Functional analysis of GNA -1, a Galphai superfamily member found in the filamentous fungus Neurospora crassa

Heterotrimeric GTP-binding proteins, G proteins, are integral components of eukaryotic signaling systems linking extracellular signals to intracellular responses. Through coupling to seven-transmembrane helix receptors, G proteins convey primary signaling events into multi-leveled cascades of intracellular activity by regulating downstream enzymes, collectively called effectors. The effector enzymes regulated by G proteins include adenylyl cyclase, cAMP phosphodiesterase, phospolipase C-β, mitogen-activated protein kinases, and ion channels. ^ Neurospora crassa is a multicellular, filamentous fungus that is capable of both asexual and sexual reproduction by elaboration of specialized, developmentally controlled structures that give rise to either asexual or sexual spores, respectively. N. crassa possesses at least three heterotrimeric Gα proteins (GNA-1–3) and one Gβ subunit (GNB-1). GNA-1 was the first microbial protein that could be classified in the Gαi superfamily based on its amino acid identity and demonstration that it is a substrate for ADP-ribosylation by pertussis toxin. ^ Experiments were designed to identify the signal transduction pathways and the effector enzymes regulated by GNA-1. Targeted gene-replacement of gna-1 revealed that GNA-1 controls multiple developmental pathways including both asexual and sexual reproduction, maintenance of growth, and resistance to osmotic stress. The Gαi and Gαz members of the Gαi superfamily negatively regulate adenylyl cyclase activity in mammalian cells; therefore, adenylyl cyclase and cAMP levels were measured in Δgna-1 strains and also in strains that were deleted for both gna-1 and gna-2, a second Gα in N. crassa shown to have overlapping functions with GNA-1. Direct measurements of adenylyl cyclase activity revealed that GNA-1, but not GNA-2, was responsible for GTP-stimulated adenylyl cyclase activity in N. crassa. Furthermore, anti-GNA-1 IgG could specifically inhibit GTP-stimulated adenylyl cyclase activity in wild-type strain extracts. These studies also provided evidence that N. crassa possesses feedback mechanisms that control steady-state cAMP levels through indirect regulation of cAMP-phosphodiesterase activity; mutations in gna-1 and gna-2 were additive in their effect on lowering cAMP-phosphodiesterase activity under growth conditions where steady-state cAMP levels were normal but GTP-stimulated adenylyl cyclase activity was reduced 90% in comparison to control strains. ^ Genetic and biochemical epistasis experiments utilizing a Δ gna-1 cr-1 mutant suggest that GNA-1 is essential for female fertility in a cAMP-independent pathway. Furthermore, deletion of gna-1 in a cr-1 background exacerbated many of the defects already observed in the cr-1 strain including more severe growth restriction and developmental defects. However, deletion of gna-1 had no effect on the increased thermotolerance of cr-1, which has been attributed to loss of cAMP. cr-1 possesses GNA-1 protein, and crude membrane fractions from this strain reconstituted GTP-stimulated adenylyl cyclase activity in Δgna-1 membrane fractions. These studies provide direct evidence for the involvement of Gα proteins in the regulation of adenylyl cyclase activity in eukaryotic microbes. ^

Functional analysis of the Galpha protein, GNA -3, in the development of Neurospora crassa using biochemical and genetic studies

