Characterization and novel activation of 72-kDa metalloproteinase in retinal interphotoreceptor matrix and Y-79 cell culture medium

Analysis of bovine interphotoreceptor matrix and conditioned medium from human Y-79 retinoblastoma cells by gelatin SDS-PAGE zymography reveals abundant activity of a 72-kDa M(r) gelatinase. The 72-kDa gelatinase from either source is inhibited by EDTA but not aprotinin or NEM, indicating that it is a metalloproteinase (MMP). The 72-kDa MMP is converted to a 62-kDa species with APMA treatment after gelatin sepharose affinity purification typical of previously described gelatinase MMP-2. The latent 72-kDa gelatinase from either bovine IPM or Y-79 media autoactivates without APMA in the presence of calcium and zinc after 72 hr at 37°C, producing a fully active mixture of proteinase species, 50 (48 in Y-79 medium), 38 and 35 kDa in size. The presence of inhibitory activity was examined in both whole bovine IPM and IPM fractions separated by SDS-PAGE. Whole IPM inhibited gelatinolytic activity of autoactivated Y-79-derived MMP in a dose-dependent manner. Inhibitory activities are observed in two protein fractions of 27-42 and 20-25 kDa. Western blots using antibodies to human tissue inhibitor of metalloproteinase 1 and 2 (TIMP-1 and -2) reveal the presence of two TIMP-1-like proteins at 21 and 29 kDa in inhibitory fractions of the bovine IPM. TIMP-2 was not detected in the inhibitory IPM fractions, consistent with the observed autoactivation of bovine IPM 72-kDa gelatinase. Potential roles for this IPM MMP-TIMP system include physiologic remodelling of the neural retina-RPE cell interface and digestion of shed rod outer segment as well as pathological processes such as retinal detachment, PE cell migration, neovascularization and tumor progression. Cultured Y-79 cells appear to be a good model for studying the production and regulation of this proteinase system.

Rod photoreceptor-specific gene expression in human retinoblastoma cells.

Retinoblastoma cells in culture have previously been shown to express cone-specific genes but not their rod counterparts. We have detected the messages for the rod alpha, beta, and gamma subunits of cGMP phosphodiesterase (PDE), the rod alpha subunit of transducin, rod opsin, and the cone alpha' subunit of PDE in RNA of human Y-79 retinoblastoma cells by reverse transcription-PCR. Quantitative analysis of the mRNAs for the rod alpha and cone alpha' PDE subunits revealed that they were expressed at comparable levels; however, the transcript encoding the rod beta PDE subunit was 10 times more abundant in these cells. Northern hybridization analysis of Y-79 cell RNA confirmed the presence of the transcripts for rod and cone PDE catalytic subunits. To test whether the transcriptional machinery required for the expression of rod-specific genes was endogenous in Y-79 retinoblastoma cells, cultures were transfected with a construct containing the promoter region of the rod beta PDE subunit gene attached to the firefly luciferase reporter vector. Significant levels of reporter enzyme activity were observed in the cell lysates. Our results demonstrate that the Y-79 retinoblastoma cell line is a good model system for the study of transcriptional regulation of rod-specific genes.

Simulations of X and Y Retinal Ganglion Cell Behavior with a Nonlinear Push-pull Model of Spatiotemporal Retinal Processing

This article describes a nonlinear model of neural processing in the vertebrate retina, comprising model photoreceptors, model push-pull bipolar cells, and model ganglion cells. Previous analyses and simulations have shown that with a choice of parameters that mimics beta cells, the model exhibits X-like linear spatial summation (null response to contrast-reversed gratings) in spite of photoreceptor nonlinearities; on the other hand, a choice of parameters that mimics alpha cells leads to Y-like frequency doubling. This article extends the previous work by showing that the model can replicate qualitatively many of the original findings on X and Y cells with a fixed choice of parameters. The results generally support the hypothesis that X and Y cells can be seen as functional variants of a single neural circuit. The model also suggests that both depolarizing and hyperpolarizing bipolar cells converge onto both ON and OFF ganglion cell types. The push-pull connectivity enables ganglion cells to remain sensitive to deviations about the mean output level of nonlinear photoreceptors. These and other properties of the push-pull model are discussed in the general context of retinal processing of spatiotemporal luminance patterns.

Tratado de la epidemia, pestilente que padecio la ciudad de Malaga el año de 1678 y 79 : con una carta antiapologetica, respuesta a otra del Doct D. Marco Antonio de Checa ... en que se defiende, y verifica ser peste dicha epidemia ; con un metodo breve curativo, y preservativo, y un antidotario ... / opusculo que pone a los pies del Ilustris Señor D. F. Alonso de S. Tomas ... el doctor D. Diego Blanco Salgado ...

