Avaliação de antígenos do Trypanosoma Cruzi para a reação de hem aglutinação indireta: I. diferentes extratos antigênicos

Alguns procedimentos descritos na literatura (ultrasom, água destilada, NaOH, TRITON x 100 e congelamento-descongelamenao) foram avaliados determinando o melhor extrato antigênico para a reação de hemaglutinação indireta (RHI) no diagnóstico sorológico da doença de Chagas. Para isso, foram ensaiados 30 soros de indivíduos chagásicos e 30 soros de indivíduos não chagásicos. A reação de imuno-fluorescência indireta foi considerada como reação de referência no cálculo dos indices de co-positividade (i.c.p.) e co-negatividade (i.cn.). O valor do i.c.p, para a RHI com antígeno obtido por NaOH foi mais elevado do que para os outros antígenos. Os cinco antígenos apresentaram valores máximos para o i.cn., indicando boa especificdade. Os títulos apresentados pelos soros chagásicos com antígeno obtido por NaOH foram, significativamente, superiores aos demais antígenos. A avaliação de cinco partidas de antígeno extraídas por NaOH em épocas diversas indicam boa sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade de resultados, traduzidas pelos valores elevados para os i.c.p. e i.cn., além de títulos próximos entre si.

Comparação entre a fixação de complemento em placa, a hemoaglutinação e a prova de aglutinação com látex no diagnóstico sorológico da doença de chagas na zona do Rio Grande do Sul

Com a finalidade de avaliar o emprego do Antígeno Látex na triagem de pacientes portadores de infecção chagásica o mesmo foi comparado com a Fixação de Complemento em placa e com a Hemoaglutinação, em 3 grupos de soros: a) 920 soros procedentes de inquérito epidemiológicos; b) 131 soros procedentes de pacientes hospitalizados; c) 90 soros procedentes de pacientes hospitalizados e familiares; Os resultados mostraram baixos índices de co-positividade nos três grupos, evidenciando assim escassa sensibilidade por parte do antígeno Látex. Também a comparação entre a Hemoaglutinação e o Antígeno Látex, realizada nos 90 soros do grupo e evidenciou baixo índice de co-positividade. A conclusão dos Autores é que o Antígeno Látex, pela sua escassa sensibilidade, e conseqüente porcentagem de soros falsos negativos, não encontra indicação na triagem sorológica em inquérito epidemiológicos, e na triagem de pacientes hospitalizados.

Teste de aglutinação direta no sorodiagnóstico da leishmaniose visceral no estado do Pará

Avaliou-se o teste de aglutinação direta (TAD) no sorodiagnóstico da leishmaniose visceral (LV) humana e de canídeos (cão e raposa Cerdocyon thous), sendo os resultados comparados com aqueles obtidos em imunofluorescência indireta (IFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Utilizaram-se soros: humanos (303): indivíduos com LV confirmada (16), suspeitos de LV (65), em outras condições (102), controles negativos (15), indivíduos em área endêmica (105): de cães (82): de área endêmica (68), Salvaterra/Marajó/PA. (21 parasitologicamente positivos), e controles negativos (14), de Belém; de raposas (9): espécimes capturados na Ilha do Marajó. Antígenos para o TAD foram preparados a partir de promastigotas de Leishmania (Leishmania) donovani e L. (L.) chagasi. Aqueles utilizados em ELISA e IFI, respectivamente, de promastigotas (antígeno solúvel) e amastigotas deL. (L.) chagasi. Em humanos, a especificidade e sensibilidade do TAD, utilizando-se antígeno deL. (L.) donovani, foram altas (98,4% e 100%, respectivamente) e comparáveis às de IFI (97,5% e 100%). ELISA foi menos específico (84,8%), embora igualmente sensível. Em cães, o TAD foi mais específico com antígeno de L. (L.) donovani do que com aquele preparado a partir de L. (L.) chagasi. Entretanto, ELISA e TAD foram menos sensíveis (ambos 71,4%) que IFI (100%). Essa diferença foi reflelida nos resultados de cães de área endêmica, 87% dos quais foram positivos para IFI, mas somente 54% para ELISA e 49% para o TAD. Resultados similares foram observados com raposas, quando todos os 9 soros foram positivos para IFI, 7 de 9 (78% ) positivos para ELISA, enquanto que o TAD não revelou nenhum resultado positivo. Concluiu-se que o TAD, usando antígeno de L. (L.) donovani é um teste útil para LV humana; sua utilização em ampla escala é indicada, desde que monitorada por um laboratório de referência que garanta qualidade dos antígenos. Contudo, não é a melhor opção em inquéritos sorológicos caninos, já que foi menos específico que ELISA e, especialmente, IFI, na detecção de anticorpos em casos infecção canina.

