Étude de la résistance aux antibiotiques des entérocoques d'origine animale du Québec

Les entérocoques font partie de la flore normale intestinale des animaux et des humains. Plusieurs études ont démontré que les entérocoques d’origine animale pouvaient représenter un réservoir de gènes de résistance aux antibiotiques pour la communauté humaine et animale. Les espèces Enterococcus faecalis et Enterococcus faecium sont importantes en santé publique; elles sont responsables d’environ 12% de toutes les infections nosocomiales aux États-Unis. Au Canada, les cas de colonisation et/ou d’infections à entérocoques résistants à la vancomycine ont plus que triplé de 2005 à 2009. Un total de 387 isolats E. faecalis et E. faecium aviaires, et 124 isolats E. faecalis porcins ont été identifiés et analysés pour leur susceptibilité aux antibiotiques. De hauts pourcentages de résistance envers les macrolides et les tétracyclines ont été observés tant chez les isolats aviaires que porcins. Deux profils phénotypiques prédominants ont été déterminés et analysés par PCR et séquençage pour la présence de gènes de résistance aux antibiotiques. Différentes combinaisons de gènes de résistance ont été identifiées dont erm(B) et tet(M) étant les plus prévalents. Des extractions plasmidiques et des analyses par hybridation ont permis de déterminer, pour la première fois, la colocalisation des gènes erm(B) et tet(M) sur un plasmide d’environ 9 kb chez des isolats E. faecalis porcins, et des gènes erm(B) et tet(O) sur un plasmide de faible poids moléculaire d’environ 11 kb chez des isolats E. faecalis aviaires. De plus, nous avons démontré, grâce à des essais conjugatifs, que ces plasmides pouvaient être transférés. Les résultats ont révélé que les entérocoques intestinaux aviaires et porcins, lesquels peuvent contaminer la viande à l’abattoir, pouvaient représenter un réservoir de gènes de résistance envers la quinupristine-dalfopristine, la bacitracine, la tétracycline et les macrolides. Afin d’évaluer l’utilisation d’un antisérum polyclonal SA dans l’interférence de la résistance à de fortes concentrations de bacitracine (gènes bcrRAB), lors d’un transfert conjugatif répondant aux phéromones, un isolat multirésistant E. faecalis aviaire a été sélectionné. Après induction avec des phéromones produites par la souche réceptrice E. faecalis JH2-2, l’agrégation de la souche donatrice E. faecalis 543 a été observée ainsi que des fréquences de transfert élevées en bouillon lors d’une courte période de conjugaison. Le transfert conjugatif des gènes asa1, traB et bcrRAB ainsi que leur colocalisation a été démontré chez le donneur et un transconjugant T543-1 sur un plasmide de 115 kb par électrophorèse à champs pulsé (PFGE) et hybridation. Une CMI de > 2 048 µg/ml envers la bacitracine a été obtenue tant chez le donneur que le transconjuguant tandis que la souche réceptrice JH2-2 démontrait une CMI de 32 µg/ml. Le séquençage des gènes asa1, codant pour la substance agrégative, et traB, une protéine régulant négativement la réponse aux phéromones, a révélé une association de cet élément génétique avec le plasmide pJM01. De plus, cette étude présente qu’un antisérum polyclonal SA peut interférer significativement dans le transfert horizontal d’un plasmide répondant aux phéromones codant pour de la résistance à de fortes doses de bacitracine d’une souche E. faecalis aviaire multirésistante. Des isolats cliniques E. faecium d’origine humaine et canine ont été analysés et comparés. Cette étude rapporte, pour la première fois, la caractérisation d’isolats cliniques E. faecium résistants à l’ampicilline (EFRA) d’origine canine associés à CC17 (ST17) au Canada. Ces isolats étaient résistants à la ciprofloxacine et à la lincomycine. Leur résistance envers la ciprofloxacine a été confirmée par la présence de substitutions dans la séquence en acides aminés des gènes de l’ADN gyrase (gyrA/gyrB) et de la topoisomérase IV (parC/parE). Des résistances élevées envers la gentamicine, la kanamycine et la streptomycine, et de la résistance envers les macrolides et les lincosamides a également été observées. La fréquence de résistance envers la tétracycline était élevée tandis que celle envers la vancomycine n’a pas été détectée. De plus, aucune résistance n’a été observée envers le linézolide et la quinupristine-dalfopristine. Les données ont démontré une absence complète des gènes esp (protéine de surface des entérocoques) et hyl (hyaluronidase) chez les isolats canins EFRA testés tandis qu’ils possédaient tous le gène acm (adhésine de liaison au collagène d’E. faecium). Aucune activité reliée à la formation de biofilm ou la présence d’éléments CRISPR (loci de courtes répétitions palindromiques à interespaces réguliers) n’a été identifiée chez les isolats canins EFRA. Les familles de plasmide rep6 and rep11 ont significativement été associées aux isolats d’origine canine. Les profils PFGE des isolats d’origine humaine et canine n'ont révélé aucune relation (≤ 80%). Ces résultats illustrent l'importance d'une utilisation judicieuse des antibiotiques en médecine vétérinaire afin d’éviter la dissémination zoonotique des isolats EFRA canins. Nous pensons que ces résultats contribueront à une meilleure compréhension des mécanismes de résistance aux antibiotiques et de leurs éléments mobiles ainsi qu’à de nouvelles stratégies afin de réduire le transfert horizontal de la résistance aux antibiotiques et des facteurs de virulence.