Extracellular signals regulate fungal development and, to sense and respond to these cues, fungi evolved signal transduction pathways similar to those in mammalian systems. In fungi, heterotrimeric G proteins, composed of α, β, and γ subunits, transduce many signals, such as pheromones and nutrients, intracellularly to alter adenylyl cyclase and MAPK cascades activity. ^ Previously, the Gα proteins GNA-1 and GNA-2 were characterized in regulating development in the fungus Neurospora crassa. R. A. Baasiri isolated a third Gα, gna-3, and P. S. Rowley generated Δgna-3 mutants. GNA-3 belongs to a fungal Gα family that regulates cAMP metabolism and virulence. The Δ gna-3 sexual cycle is defective in homozygous crosses, producing inviable spores. Δgna-3 mutants have reduced aerial hyphae formation and derepressed asexual sporulation (conidiation), causing accumulation of asexual spores (conidia). These defects are similar to an adenylyl cyclase mutant, cr-1; cAMP supplementation suppressed Δ gna-3 and cr-1. Inappropriate conidiation and expression of a conidiation gene, con-10, were higher in Δ gna-3 than cr-1 submerged cultures; peptone suppressed conidiation. Adenylyl cyclase activity and expression demonstrated that GNA-3 regulates enzyme levels. ^ A Δgna-1 cr-1 was analyzed with F. D. Ivey to differentiate GNA-1 roles in cAMP-dependent and -independent pathways. Δ gna-1 cr-1 defects were worse than cr-1 and refractory to cAMP, suggesting that GNA-1 is necessary for sensing extracellular CAMP. Submerged culture conidiation was highest in Δgna-1 cr-1, and only high cell density Δgna-1 cultures conidiated, which correlated with con-10 levels. Transcription of a putative heat shock cognate protein was highest in Δgna-1 cr-1. ^ Functional relationships between the three Gαs was analyzed by constructing Δgna-1 Δgna-2 Δ gna-3, Δgna-1 Δgna-3, and Δgna-2 Δgna-3 strains. Δ gna-2 Δgna-3 strains exhibited intensified Δ gna-3 phenotypes; Δgna-1 Δgna-2 Δgna-3 and Δgna-1 Δ gna-3 strains were identical to Δgna-1 cr-1 on plates and were non-responsive to cAMP. The highest levels of conidiation and con-10 were detected in submerged cultures of Δ gna-1 Δgna-2 Δgna-3 and Δgna-1 Δgna-3 mutants, which was partially suppressed by peptone supplementation. Stimulation of adenylyl cyclase is completely deficient in Δgna-1 Δ gna-2 Δgna-3 and Δgna-1 Δ gna-3 strains. Δgna-3 and Δ gna-1 Δgna-3 aerial hyphae and conidiation defects were suppressed by mutation of a PKA regulatory subunit. ^

Untersuchung der grund-säze von der staats-wirthschaft als ein versuch über die wissenschaft von der innerlichen politik bey freyen nationen, aus dem Englischen übersezt. Mit Chur-fürstl. Sächs. gnäd. freyheit.

Volume 3 has 2 parts; each part has special title-page and separate paging.

A mágnás-czím a magyarban : történeti és népnyelvi tanulmány /

Cover title.

Das füsschen der gnädigen frau und anderes.

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Tratamento dos transtornos alimentares: fatores associados ao abandono

RESUMO Objetivos Traçar o perfil do abandono do tratamento de pacientes com transtornos alimentares (TA) em um serviço especializado e investigar os fatores associados. Métodos Estudo transversal com delineamento quantitativo do tipo comparativo. Todos os prontuários de pacientes atendidos pelo serviço, entre 1982 e 2013, foram revisados para coletar dados sociodemográficos, clínicos e antropométricos (no primeiro e último atendimento), e resultado do tratamento. Os dados foram analisados pelo programa SPSS e R. Foram utilizados testes qui-quadrado de Pearson, exato de Fisher, não paramétrico de Mann-Whitney e análise de regressão logística. Resultados Dos pacientes, 66,7% abandonaram o tratamento (Grupo Abandono – GA) e 33,3% tiveram outros resultados (Grupo Não Abandono – GNA). No GA, a maioria era do sexo feminino, de Ribeirão Preto e região, estudantes, solteiros, com escolaridade mínima do nível fundamental e com anorexia nervosa (AN). Houve associação significativa com o abandono nas variáveis Hipótese Diagnóstica (p = 0,049), Comorbidades Psiquiátricas (p = 0,001), Depressão (p = 0,048), Transtornos de Personalidade (p = 0,001), Comorbidades Clínicas (< 0,001) e Osteopenia (p = 0,007). No GA, eles tinham peso adequado e ausência de amenorreia, tanto no início quanto no final do seguimento. O estado nutricional adequado e a ausência de comorbidades clínicas se associaram com o abandono. Conclusões A taxa de abandono do serviço é alta e pacientes nessa condição eram adultos jovens, tinham diagnóstico de AN, longo tempo de sintomas antes do início do tratamento e estavam há menos de seis meses no seguimento. Estudos prospectivos poderão contribuir para pesquisas dirigidas ao abandono do seguimento desses pacientes, buscando melhor compreensão dessas doenças e seu tratamento.