Avaliação do teste de aglutinação direta na detecção da infecção por Leishmania (Viannia) braziliensis em possíveis reservatórios de leishmaniose tegumentar americana no estado do Ceará

Com o objetivo de avaliar a aplicabilidade do Teste de Aglutinação Direta (TAD) como método de detecção da infecção natural canina por Leishmania (Viannia) braziliensis, foi realizado um estudo envolvendo soros de cães residentes em uma área endêmica de leishmaniose tegumentar, Serra de Baturité, CE e soros de cães provenientes da cidade de Curitiba, PR, área não endêmica de leishmaniose. Os resultados obtidos com o TAD neste trabalho indicam a possibilidade do uso deste teste sorológico para levantamentos epidemiólogicos da infecção em reservatórios; neste estudo, o cão doméstico.

A soro-aglutinação das Leishmanias

The first agglutination experiments (Tables 1 and 2) showed that the serum obtained with any one strain of Leishmania, agglutinates all the others even of another species. This finding reveals the existence of a common antigen. However as the titre of agglutination did not permit a sharp differentiation of species we tried the adsorption method. The first adsorption tests made demonstrated differences in antigenic constitution between a strain of. L. donovani on one hand and strains of L. tropica or L. brasiliensis on the other. Further experiments in which L. chagasi was tested against the other species revealed that the former was antigenically different from the others. These tests were performed by adsorbing an anti-chagasi serum with organisms belonging to the other species or, conversely, adsorbing with L. chagasi sera prepared against the other species (See Tables 9 to 24). On the other hand, the adsorption of a serum prepared against one strain of l. chagasi by another of the same species showed that they had identifical antigenie constitution. These findings suggested the possibility of separating different species of Leishmania by this method. However, tests to separate the other species from one to another gave inconclusive results. (See Tables 27 to 35). It was soon observed that all the strains of L. chagasi were of recent isolation while all the others had been maintained in artificial culture media for a long time. We were led to believe that this condition was responsible for the differences in behaviour encountered. Accordingly, recently isolated strains of L. brasiliensis and L. donovani were tested and shown to be antigenically similar to strains of L. chagasi also recently isolated. The conclusion may be drawn that all strains have the same antigenic constitution when freshly isolated. It has been noted that when a serum which has been prepared against a freshly isolated is adsorbed with an old strain, the amount of agglutinins left free, is much smaller than when a serum prepared against an old strain is adsorbed with a newly isolated strain. At first, we thought to explain this by the low titre of the serum. However, the amount of agglutinins left free was not larger when higher titre serum was tested. The results do not corroborate the view of a special antigen being present in recently isolated strains (vi antige) but rather that the phenomenon is dependent on differences of the amount of the common antigen, more abundant in recent strains. In order to make this clear, experiments were made in which equal amounts of a serum prepared against a newly isolated strain were adsorbed by equal amounts, by weight, of, on one hand, a new strain, and the other an old strain. The resulting adsorbed sera were then titrated. (Table 44). Results showed that newly isolated strains adsorb a larger amount of agglutinins (Tables 44, 45). Two hypothesis have bem advanced to explain the stronger adsorbing qualities of the newly isolated strains. 1° - these strains possess larger amounts of the common antigen and 2° - they contain a vi antigen which adsorbed by the new strain together with the common antigen is the cause of their larger adsorbing capacity. To find out which of the two hypothesis corresponds to the reality a new experiment was made, similar to the one summarized in table 44. The adsorbed sera were made to act on a recently isolated strain as well as on an old one. The latter, not containing the vi antigen, the difference seen when sera act on new strains should not be observed here in the case of this antigen being responsible for the differences in adsorbing properties. The difference persisting, the indication would be that the greater adsorbing capacity of recently isolated strains was really related to larger amounts of the common antigen present (Tables 46 and 47). The results of the experiment excluded the possibility of the vi antigen being responsible. Other experiments, (Tables 48 to 53) using a 3 year old strain, demonstrated the modification in its antigenic constitution during the period it was maintained in cultures.