T-dependent B cell activation and differentiation in Lat Y136F mice : polyclonal response leading to autoimmune disease

SUMMARY LatY136F knock-in mice harbor a point mutation in tyrosine 136 of the linker for activation of T cells (LAT), and show accumulation of TH2 effector cells leading to IgG1 and IgE hypergammaglobulinemia. The observed polyclonal. B cell activation was not a direct effect of the mutation on B cells since in the absence of T cells mutant B cells did not show an activated phenotype. After adoptive transfer of LAT mutant T cells into wild type (WT) Tcell-deficient recipients, recipient B cells became activated. We show in vivo and in vitro that the LatY136F mutation promotes Tcell-dependent B cell activation leading to germinal center, memory and plasma cell formation even in the absence of MHC class II. This effect was, however, dependant on CD40 and CD80/CD86. All the plasma and memory B cell populations found in physiological T cell-dependent B cell responses were found. Characterization of the abundant plasmablasts observed in. secondary lymphoid organs of LatY136F mice revealed the presence of a previously uncharacterized CD93expressing subpopulation, whose existence was confirmed in WT mice after immunization. In LatY136F mice, B cell activation was polyclonal and not antigen-driven, since the increase in serum IgG1 and IgE concentrations involved antibodies and autoantibodies with different specificities equally. Although the non-complement-fixing IgG1 and IgE were the only isotypes significantly increased in LatY136F serum, we observed early onset of systemic autoimmunity with nephritis showing IgE autoantibody deposits and severe proteinuria. These results show that TH2 cells developing in LatY136F mice can trigger polyclonal B cell activation and thereby lead to systemic autoimmune disease. RESUME Les souris présentent une mutation ponctuelle au niveau de la tyrosine 136 de l'adaptateur requis pour l'activation des cellules T (LAT) et développent, de ce fait, une accumulation de cellules T effectrices de type TH2 ainsi qu'une hypergammaglobulémie des isotypes IgG1 et IgE. Dans ce modèle murin, l'activation des cellules B et la production d'anticorps qui y est associée ne sont pas dues à un effet direct de la mutation. Nous avons mis en évidence que l'interaction physique entre cellules T activées et cellules B est indispensable au développement de ce phenotype. D'un point de vue moléculaire, cette interaction ne requiert pas l'intervention des complexes majeurs d'histocompatibilité de classe II, garant de la spécificité d'une réponse immunitaire. Cependant, les molécules de costimulation CD40 et CD80/CD86 sont indispensables à une réponse complète des cellules B. Les souris LatY136F développent d'importantes populations de cellules B des centres germinatifs, de cellules B mémoires ainsi que de cellules sécrétant des anticorps, qui présentent les mêmes caractéristiques que lors d'une réponse immunitaire à un antigène classique. En observant plus précisément les plasmablastes présents dans les ganglions des souris LatY13sF, nous avons détecté une sous-population exprimant CD93; l'expression de ce marqueur par les cellules B n'a jamais été mise en évidence durant une réponse immunitaire. Cependant, notre étude a permis de confirmer sa présence, dans les ganglions de souris de type sauvage, lors d'immunisation avec différents antigènes. Nous avons montré que l'activation des cellules B des souris LatY136F est polyclonale et n'est pas dirigée par un antigène; les taux d'autoanticorps augmentent de manière proportionnelle à ceux des anticorps totaux. Bien que les IgG1 et les IgE ne soient pas des isotypes connus pour leurs propriétés pathogéniques, nous avons observé le développement d'une autoimmunité systémique caractérisée par une néphrite impliquant des dépôts d'autoanticorps du type IgE ainsi que par une sévère proteinurée.

