Affinity Purification) indiquent de nouvelles fonctions in vivo pour certains composants de cette machinerie et pour des lments structuraux de la Pol II. Nos rsultats suggrent que TFIIF et lhtrodimre Rpb4Rpb7 ont une fonction spcifique pendant ltape dlongation transcriptionnelle in vivo. De plus, notre tude amne une premire image globale de la fonction des GTFs pendant la raction transcriptionnelle dans des cellules mammifres vivantes. Deuximement, nous avons identifi une nouvelle fonction de TFIIS dans la rgulation de CDK9, la sous-unité kinase du facteur P-TEFb (Positive Transcription Elongation Factor b). Nous avons identifi deux nouveaux partenaires dinteraction pour TFIIS, soit CDK9 et la E3 ubiquitine ligase UBR5. Nous montrons que UBR5 catalyse lubiquitination de CDK9 in vitro. De plus, la polyubiquitination de CDK9 dans des cellules humaines est dpendante de UBR5 et TFIIS. Nous montrons aussi que UBR5, CDK9 and TFIIS co-localisent le long du gne fibrinogen (FBG) et que la surexpression de TFIIS augmente les niveaux doccupation par CDK9 de rgions spcifiques de ce gne, de faon dpendante de UBR5. Nous proposons que TFIIS a une nouvelle fonction dans la transition entre les tapes dinitiation et dlongation transcriptionnelle, en rgulant la stabilit des complexes CDK9-Pol II pendant les tapes prcoces de la transcription.
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La thrombasthnie de Glanzmann (TG) est une maladie caractrise par un dfaut dagrgation plaquettaire. Cest une maladie gntique autosomale rcessive cause par une anomalie du rcepteur plaquettaire pour le fibrinogne. Ce rcepteur est une intgrine localise la surface plasmatique qui est forme par un complexe compos des sousunits IIb et 3. Nous avons identifi un cheval dmontrant les caractristiques clinicopathologiques de la TG. Des tudes par cytomtrie de flux ont rvl une dficience au niveau de la portion IIb du rcepteur. Ces rsultats suggrent une ou plusieurs mutations au niveau du gne codant pour cette portion IIb du rcepteur. Lobjectif de notre tude tait de caractriser lADNc et lADN gnomique codant pour les gnes ITGA2B et ITGB3 codant respectivement pour les deux sousunits IIb et 3 chez un cheval atteint de la TG. LADNc a t synthtis par RTPCR en utilisant lARN total rcolt partir des plaquettes. LADN gnomique a t extrait partir des globules blancs. Des amorces spcifiques ont t utilises pour lamplification par PCR dITGA2B et dITGB3. Les squences dADNc et dADN gnomique de notre patient ont t caractrises par squenage et compares par lanalyse BLAST (GenBank). Une substitution dune guanine par une cytosine a t mise en vidence au niveau de lexon 2 dITGA2B amenant la substitution dune arginine (Arg72) par une proline (Pro72). Ce changement dacide amin pourrait rsulter en une conformation structurelle anormale qui amnerait une sousunit IIb inactive. Lanalyse de lADN gnomique a dmontr que ce cheval tait homozygote pour cette mutation. Le squenage de lADN gnomique des parents et de la grandmre du patient a dmontr que ces individus taient htrozygotes pour cette mutation. Le squenage dITGB3 na dmontr aucune anomalie.