Contribuição para o diagnóstico da Doença de Chagas pelas reaçães de imunidade: I. Estudo comparativo entre as reaçães de aglutinação e de fixação do complemento

Trabalhando com 24 soros provenientes de casos agudos e crônicos cujos diagnósticos foram estabelecidos quer pela pesquisa direta do parasita (casos agudos) quer pelo xenodiagnóstico ou fixação de complemento (casos crônicos) podemos demonstrar em 26 destes soros a presença de aglutininas para o Schizotrypanum cruzi em títulos que variaram de 1/160 a 1/10240. Os casos agudos apresentaram um mais alto teor variando os títulos entre 1/2560 e 1/10240 e os casos crônicos entre 1/2560 e 1/160. Um único sôro apresentou resultado negativo. Em 10 dos 22 soros que serviram de testemunha e entre os quais figuravam um de leishmaniose tegumentar e outro de um cavalo infetado experimentalmente com Trypanosoma equinum, puderam ser demonstrados a presença de aglutininas para o Schizotrypanum cruzi em títulos que não ultrapassaram de 1/80. Em dois dêsses soros que maior concentração de aglutininas apresentavam e que provinham um de caso de bouba com Wassermann positivo e outro de um indivíduo considerado normal, com Wassermann negativo as pesquisas demonstraram possuirem ambos, hemolisinas e aglutininas para glóbulos de carneiro em títulos que variavam entre 1/160 e 1/320. Êsses soros submetidos a prova de absorção com polpa de rim de cobaia perderam completamente o poder aglutinante para o Schizotrypanum cruzi, fato que não ocorreu com o soro de doença de Chagas servindo de testemunha que só ligeira modificação apresentou quanto ao primitivo título aglutinante. Ficou evidenciado dessa maneira correr por conta de um anticorpo heterófilo o poder aglutinante que são dotados certos soros de indivíduos livres de infecção pelo Schizotrypanum cruzi e a presença de um componente heterogenético na estrutura antigenica desse parasita. No decurso deste trabalho pudemos verificar que idêntico fato ocorre em relação a Leishmania brasiliensis. Essa verificação e de valor prático porque se pode com facilidade eliminar as reações inespecíficas. Ao contrário do que observamos possuírem soros de casos agudos da doença de Chagas, elevado poder aglutinante para Leishmania brasiliensis (1/2560 e 1/5120) o sôro leihmaniose tegumentar foi incapaz de aglutinar o Schizotrypanum cruzi, sendo o agente especifico aglutinado por êle no título de 1/160. Os fatos que acabamos de expor, em relação a prova de aglutinação na Tripanosomiasis americana demonstram claramente o seu valor, podendo constituir, quando positiva um meio seguro no diagnóstico dessa doença. Eliminada a hipótese de aglutinações inespecíficas por meio da absorção com polpa de rim de cobaia, o título de 1/160 fala a favor de uma infecção pelo Schizotry¬panum cruzi. A maioria dos sôros de doença de Chagas por nós estudados apresentaram os dois tipos de aglutinação H e O, ocorrendo o primeiro nas maiores concentrações de soro e o segundo nas menores. Alguns soros, contudo, apresentaram aglutinação somente do tipo somático...

Magmatismo há ca. 660 - 640 Ma no Domínio Socorro: Registros de convergência-colisional na Aglutinação do Gondwana Ocidental

Uranium-lead zircon ages between 660 and 640 Ma, obtained from a series of calc-alkaline orthogneisses and plutons in southeast Brazil's Central Mantiqueira Province, suggest that a significant period of magmatism occurred in this region prior to the collisional assembly of West Gondwana (presently constrained in the region between ca. 625 and 580 Ma). While the nature of this earlier magmatism is presently unclear, some preliminary Sm-Nd data suggest that these magmas were not solely derived from the Paleoproterozoic lithosphere, but appear to represent hybrid products of Paleoproterozoic and Neoproterozoic sources. As such hybrid mixtures have been most commonly observed in continental are settings, it is possible that the 660 to 640 Ma magmatism represents are magmatism that resulted from subduction of Neoproterozoic oceanic crust during early precollisional convergence and closure of a branch of either the Adamastor or Goianides oceans.