Immunolocalisation of secreted-excreted products of Meloidogyne spp. using polyclonal and monoclonal antibodies

Molecules expressed at the surface cuticle (SC) of plant parasitic nematodes represent the primary plant-nematode interface, and together with secreted-excreted (S-E) products are probably the first signals perceived by the host. These molecules, which are released into plant tissue, probably play important roles in the host-parasite interactions. Characterisation of these antigens will help in the identification of nematode targets useful for novel control strategies, which interfere with the nematode infection of plants. Three monoclonal (MAbs) and three polyclonal (PAbs) antibodies produced to S-E products of Meloidogyne spp. and Heterodera avenae were used to examine their reactivity towards M. incognita and/or M. arenaria second stage juveniles and adult females. The three PAbs showed cross-reactivity with M. incognita and M. arenaria. Antibody Roth-PC 373 strongly recognised molecules present in the SC, amphids and intestine, antibody Roth-PC 389 recognised the nematode amphids and metacorpus, while antibody Roth-PC 419 bound to molecules present in the subventral glands. Reactivity of the MAbs was only tested against M. arenaria. Monoclonal antibody Roth-MAb T116C1.1 showed intense reactivity with molecules present in the amphidial and phasmidial glands. Monoclonal antibodies Roth-MAb T46.2 and T42D.2 labeled the nematode amphids and molecules present in the nematode oesophagus (metacorpus), respectively.

Influence of a polyclonal antibody preparation on the in situ degradability of three energy sources

The objective of this study was to evaluate the effect of a polyclonal antibody preparation (PAP) against specific ruminal bacteria on the in situ degradability of dry-grounded maize grain (DMG), high moisture maize silage (HMMS) starch and citrus pulp (CiPu) pectin. Nine ruminally cannulated cows were used in a 3 x 3 Latin square design, replicated three times in a factorial arrangement of treatments of two rumen modifiers represented by monensin and PAP plus a control group, and the three energy sources (DMG, HMMS and CiPu). Each period had 21 days, where 16 were used for adaptation to treatment and five for data collection. The group treated with PAP showed an effect on the soluble fraction (""a"") of DMG starch, decreasing it by respectively 45.3% and 45.4% compared to the CON and MON groups. No effect of PAP was observed for any in situ degradability parameters of starch from HMMS or pectin of CiPu. It was concluded that the polyclonal antibody preparation had limited effect on the in situ degradability of the tested energy sources.

Generation of Polyclonal Antibodies Against Recombinant Human Glucocerebrosidase Produced in Escherichia coli

Deficiency of the lysosomal glucocerebrosidase (GCR) enzyme results in Gaucher`s disease, the most common inherited storage disorder. Treatment consists of enzyme replacement therapy by the administration of recombinant GCR produced in Chinese hamster ovary cells. The production of anti-GCR antibodies has already been described with placenta-derived human GCR that requires successive chromatographic procedures. Here, we report a practical and efficient method to obtain anti-GCR polyclonal antibodies against recombinant GCR produced in Escherichia coli and further purified by a single step through nickel affinity chromatography. The purified GCR was used to immunize BALB/c mice and the induction of anti-GCR antibodies was evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay. The specificity of the antiserum was also evaluated by western blot analysis against recombinant GCR produced by COS-7 cells or against endogenous GCR of human cell lines. GCR was strongly recognized by the produced antibodies, either as cell-associated or as secreted forms. The detected molecular masses of 59-66 kDa are in accordance to the expected size for glycosylated GCR. The GCR produced in E. coli would facilitate the production of polyclonal (shown here) and monoclonal antibodies and their use in the characterization of new biosimilar recombinant GCRs coming in the near future.