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Evaluación perceptivo auditiva de voces degradas y su correlación con medidas acústicas

Resumen: El objetivo es determinar utilizando las mediciones acústicas, qué información es más relevante para el oyente al momento de categorizar el grado general de disfonía. Se eligieron 8 (4 voces femeninas y 4 voces masculinas. Cada emisión fue evaluada auditivo perceptualmente a través del item G de la escala GRBAS por 10 oyentes experimentados y acústicamente mediante medidas de aperiodicidad, ruido y caos. El estudio estadístico de análisis discriminante señala la importancia de GNE, Jit y Jitter_cc y Lyapunov como parámetros predictores del grado general de disfonía. La aplicación del método k-means evidencia que existen rasgos en los parámetros acústicos empleados que permiten agrupar objetivamente las voces estudiadas con 100% de precisión para la clase 0, 96% a la clase 2 y 79% a la clase 3. Un mayor número y variabilidad de casos se necesita a fin de verificar los resultados preliminares.

Mammalian cell cultures as a model system for the determination of cytotoxicity induced by cholesterol oxidation products

Oxysterols are products of cholesterol oxidation, which may be produced endogenously or may be absorbed from the diet where they are commonly found in foods of animal origin. Oxysterols are known to be cyctotoxic to cells in culture and mode of toxicity has been identified as apoptosis in certain cell lines. The cytotoxicity of the oxysterols 25-hydroxycholesterol (25-OH) and 7β-hydroxycholesterol (7β-OH) was examined in two human cell lines, HepG2, a hepatoma cell line, and U937, a monocytic cell line. Both 25-OH and 7β-OH were cytotoxic to the HepG2 cell line but apoptotic cells were not detected and it was concluded that cells underwent necrosis. 25-OH was not cytotoxic to the U937 cell line but it was found to have a cytostatic effect. 7β-OH was shown to induce apoptosis in the U937 line. The mechanism of oxysterol-induced apoptosis has not yet been fully elucidated, however the generation of an oxidative stress and the depletion of glutathione have been associated with the initial stages of the apoptotic process. The concentration of cellular antioxidant enzyme, superoxide dismutase (SOD) was increased in association with 7β-OH induced apoptosis in the U937 cell line. There was no change in the glutathione concentration or the SOD activity of HepG2 cells, which underwent necrosis in the presence of 7β-OH. Many apoptotic pathways center on the activation of caspase-3, which is the key executioner protease of apoptosis. Caspase-3 activity was also shown to increase in association with 7β-OH-induced apoptosis in U937 cells but there was no significant increase in caspase-3 activity in HepG2 cells. DNA fragmentation is regarded as the biochemical hallmark of apoptosis, therefore the comet assay as a measure of DNA fragmentation was assessed as a measure of apoptosis. The level of DNA fragmentation induced by 7β-OH, as measured using the comet assay, was similar for both cell lines. Therefore, it was concluded that the comet assay could not be used to distinguish between 7β-OH-induced apoptosis in U937 cells and 7β-OH-induced necrosis in HepG2 cells. The cytotoxicity and apoptotic potency of oxysterols 25-OH, 7β-OH, cholesterol- 5a,6a-epoxide (a-epoxide), cholesterol-5β,6β-epoxide (β-epoxide), 19-hydroxy-cholesterol (19-OH), and 7-ketocholesterol (7-keto) was compared in the U937 cell line. 7 β-OH, β-epoxide and 7-keto were found to induce apoptosis in U937 cells. 7β-OH-induced apoptosis was associated with a decrease in the cellular glutathione concentration and an increase in SOD activity, 7-keto and β-epoxide did not affect the glutathione concentration or the SOD activity of the cells.a-Epoxide, 19-OH and 25-OH were not cytotoxic to the U937 cell line.

T-cell-rich histiocyte-rich B-cell lymphoma of parotid gland

We describe a malignant lymphoma of the parotid gland arising in a patient with Sjögren's syndrome. Diagnosis was established on needle biopsy which showed a mixed population of lymphoid cells. Immunohistochemistry revealed B-lymphoid cells, T-lymphoid cells and histiocytes. Clonal immunoglobulin heavy chain gene rearrangement was demonstrated using the polymerase chain reaction. Within the confines of the small biopsy, the lesion qualifies for the designation T-cell-rich histiocyte-rich B-cell lymphoma. The value of molecular techniques in the diagnosis of malignant lymphoma on limited tissue samples is highlighted by this case.