Caracterização fenotípica e diversidade de bactérias diazotróficas associativas isoladas de solos em reabilitação após a mineração de bauxita

As gramíneas, usadas comumente para reabilitação de áreas degradadas, podem formar associações em suas raízes com bactérias fixadoras de nitrogênio e, assim, contribuir para a sustentabilidade do ecossistema. Por outro lado, a diversidade microbiana exerce papel relevante na resiliência dos processos biológicos do solo, que incluem a fixação biológica de N2. O presente estudo teve como objetivo a caracterização fenotípica de 72 isolados de bactérias diazotróficas associativas Gram-negativas, oriundos de áreas sob diferentes estratégias de reabilitação, após a mineração da bauxita em Poços de Caldas (MG), por meio da inoculação de amostras de solo nos meios de cultivo NFb, Fam e JNFb. Estirpes tipo e referência de espécies de Azospirillum, Herbaspirillum e Burkholderia foram usadas para comparação, uma vez que são capazes de crescer nestes meios. O dendrograma de similaridade baseado em sete características culturais dos isolados em meio de cultivo GNA revelou grande diversidade, sendo obtidos 50 grupos a 81 % de similaridade. A tolerância a NaCl em meio de cultivo batata/sacarose/ácido málico variou de 0 a 50 g L-1, permitindo separar os isolados e estirpes tipo em cinco grupos. O diâmetro celular variou de 0,61 a 1,21 µm, e 13 isolados diferiram das estirpes tipo e referência. Os padrões de proteína total, obtidos por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), foram bastante diversos, possibilitando a formação de 15 grupos com similaridade a 75 %. Não houve relação entre os grupos formados pelas várias características estudadas, tampouco destes com as áreas de origem dos isolados. Os meios de cultivo Fam e JNFb detectaram, além das espécies-alvo, outras não identificadas. A alta dissimilaridade da maioria dos isolados em relação a estirpes tipo, principalmente com relação aos padrões eletroforéticos de proteína total, admite a possibilidade da presença de novas espécies entre eles.

Settlement At Culverts, May 1984

Research project HR-219 was sponsored by the Iowa Highway Research Board and the Iowa Department of Transportation. The funding authorized from the Primary Road Research Fund was $11,200. The author wishes to express his appreciation to Iowa DOT personnel for their participation in the research. The special features were incorporated into the plans by Road Design personnel. Office of Materials personnel developed the proportions for the flowable mortar. Project inspection was provided by the Creston Resident Engineer and his staff. The excellent cooperation of the contractors contributed to the success of the research. The prime contractor was Irving F. Jensen Company, Inc. of Sioux City, Iowa who retained Reilly Construction Company of Ossian, Iowa and GNA Concrete, Inc. of Grimes, Iowa as subcontractors for the special culvert backfilling.

Variation of grain nitrogen content in relation with grain yield in old and modern Spanish wheats grown under a wide range of agronomic conditions in a Mediterranean region