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Les canaux potassiques voltage-dpendants forment des ttramres dont chaque sous-unité comporte six segments transmembranaires (S1 S6). Le pore, form des segments S5-S6 de chaque sous-unité, est entour de quatre domaines responsables de la sensibilit au potentiel membranaire, les senseurs de voltage (VS; S1-S4). Lors dune dpolarisation membranaire, le mouvement des rsidus chargs situs dans le VS entraine un mouvement de charges dtectable en lectrophysiologie, le courant de gating . Lactivation du VS conduit l'ouverture du pore, qui se traduit par un changement de conformation en C-terminal du segment S6. Pour lucider les principes qui sous-tendent le couplage lectromcanique entre ces deux domaines, nous avons tudi deux rgions prsumes responsables du couplage chez les canaux de type Shaker K+, soit la rgion carboxy-terminale du segment S6 et le lien peptidique reliant les segments transmembranaire S4-S5 (S4-5L). Avec la technique du cut-open voltage clamp fluorometry (COVCF), nous avons pu dterminer que linteraction inter-sous-unitaire RELY, forme par des acides amins situs sur le lien S4-5L et S6 de deux sous-unités voisines, est implique dans le dveloppement de la composante lente observe lors du retour des charges de gating vers leur tat de repos, le OFF-gating . Nous avons observ que lintroduction de mutations dans la rgion RELY module la force de ces interactions molculaires et limine lasymtrie observe dans les courants de gating de type sauvage. Dailleurs, nous dmontrons que ce couplage inter-sous-unitaire est responsable de la stabilisation du pore dans ltat ouvert. Nous avons galement identifi une interaction intra-sous-unitaire entre les rsidus I384 situ sur le lien S4-5L et F484 sur le segment S6 dune mme sous-unité. La dstabilisation de cette interaction hydrophobique dcouple compltement le mouvement des senseurs de voltage et l'ouverture du pore. Sans cette interaction, lnergie ncessaire pour activer les VS est moindre en raison de labsence du poids mcanique appliqu par le pore. De plus, labolition du couplage lectromcanique limine galement le mode shift , soit le dplacement de la dpendance au voltage des charges de transfert (QV) vers des potentiels hyperpolarisants. Ceci indique que le poids mcanique du pore impos au VS entraine le mode shift , en modulant la conformation intrinsque du VS par un processus allostrique.
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Contexte: Les champignons mycorhiziens arbuscules (AMF) tablissent des relations symbiotiques avec la plupart des plantes grce leurs rseaux dhyphes qui sassocient avec les racines de leurs htes. De prcdentes tudes ont rvl des niveaux de variation gntique extrmes pour des loci spcifiques permettant de supposer que les AMF peuvent contenir des milliers de noyaux gntiquement divergents dans un mme cytoplasme. Si aucun processus de reproduction sexue na jusquici t observ chez ces mycorhizes, on constate cependant que des niveaux levs de variation gntique peuvent tre maintenus la fois par lchange de noyaux entre hyphes et par des processus frquents de recombinaison entre noyaux. Les AMF se propagent par lintermdiaire de spores qui contiennent chacune un chantillon dune population initiale de noyaux htrognes, directement hrits du myclium parent. notre connaissance les AMF sont les seuls organismes qui ne passent jamais par un stade mononuclaire, ce qui permet aux noyaux de diverger gntiquement dans un mme cytoplasme. Ces aspects singuliers de la biologie des AMF rendent lestimation de leur diversit gntique problmatique. Ceci constitue un dfi majeur pour les cologistes sur le terrain mais galement pour les biologistes molculaires dans leur laboratoire. Au-del mme des problmatiques de diversit spcifique, lamplitude du polymorphisme entre noyaux mycorhiziens est mal connue. Le travail propos dans ce manuscrit de thse explore donc les diffrents aspects de larchitecture gnomique singulire des AMF. Rsultats Lampleur du polymorphisme intra-isolat a t dj observe pour la grande sous-unité dARN ribosomal de lisolat Glomus irregulare DAOM-197198 (prcdemment identifi comme G. intraradices) et pour le gne de la polymerase1-like (PLS) de Glomus etunicatum isolat NPI. Dans un premier temps, nous avons pu confirmer ces rsultats et nous avons galement pu constater que ces variations taient transcrites. Nous avons ensuite pu mettre en vidence la prsence dun goulot dtranglement gntique au moment de la sporulation pour le locus PLS chez lespce G. etunicatum illustrant les importants effets dchantillonnage qui se produisaient entre chaque gnration de spore. Enfin, nous avons estim la diffrentiation gntique des AMF en utilisant la fois les rseaux de gnes appliqus aux donnes de squenage haut-dbit ainsi que cinq nouveaux marqueurs gnomiques en copie unique. Ces analyses rvlent que la diffrenciation gnomique est prsente de manire systmatique dans deux espces (G. irregulare et G. diaphanum). Conclusions Les rsultats de cette thse fournissent des preuves supplmentaires en faveur du scnario dune diffrenciation gnomique entre noyaux au sein du mme isolat mycorhizien. Ainsi, au moins trois membres du genre Glomus, G. irregulare, G. diaphanum and G. etunicatum, apparaissent comme des organismes dont lorganisation des gnomes ne peut pas tre dcrit daprs un modle Mendlien strict, ce qui corrobore lhypothse que les noyaux mycorhiziens gntiquement diffrencis forment un pangenome.