Régions de susceptibilité dans les remaniements du chromosome Y et mosaïcisme : facteurs de risque du développement sexuel anormal

Le développement sexuel est un processus complexe qui dépend de nombreux gènes, une mutation pouvant entraîner un développement sexuel anormal. Par ailleurs, des anomalies chromosomiques peuvent avoir des répercussions importantes sur la détermination gonadique, surtout lorsqu'il s'agit du chromosome Y puisqu'il porte le gène clé du développement sexuel masculin. Premièrement, nous avons identifié par cytogénétique moléculaire le point de cassure chez 5 patients avec une translocation X;Y et 10 patients avec un chromosome Y isodicentrique. Nous avons ainsi démontré que certaines régions sont plus à risque d'être remaniées, notamment lorsqu'elles contiennent des palindromes ou d'autres séquences répétées. Nous avons également établi une relation entre la distance séparant le centromère et le point de cassure et l'instabilité des chromosomes Y isodicentriques lors des divisions cellulaires. Deuxièmement, nous avons étudié en cytogénétique les gonades de 22 patients avec un chromosome Y normal ou remanié et présentant un développement sexuel anormal. Nous avons mis en évidence la perte du chromosome Y remanié dans une majorité de cellules gonadiques des 10 patients étudiés, expliquant leur phénotype sexuel anormal. Cependant, chez 11 des 12 patients avec un chromosome Y normal, aucun mosaïcisme expliquant clairement leur détermination gonadique anormale n'a été retrouvé. Finalement, nous avons analysé par immunohistochimie les gonades dysgénésiques de 30 patients avec une anomalie du développement sexuel et un chromosome Y normal ou remanié. Nos travaux ont montré la présence de cellules germinales immatures au sein de cordons sexuels primitifs sous forme de tissu gonadique indifférencié dans 15 gonades, dont 9 ont évolué en tumeur gonadique. Dans 13 autres gonades, ces cellules germinales immatures avaient disparues par apoptose. Dans l'ensemble, notre recherche met en évidence la susceptibilité du chromosome Y à subir des remaniements et à être instable lors des divisions cellulaires, et indique que le mosaïcisme peut avoir des répercussions sur la détermination gonadique. Nos travaux montrent également que le tissu gonadique indifférencié peut évoluer vers deux entités, une tumeur gonadique ou une bandelette suite à l'apoptose des cellules germinales, mettant en lumière la nécessité d'analyser le tissu gonadique des patients XY avec dysgénésie gonadique dont les gonades sont laissées en place.

El despertar de una afición : la lectura incidencia en la velocidad y comprensión lectoras.

El objetivo principal del proyecto es despertar en los alumnos la afición por la lectura, una lectura interpretativa y crítica. Con el estudio experimental trata de constatar que la lectura de libros infantiles incrementan su velocidad y comprensión lectora (hipótesis alternativas). 2 grupos, experimental y de control, del ciclo medio de EGB. El grupo experimental estaba formado por 17 alumnos/as de cuarto y 14 de quinto del Colegio Nacional de Quentar. Para el control se buscó un grupo homólogo al experimental de una población de 120 alumnos de cuarto y 79 de quinto del Colegio Público 28 de Febrero (Granada). Variable independiente: lectura de libros de literatura infantil. Variables dependientes: puntuaciones obtenidas en velocidad lectora, puntuaciones obtenidas en comprensión lectora. Diseño: es un diseño de 2 grupos apareados. Se formaron 31 parejas. Las variables de apareamiento son: velocidad y comprensión lectora. La correlación en comprensión es de 0,95 y en velocidad lectora de 0,84. Se hizo una medida pretest en diciembre de 1984 y otra posttest en junio de 1985. Prueba de velocidad lectora, la misma para diciembre y junio: 'Escala de velocidad en lectura oral' de A. Correa Acosta, inspector de EGB en Granada. Prueba de comprensión: 2 textos, uno para diciembre y otro para junio previamente homologados por 41 profesores. Se les hacían 4 preguntas al respecto y se valoraba su r en puntuaciones directas. Todas las respuestas fueron corregidas por el mismo profesor, criterio profesional. Análisis cuantitativo: t de Student para grupos apareados a un nivel de significacion del 0,05. Análisis cualitativo: observación en cada alumno de las diferencias entre las puntuaciones de diciembre y las de julio en cada variable y entre los 2 grupos: experimental y control. Análisis cuantitativo: velocidad lectora. Se rechaza la ho. La lectura de libros de literatura infantil incrementa significativamente la velocidad lectora a un nivel de significación 0,05 idem para la comprensión. Análisis cualitativo: en gran medida se han conseguido los objetivos del proyecto en general el grupo experimental aumentó el número de libros leídos y en junio mostraron un incremento en la velocidad y la comprensión inicial, incremento que tambien se aprecia en el grupo control pero más pequeño. Las diferencias entre grupo experimental y grupo control fueron siempre a favor del grupo experimental. La afición lectora mejora el rendimiento escolar general ya que incrementa la velocidad y comprensión lectora y puede proporcionar una extensa gama de conocimientos. Es necesario mentalizar a padres, alumnos y profesores sobre la importancia de la lectura a fin de integrar en el círculo de lectores a toda la comunidad escolar. La afición por la lectura es una buena alternativa a sus horas de ocio.