Wheat yield and grain nitrogen concentration (GNC; mg N/g grain) are frequently negatively correlated. In most growing conditions, this is mainly due to a feedback process between GNC and the number of grains/m2. In Mediterranean conditions, breeders may have produced cultivars with conservative grain set. The present study aimed at clarifying the main physiological determinants of grain nitrogen accumulation (GNA) in Mediterranean wheat and to analyse how breeding has affected them. Five field experiments were carried out in north-eastern Spain in the 2005/06 and 2006/ 07 growing seasons with three cultivars released at different times and an advanced line. Depending on the experiment, source-sink ratios during grain filling were altered by reducing grain number/m2 either through pre-anthesis shading (unshaded control or 0.75 shading only between jointing and anthesis) or by directly trimming the spikes after anthesis and before the onset of the effective grain filling period (un-trimmed control or spikes halved 7–10 days after anthesis). Grain nitrogen content (GN content ; mg N/grain) decreased with the year of release of the genotypes. As the number of grains/m2 was also increased by breeding there was a clear dilution effect on the amount of nitrogen allocated to each grain. However, the increase in GN content in old genotypes did not compensate for the loss in grain nitrogen yield (GNY) due to the lower number of grains/m2. GN content of all genotypes increased (increases ranged from 0.13 to 0.40 mg N/grain, depending on experiment and genotype) in response to the post-anthesis spike trimming or pre-anthesis shading. The degree of source-limitation for GNA increased with the year of release of the genotypes (and thus with increases in grain number/m2) from 0.22 (mean of the four manipulative experiments) in the oldest cultivar to 0.51 (mean of the four manipulative experiments) in the most modern line. It was found that final GN content depended strongly on the source-sink ratio established at anthesis between the number of grains set and the amount of nitrogen absorbed at this stage. Thus, Mediterranean wheat breeding that improved yield through increases in grain number/m2 reduced the GN content by diluting a rather limited source of nitrogen into more grains. This dilution effect produced by breeding was further confirmed by the reversal effect produced by grain number/m2 reductions due to either pre-anthesis shading or post-anthesis spike trimming.

Akvarell

Soitinnus: puheääni, piano.

Fyra vita mosar

Soitinnus: puheääni, piano.

Aino-taru

Mukana myös luonnoksia, arvosteluja, stemmoja ja Kamarilaulaja-lehti (1953, No 18), jossa käsitellään Helsingin Kamarikuoron Euroopan-kiertuetta.

Ação da l-arginina na evolução de retalhos cutâneos de ratos sob exposição à nicotina

OBJETIVO: Avaliar se o tratamento com L-arginina influencia a cicatrização de retalhos cutâneos em ratos expostos à nicotina. MÉTODOS: Foram utilizados 40 ratos Wistar pesando 142,4±10,1g separados em quatro grupos: GC- tratamento com solução tampão fosfatos pH 7,4, confecção de retalho cutâneo, observação por 10 dias; GN- exposição à nicotina por quatro semanas, confecção de retalho cutâneo, observação por dez dias; GA- tratamento com solução tampão fosfatos pH 7,4 por quatro semanas, confecção de retalho cutâneo, tratamento com arginina por dez dias; GAN- exposição à nicotina por quatro semanas, confecção de retalho cutâneo, tratamento com arginina por dez dias. Foram avaliadas as áreas de necrose, re-epitelização, reação inflamatória e formação de tecido de granulação, pela coloração HE, a área de deposição total e a diferenciação de colágenos I e III por histometria com a coloração de picrosirius, e, através da marcação imunoistoquímica com anticorpo monoclonal anti-CD34, a densidade vascular cicatricial. RESULTADOS: As porcentagens de áreas de necrose de GN e GNA foram maiores (p<0,001) do que GC e GA. Nos escores histológicos, a deposição de colágeno e a porcentagem de colágeno tipo I, no GC e GA foram similares (p>0,05) e maiores (p<0,001) do que em GA e em GNA e, nas densidades vasculares, GN e GAN foram menores (p<0,001) do que em GC e em GA. CONCLUSÃO: A exposição à nicotina inibiu os efeitos da arginina, e nos ratos não expostos, induziu melhora na angiogênese e na deposição de colágeno total nos retalhos cutâneos.

Desempenho ponderal, aspectos econômicos, nutricionais e clínicos de caprinos submetidos a dois esquemas de suplementação mineral

