Study on extraction of agaropectin from Gelidium amansii and its anticoagulant activity

Gelidium amansii agar was fractionated on DEAE-cellulose and four fractions were obtained sequentially. The yields of 1.0 mol/L NaCl fraction and 2.5 mol/L NaCl fraction were 2.80% and 2.03%. They are highly sulfated agar, and named as agaropectin with sulfate content being 22.8% and 32.5%, respectively. The anticoagulant experiment results show that agaropectin could effectively prolong the coagulation time in a dose-dependent manner in vitro. Agaropection could be absorbed and effectively prolong the plasma coagulation time in vivo. After intragastric administration at the doses of 100, 200, and 400 mg/kg.d in rats for 15 days, TT (thrombin time), CT (coagulation time), PT (prothrombin time), and APTT (activated partial thromboplastin time) could be effectively prolonged and the plasma Fib level could be significantly lowered.

琼脂分级产物的研究

琼脂（agar，又称琼胶）作为世界三大工业海藻胶之一，被广泛应用于食品、医药、生物技术、造纸等领域。本文首先研究了琼脂的分级方法，用DEAE-Cellulose将石花菜琼脂分级，得到四个级分，即水级分、0.5mol/L NaCl级分、1.0mol/L NaCl级分、2.5mol/L NaCl级分。分析了各级分的理化性质，并通过IR和~（13）C-NMR光谱研究其化学结构。石花菜琼脂分级得到的四个级分中，水级分的硫酸基含量为0.16%，凝胶强度为1130 g/cm~2（1%浓度），电内渗（EEO）为0.12，主要质量标准为Sigma公司的低电内渗琼脂糖(agarose）产品接近，符合低电内渗琼脂糖产品的质量要求。1.0mol/L NaCl级分和2.5mol/L NaCl级分的硫酸基含量较高，分别为22.8%和32.5%，合称为硫琼脂(agaropectin）。在琼脂糖的应用中，特别是现代生物技术研究中，需要低凝固温度琼脂糖。本文以石花菜琼脂分级得到的水级分为原料，采用甲基化反应制备低凝固温度琼脂糖。实验产品的凝固温度为30.1 ℃(1.5%浓度），融化温度为64.8 ℃（1.5%浓度），凝胶强度为264 g/cm~2(1%浓度），主要质量标准与Sigma公司的低凝固温度琼脂糖产品接近，符合低凝固温度琼脂糖产品的质量要求。随着对多糖生物学功能的深入，海藻硫酸多糖表现出多种生物活性，其活性研究已经成为目前新药研究的一个热点。到目前为止，有关琼脂分级产物的生物活性研究较少。本文在研究石菜硫琼脂的组成和主要理化特性的基础上，对基体内外抗凝血活性进行了较系统的研究。新西兰兔腹主动脉血体外抗凝实验结果表明，石花菜硫琼脂具有明显的体外抗凝血活性，在3.125mg/ml ～ 25mg/ml剂量范围内呈现量效关系；大鼠体内抗凝血实验的结果表明其口服可以吸收，在体内产生抗凝血作用，在100 mg/kg·d ～ 400 mg/kg·d剂量范围内，与全血凝血时间(CT）、凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）、部分凝血活酶时间（KPTT）的延长及血浆纤维蛋白原（Fib）含量的降低均呈剂量依赖关系。就其抗凝血机制而言，石花菜硫琼脂的抗凝血作用既影响凝血系统，又影响纤溶系统。