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Linflammation: Une rponse adaptative du systme immunitaire face une insulte est aujourdhui reconnue comme une composante essentielle presque toutes les maladies infectieuses ou autres stimuli nfastes, tels les dommages tissulaires incluant linfarctus du myocarde et linsuffisance cardiaque. Dans le contexte des maladies cardiovasculaires, linflammation se caractrise principalement par une activation long terme du systme immunitaire, menant une faible, mais chronique scrtion de peptides modulateurs, appels cytokines pro-inflammatoires. En effet, la littrature a montr plusieurs reprises que les patients souffrant darythmies et de dfaillance cardiaque prsentent des taux levs de cytokines pro-inflammatoires tels le facteur de ncrose tissulaire alpha (TNF), linterleukine 1 (IL-1) et linterleukine 6. De plus, ces patients souffrent souvent dune baisse de la capacit contractile du myocarde. Le but de notre tude tait donc de dterminer si un lien de cause effet existe entre ces phnomnes et plus spcifiquement si le TNF, lIL-1 et lIL-6 peuvent affecter les proprits lectriques et contractiles du cur en modulant le courant Ca2+ de type L (ICaL) un courant ionique qui joue un rle primordial au niveau de la phase plateau du potentiel daction ainsi quau niveau du couplage excitation-contraction. Les possibles mchansimes par lesquels ces cytokines exercent leurs effets seront aussi explors. Pour ce faire, des cardiomyocytes ventriculaires de souris nouveau-nes ont t mis en culture et traits 24 heures avec des concentrations pathophysiologiques (30 pg/mL) de TNF, IL-1 ou IL-6. Des enregistrements de ICaL raliss par la technique du patch-clamp en configuration cellule entire ont t obtenus par la suite et les rsultats montrent que le TNF naffecte pas ICaL, mme des concentrations plus leves (1 ng/mL). En revanche, lIL-1 rduisait de prs de 40% la densit dICaL. Afin dexaminer si le TNF et lIL-1 pouvaient avoir un effet synergique, les cardiomyocytes ont t trait avec un combinaison des deux cytokines. Toutefois aucun effet synergique sur ICaL na t constat. En outre, lIL-6 rduisait ICaL significativement, cependant la rduction de 20% tait moindre que celle induite par IL-1. Afin dlucider les mcanismes sous-jacents la rduction de ICaL aprs un traitement avec IL-1, lexpression dARNm de CaV1.2, sous-unité codante pour ICaL, a t mesure par qPCR et les rsultats obtenus montrent aucun changement du niveau dexpression. Plusieurs tudes ont montr que linflammation et le stress oxydatif vont de pair. En effet, limagerie confocale nous a permis de constater une augmentation accrue du stress oxydatif induit par IL-1 et malgr un traitement aux antioxydants, la diminution de ICaL na pas t prvenue. Cette tude montre quIL-1 et IL-6 rduisent ICaL de faon importante et ce indpendamment dune rgulation transcriptionelle ou du stress oxydatif. De nouvelles donnes prliminaires suggrent que ICaL serait rduit suite lactivation des protines kinase C mais des tudes additionelles seront ncessaires afin dtudier cette avenue. Nos rsultats pourraient contribuer expliquer les troubles du rythme et de contractilit observs chez les patients souffrant de dfaillance cardiaque.