O desempenho ponderal, os custos e os aspectos nutricionais e clínicos foram avaliados em 16 caprinos (8 pequenos e 8 maiores) submetidos a dois tipos de suplementação mineral por 148 dias. Um grupo recebeu uma mistura mineral comercial e outro, uma mistura mineral (sal seletivo) formulado apenas com cloreto de sódio (239 gNa/kg), superfosfato simples (34 gP/kg) e sulfato de cobre (1244 mgCu/kg). Não houve diferença estatística no ganho de peso diário entre os grupos de animais que receberam o suplemento mineral comercial ou o sal seletivo. O menor consumo do sal seletivo (66% do verificado na mistura mineral comercial), observado no lote de animais maiores, deveu-se ao teor mais alto de NaCl na composição desse suplemento; essa menor ingestão representou um gasto 3,9 menor na suplementação mineral desses animais. Em relação aos animais pequenos, houve um consumo exagerado do sal seletivo, durante os primeiros 3 meses e, depois dessa fase, o consumo de ambos os suplementos foi idêntico. Esse maior consumo pode estar associado ao fato de que os animais eram lactentes antes do experimento e, quando tiveram acesso ao sal seletivo contendo mais cloreto de sódio, possivelmente tiveram maior apetite para esse suplemento. Todos os animais que receberam os dois tipos de suplementação mineral apresentaram evidente melhora da qualidade da pelagem geral e aumento da pigmentação na pelagem periocular, o que foi atribuído à correção da moderada deficiência de cobre existente nos solos da região; pois o rebanho não recebia suplemento mineral antes do início do experimento. Nos animais maiores, ambos os suplementos foram capazes de aumentar o número de hemácias, a concentração de hemoglobina e o hematócrito. Pela análise mineral do capim e da ração, bem como da quantificação do consumo diário desses alimentos, demonstrou-se que apenas o consumo do volumoso foi capaz de fornecer o cálcio e o cobalto necessário aos animais maiores e, em relação à ingestão de fósforo, apenas o consumo da ração concentrada foi suficiente para suprir os requerimentos dos dois grupos de animais. As exigências de zinco foram supridas pela ingestão da ração e do volumoso. Além dos cálculos sobre o consumo de fósforo, cálcio, cobalto e zinco demonstrarem que as exigências desses minerais foram totalmente atendidas apenas com a ingestão da ração concentrada e do volumoso; clinicamente os animais não apresentaram quaisquer sinais diretos ou indiretos de deficiência desses elementos. Esses fatos reforçam a hipótese de que quando os animais são alimentados com rações concentradas e volumosos de boa qualidade, poucos serão os elementos minerais a serem supridos - especificamente, neste sistema de criação desta região, apenas o sódio e o cobre. Os resultados desse estudo endossam a idéia de que a suplementação seletiva, conceito que significa fornecer apenas os elementos minerais que efetivamente estão em falta na dieta dos animais, está correta, e implica em marcada redução nos custos com a suplementação mineral do rebanho.

Glomerulonefrite aguda após infecção de vias aéreas superiores ou pele: análise descritiva de 82 pacientes entre 14 e 64 anos de idade

INTRODUÇÃO: A glomerulonefrite aguda (GNA) após infecção de vias aéreas superiores ou pele é uma doença renal causada geralmente por cepas estreptocócicas nefritogênicas, podendo cursar com quadro súbito de hematúria macroscópica, hipertensão arterial, edema e, ocasionalmente, insuficiência renal aguda, sendo comum na infância e pouco incidente em adultos e indivíduos mais jovens. OBJETIVO: Analisar, de forma descritiva, os dados da apresentação inicial da GNA após infecção de vias aéreas superiores ou pele em pacientes com mais de 14 anos de idade, com ênfase em seus aspectos epidemiológicos e clínicos. PACIENTES E MÉTODOS: Foram analisados os dados clínicos de 82 pacientes, atendidos em nosso Serviço no período de 1972 a 2001, distribuídos em três grupos etários: grupo 1, com indivíduos entre 14 e 20 anos (n = 52); grupo 2, entre 21 e 30 anos (n = 19); e grupo 3, com idade > 31 anos (n = 11). RESULTADOS: Houve um predomínio do quadro entre pacientes mais jovens (grupo 1), do sexo masculino e da cor branca, precedido, principalmente, por infecção de pele, manifestando-se mais comumente por edema de membros inferiores e/ou face. Em alguns casos, até com síndrome nefrótica, e hipertensão arterial, sobretudo nos adultos com mais de 30 anos (grupo 3), sendo menos frequente o achado de hematúria macroscópica e, raramente, de insuficiência renal aguda. CONCLUSÃO: Nossos achados ressaltam a importância de se estudar a GNA após infecção de vias aéreas superiores ou pele em indivíduos mais jovens e adultos, procurando melhor caracterizar seus aspectos clínicos, sobretudo por se tratar de um grupo de pacientes no qual a doença é menos incidente.