Resposta sorológica de bovinos vacinados contra o Clostridium chauvoei avaliada pelos testes de aglutinação em placa e Elisa

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Detecção de anticorpos para Toxoplasma gondii em soros de suínos de criações de fundo de quintal na microrregião de Registro-SP, pelo método de aglutinação direta

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ

Diferenciação entre os estágios agudo e crônico na infecção toxoplásmica pelo método de aglutinação direta modificado e pesquisa do agente no leite de ovelhas naturalmente infectadas por Toxoplasma gondii

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii pelo teste de aglutinação modificada em frangos de corte abatido para consumo

A toxoplasmose é uma zoonose causada pelo Toxoplasma gondii, comum nos animais domésticos e que tem sido objeto de estudos no Brasil e em todas as partes do mundo. Este parasita intracelular obrigatório infecta mamíferos e aves e tem nos felídeos seus hospedeiros definitivos. Nas aves, a infecção toxoplásmica pode ser assintomática, a forma mais provável de contaminação é através da ingestão de oocistos presentes no solo, água e rações contaminadas e a carne de frangos uma das principais vias de transmissão para o homem. Com objetivo de estudar a ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em frangos de corte abatidos para consumo na região metropolitana de Belém, 300 amostras de soro procedentes de abate em escala industrial e clandestino, foram submetidas ao Teste de Aglutinação Modificada (MAT). Anticorpos anti-T. gondii foram detectados em uma (1/300, 0,33%) amostra, procedente de abate clandestino e em nenhuma amostra procedente de abate em escala industrial. Embora as amostras de soro de frangos de corte procedentes de abate em escala industrial não tenham demonstrado anticorpos anti-T. gondii, recomenda-se a adoção rotineira de pesquisa sorológica desse organismo em qualquer tipo de abate e no nível de consumo como medida de prevenção ao risco sanitário humano e estudos para determinar a real importância das galinhas de criação livre na epidemiologia da toxoplasmose em nosso meio.

Avaliação do teste de aglutinação com partículas de látex sensibilizadas com exoantígeno bruto de Paracoccidioides brasiliensis no sorodiagnóstico da Paracoccidioidomicose

Paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica granulomatosa causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, é endêmica na América do Sul. Conídios provavelmente agem como propágulos infectantes e são inalados para os pulmões, onde ocorre a transformação à forma leveduriforme patogênica. Duas principais formas clínicas são consideradas: a forma aguda ou subaguda (tipo juvenil) e a forma crônica (tipo adulto). O diagnóstico definitivo da PCM inclui a observação direta da levedura multibrotante característica em fluidos biológicos e secções teciduais ou isolamento do fungo de materiais clínicos. Na PCM, testes sorológicos, além de auxílio diagnóstico, têm a função de acompanhamento durante e pós-tratamento. Portanto, a técnica utilizada precisa aliar sensibilidade e especificidade, para que o valor preditivo seja máximo e reprodutível. O propósito deste estudo foi avaliar um teste de aglutinação com látex (LA) para detectar anticorpos anti-P.brasiliensis contra antígeno bruto do fungo. Cinqüenta e uma (51) amostras de soro de pacientes com PCM foram testadas. Positividade foi observada em 84,31% (43/51), cujos padrões de aglutinação variaram de 1+ a 4+. Reatividade dessas amostras foi verificada em títulos variando entre 1:2 e 1:64. Reatividade cruzada foi observada com outras doenças fúngicas (aspergilose e histoplasmose), e com doenças não fúngicas. Amostras de soro humano normal não foram reativas. A sensibilidade, especificidade e valores preditivos, positivo e negativo, produzidos pelo teste LA foram 84,31%, 81,05%, 70,49% e 90,59%, respectivamente. Em conclusão, estes resultados mostram que o teste LA é instrumento útil no sorodiagnóstico da PCM, além de vantagens como baixo custo e rápida execução, a despeito de outros testes, tais como ID e Western blotting.

Diferenciação entre os estágios agudo e crônico na infecção toxoplásmica pela técnica de aglutinação direta modificada

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Utilização de metaheurísticas combinada a diferentes métodos de aglutinação para a otimização de um processo de torneamento com múltiplas respostas

Pós-graduação em Engenharia Mecânica - FEG

Diferentes métodos de aglutinação para melhoria de processos com múltiplas respostas

Pós-graduação em Engenharia Mecânica - FEG