Effects of adding polyclonal antibody preparations on ruminal fermentation patterns and digestibility of cows fed different energy sources

Nine ruminally cannulated cows fed different energy sources were used to evaluate an avian-derived polyclonal antibody preparation (PAP-MV) against the specific ruminal bacteria Streptococcus bovis, Fusobacterium necrophorum, Clostridium aminophilum, Peptostreptococcus anaerobius, and Clostridium stick-landii and monensin (MON) on ruminal fermentation patterns and in vivo digestibility. The experimental design was three 3 x 3 Latin squares distinguished by the main energy source in the diet [dry-ground corn grain (CG), high-moisture corn silage (HMCS), or citrus pulp (CiPu)]. Inside each Latin square, animals received one of the feed additives per period [none (CON), MON, or PAP-MV]. Dry matter intake and ruminal fermentation variables such as pH, total short-chain fatty acids (tSCFA), which included acetate, propionate, and butyrate, as well as lactic acid and NH(3)-N concentration were analyzed in this trial. Total tract DM apparent digestibility and its fractions were estimated using chromic oxide as an external marker. Each experimental period lasted 21 d. Ruminal fluid sampling was carried out on the last day of the period at 0, 2, 4, 6, 8, 10, and 12 h after the morning meal. Ruminal pH was higher (P = 0.006) 4 h postfeeding in MON and PAP-MV groups when compared with CON. Acetate: propionate ratio was greater in PAP-MV compared with MON across sampling times. Polyclonal antibodies did not alter (P > 0.05) tSCFA, molar proportion of acetate and butyrate, or lactic acid and NH(3)-N concentration. Ruminal pH was higher (P = 0.01), 4 h postfeeding in CiPu diets compared with CG and HMCS. There was no interaction between feed additive and energy source (P > 0.05) for any of the digestibility coefficients analyzed. Starch digestibility was less (P = 0.008) in PAP-MV when compared with CON and MON. In relation to energy sources, NDF digestibility was greater (P = 0.007) in CG and CiPu vs. the HMCS diet. The digestibility of ADF was greater (P = 0.002) in CiPu diets followed by CG and HMCS. Feeding PAP-MV or monensin altered ruminal fermentation patterns and digestive function in cows; however, those changes were independent of the main energy source of the diet.

Teleassist??ncia em rede para regi??es remotas: melhorando o acesso da popula????o ?? aten????o especializada em sa??de

A iniciativa, implementada em Minas Gerais, ?? considerada uma das maiores experi??ncias de teleassist??ncia sustent??vel no mundo, servindo de modelo para outras a????es similares no Brasil e na Am??rica Latina. Sua cria????o representa uma nova atividade econ??mica, gerando um novo campo de trabalho e uma nova ??rea de pesquisa, tanto na sa??de quanto na ??rea de TI. Os resultados alcan??ados impactaram positivamente a melhoria do acesso da popula????o a servi??os especializados e a fixa????o de profissionais em localidades remotas

A estrat??gia de sa??de da fam??lia

A Sa??de da Fam??lia ?? uma estrat??gia de reorienta????o do modelo assistencial, operacionalizada mediante a implanta????o de equipes multiprofissionais em unidades b??sicas de sa??de. Essas equipes s??o respons??veis pelo acompanhamento de um n??mero definido de fam??lias, localizadas em ??rea geogr??fica delimitada. As equipes atuam com a????es de promo????o da sa??de, preven????o, recupera????o, reabilita????o de doen??as e agravos mais frequentes, e na manuten????o da sa??de dessa comunidade. A responsabilidade pelo acompanhamento das fam??lias coloca para as equipes de sa??de da fam??lia a necessidade de ultrapassar os limites classicamente definidos para a aten????o b??sica no Brasil, especialmente no contexto do SUS. A implanta????o da estrat??gia de Sa??de da Fam??lia tem demonstrado significativa melhoria nos indicadores de sa??de do pa??s, em especial na amplia????o do acesso ?? sa??de da popula????o brasileira, tendo se mostrado tamb??m efetiva na redu????o das iniquidades, cumprindo seu papel de porta de entrada do SUS

Portal corporativo da Escola Nacional de Sa??de P??blica Sergio Arouca, da Funda????o Oswaldo Cruz (Fiocruz)

