Expression, purification, and characterization of biol: A carbon-carbon bond cleaving cytochrome P450 involved in biotin biosynthesis in Bacillus subtilis

Pimelic acid formation for biotin biosynthesis in Bacillus subtilis has been proposed to involve a cytochrome P450 encoded by the gene biol. We have subcloned bioI and overexpressed the encoded protein, BioI. A purification protocol was developed utilizing ion exchange, gel filtration, and hydroxyapatite chromatography, Investigation of the purified BioI by UV-visible spectroscopy revealed spectral properties characteristic of a cytochrome P450 enzyme. BioI copurifies with acylated Escherichia coil acyl carrier protein (ACP), suggesting that in vivo a fatty acid substrate may be presented to BioI as an acyl-ACP. A combination of electrospray mass spectrometry of the intact acyl-ACP and GCMS indicated a range of fatty acids were bound to the ACP. A catalytically active system has been established employing E. coli flavodoxin reductase and a novel, heterologous flavodoxin as the redox partners for BioI. In this system, BioI cleaves a carbon-carbon bond of an acyl-ACP to generate a pimeloyl-ACP equivalent, from which pimelic acid is isolated after base-catalyzed saponification. A range of free fatty acids have also been explored as potential alternative substrates for BioI, with C16 binding most tightly to the enzyme. These fatty acids are also metabolized to dicarboxylic acids, but with less regiospecificity than is observed with acyl-ACPs. A possible mechanism for this transformation is discussed. These results strongly support the proposed role for BioI in biotin biosynthesis. In addition, the production of pimeloyl-ACP explains the ability of BioI to function as a pimeloyl CoA source in E. coli, which, unlike B. subtilis, is unable to utilize free pimelic acid for biotin production. (C) 2000 Academic Press.

Influência do ensilado biológico de Peixe e do resíduo de Peixe cozido no crescimento e na composição corporal de Alevinos de Tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier, 1818)

Resíduos de fíletagem de piramutaba (Brachyplatystoma vaillantii), foram submetidos a dois diferentes processamentos, o cozimento após moagem, e a ensilagem biológica. Os materiais resultantes destes processamentos foram testados através do desempenho e da composição corporal de alevinos de tambaqui (Colossoma macropomum). Foram elaboradas quatro rações com teores de proteína de 24,7 a 27,0% e energia bruta entre 438,9 e 445,4 Kcal/l00g de ração. O experimento foi conduzido em 20 tanques de cimento-amianto com capacidade para 250 litros, cada um estocado com 12 alevinos, com comprimento padrão médio de 10,3 cm e peso médio de 27,4 g. Os alevinos foram alimentados duas vezes ao dia à razão de 3% da biomassa e pesados a cada 28 dias. Análises bromatológicas no início e no final do experimento determinaram a composição corporal dos peixes. As análises de variância dos dados obtidos não evidenciaram influência significativa (P>0,05) dos tratamentos sobre os parâmetros estudados.

Programa de an??lisis estad??stico para estudios m??dicos y biol??gicos

Se presenta experiencia educativa que propone la elaboraci??n de materiales relacionados con el ciclo formativo de grado superior sobre higiene bucodental. Se realiza en el IES Aynadamar en Granada. Los objetivos son: colaborar en la realizaci??n de estudios de salud comunitaria y realizar programas de prevenci??n bucodental. El proceso consta de varias fases: b??squeda de informaci??n y elaboraci??n de materiales; estudio de programas inform??ticos; elaboraci??n de un cuestionario para una encuesta sobre salud mental; estudio de la salud bucodental del alumnado del centro.

La agricultura biol??gica en la escuela

Se publica el trabajo realizado como m??todo de trabajo para las escuelas rurales asturianas. Trata de fundamentar te??ricamente y ampliar los conocimientos pr??cticos que los alumnos tienen sobre las distintas t??cnicas de explotaci??n de los cultivos de la zona. Se ofrecen los objetivos espec??ficos del proyecto, los contenido a estudiar, tipos de tierra, semilleros, t??cnicas de cultivo, influencia de la luna, elaboraci??n de men??s tomando como base los cultivos de la zona, etc. Luego se ofrecen actividades para los alumnos divididas en propuestas para cada uno de los ciclos, Inicial, Medio y Superior de EGB y otras para todos los ciclos. La metodolog??a se basa en los siguientes principios: actividad, inducci??n, globalizaci??n, creatividad, individualizaci??n, socializaci??n e inter??s. La evaluaci??n se divide en inicial mediante preguntas directas a los alumnos, continua a trav??s de observaci??n directa y final eminentemente pr??ctica, comprobando si se ponen en pr??ctica lo que se hab??a estudiado en el aula.