O portal da ENSP foi criado como ferramenta de apoio ?? gest??o do conhecimento e para garantir a qualidade da informa????o gerada e organizada pela institui????o. Oferece um conjunto de aplicativos que consolida, gerencia, analisa e distribui informa????es, n??o s?? internamente, mas tamb??m para o p??blico externo. A integra????o desses aplicativos permite que os usu??rios possam ter um ??nico ponto de acesso ??s informa????es, permitindo ler, gravar e atualizar dados pessoais e institucionais. Nessa vers??o do portal da ENSP, os usu??rios devem-se cadastrar para ter acesso a alguns servi??os, como postagem de documentos na Biblioteca Multim??dia, coment??rios no Informe ENSP e participa????o em redes sociais, documentos internos e informa????es departamentais

Projeto Hospitais Sentinela: uma estrat??gia de vigil??ncia para a p??s-comercializa????o de produtos de sa??de

O Projeto Hospitais Sentinela, criado em 2002, ?? uma experi??ncia inovadora que congrega a Ag??ncia Nacional de Vigil??ncia Sanit??ria, Anvisa, o Sistema Nacional de Vigil??ncia Sanit??ria, SNVS, o Programa para o Desenvolvimento das Na????es Unidas, PNUD, e 180 hospitais escolhidos entre os maiores e mais complexos servi??os do pa??s para a cria????o de uma rede sentinela que objetiva obter informa????es qualificadas a respeito da qualidade dos produtos e do seu perfil de risco-benef??cio, tendo em vista o subs??dio de a????es de regula????o de mercado. O projeto tamb??m contribui para a melhoria da qualidade da aten????o ?? sa??de, por meio da busca ativa, bem como da investiga????o de eventos adversos nesses servi??os e da ado????o de medidas para a redu????o e para o controle de riscos relacionados ??s tecnologias em sa??de, inovadoras ou n??o. A avalia????o de desempenho do projeto revela-se como uma estrat??gia poderosa e de custo reduzido para a obten????o de informa????o sobre a qualidade e seguran??a de produtos sujeitos ?? vigil??ncia sanit??ria, bem como para a observa????o da difus??o, uso racional, efetividade, seguran??a e custo de novas pr??ticas em sa??de. Esses aspectos da avalia????o de desempenho do projeto possibilita recomend??-la como ferramenta de trabalho para estados e munic??pios que desejem qualificar a aten????o hospitalar em seus territ??rios

Como elaborar programa de aten????o ?? sa??de da mulher que enfrente assimetrias de cor, ra??a ou etnia?

O caso aborda o processo de estrutura????o de pol??tica p??blica voltada para o combate aos preconceitos de g??nero e ra??a no Sistema ??nico de Sa??de. Por meio da experi??ncia de Ana Cl??udia, enfermeira e pesquisadora da sa??de da mulher, s??o relatados epis??dios comuns no cotidiano de mulheres negras em per??odo de pr??-natal, parto e puerp??rio. Al??m disso, ao longo da narrativa, s??o apresentadas informa????es sobre pol??ticas, planos e projetos do setor p??blico, al??m de dados de pesquisas, sobre a tem??tica da sa??de da popula????o negra e da mulher. Apesar de seu foco na estrutura????o de um programa de combate ?? discrimina????o na sa??de p??blica, o caso suscita quest??es para debate nas ??reas de diversidade racial e de g??nero, al??m de t??picos relacionados ?? gest??o de pol??ticas p??blicas. O relato pode ser aplicado em cursos sobre pol??ticas p??blicas e desenho e gest??o de programas e projetos

Confer??ncias nacionais de sa??de e processos participativos na administra????o p??blica federal brasileira

Este caso aborda as Confer??ncias Nacionais de Sa??de (CNS) enquanto espa??os institucionais leg??timos de participa????o social que contribuem para a emerg??ncia de uma governan??a apoiada em cidadania mais engajada e ativa. O estudo de caso pretende fomentar o debate sobre a emerg??ncia de novos padr??es de rela????o entre o Estado e sociedade, e sobre o avan??o da resili??ncia nas organiza????es sociais e nas institui????es p??blicas. Pretende tamb??m levantar os novos desafios colocados para os gestores p??blicos com a amplia????o da participa????o e diversidade dos atores, al??m de maior especificidade das demandas, o que gera maiores dificuldades na obten????o de consensos e na elei????o de prioridades. O caso pode ser aplicado em cursos que abordem tem??ticas relacionadas ?? participa????o social, redes sociais, governan??a, democracia e pol??ticas p??blicas