Estudio de la inadaptación infanto-juvenil : estudio descriptivo de la inadaptación social infanto juvenil en la Región de Murcia : factores de riesgo y factores pronósticos.

Estudio descriptivo que intenta llegar a definir y categorizar los factores de riesgo y los factores pronósticos que caracterizan a la infancia y juventud inadaptadas en la región de Murcia. 189 sujetos entre los 11 y los 18 años (110 varones y 79 mujeres) procedentes de instituciones dependientes de la Consejería de Bienestar Social de la Comunidad Autónoma, con expedientes de protección y-o tutela en el momento de comenzar el estudio (total de individuos), además de procedentes de otros centros, colegios, hogares funcionales, etc., dependientes de otras administraciones. El estudio se estructuró en dos partes. La primera consta de una exploración psicológica mediante entrevista, la segunda de un cuestionario psicobiográfico de elaboración propia que consta de 307 ítems en el que se recogen los datos de escolarización, conflictividad familiar, empleo del ocio, consumo de drogas (institucionalizadas y no), historia clínica, sexualidad, antecedentes de conductas asociales, antecedentes sociobiográficos y familiares. Los resultados del estudio reflejan los datos globales ordenados según el sexo de los sujetos entrevistados y, algunos de ellos, según el centro del que procedía el entrevistado. Además del cuestionario psicobiográfico, los rasgos de personalidad se analizaron con los siguientes instrumentos: EPI (Eysenck Personality Questionnaire, EPQ. Seisdedos, 1982), STAI (State Trait Anxiety Inventory-SelfEvaluation Questionnaire-, Spielberg y cols. Bermúdez, 1978). Test de factor g (Culture Fair Intelligence Test, Cattell y Cattell. Ey y cols., 1975). Manual Diagnóstico y Estadístico de los Transtornos Mentales (DSMIII), de la American Psychiatric Association APA, 1987. Subtest de figuras incompletas de lña Wechsler Intelligence Scale for Children (WISC) y el Matching Familiar Figures Test (MFFT, Kupietz y Richardson, 1978. Raport y cols., 1980). Prueba de atención-percepción de Toulouse-Piéron. Test del Laberinto en Espiral de Gibson (test psicomotor que mide la velocidad y precisión de la expresión muscular en respuesta a un estímulo controlado). Todos estos instrumentos miden los siguientes rasgos de personalidad: extroversión/introversión; neuroticismo/estabilidad; temperamento (Galeno, Kant,Wundt);ansiedad; inteligencia; hiperactividad; atención; impulsividad/reflexividad. El análisis de los datos obtenidos se realiza con el paquete estadístico BMDP y el proceso estadístico se compone de: análisis univariante, bivariante , multivariante y discriminante. Los sujetos estudiados muestran elevados niveles de neuroticismo, baja atención, altos niveles de impulsividad, bajas puntuaciones en la variable CI. Prevalencia alta de ansiedad, según el análisis global del total de la muestra. Son numerosos los trabajos que relacionan la inadapatación juvenil con un déficit de inteligencia, esto puede deberse a que las dificultades de desarrollo y maduración determinan unos niveles de inteligencia inferiores a los que se hubiesen alcanzado siendo el medio más favorable. Existen muchas referencias que reflejan cómo la ansiedad es un fenómeno relativamente constante en la institucionalización de los delincuentes juveniles.

Antiproliferative activity of Titanocene Y against tumor colony-forming units

Bis-[(p-methoxybenzyl)cyclopentadienyl] titanium dichloride, better known as Titanocene Y, is a newly synthesized titanium-based anticancer drug. We studied the antitumor activity of Titanocene Y with concentrations of 2.1, 21 and 210 μmol/l against a range of freshly explanted human tumors, using an in-vitro soft agar cloning system. The sensitivity against Titanocene Y was highly remarkable in the case of renal cell, ovarian, nonsmall cell lung and colon cancer. In particular the surprisingly good response of nonsmall cell lung cancer and colon cancer against Titanocene Y at its lowest concentration of 2.1 μmol/l was well comparable or better with respect to cisplatin, given at a concentration of 1.0 μmol/l. Further clinical development of Titanocene Y appears to be warranted because of the broad cytotoxic activity shown and the specific activity of Titanocene Y against renal cell cancer.

Xyloglucan endotransglucosylase/hydrolase (XTH) overexpression affects growth and cell wall mechanics in etiolated Arabidopsis hypocotyls.

Growth and biomechanics of etiolated hypocotyls from Arabidopsis thaliana lines overexpressing xyloglucan endotransglucosylase/hydrolase AtXTH18, AtXTH19, AtXTH20, and PttXET16-34 were studied. Overexpression of AtXTH18, AtXTH19, and AtXTH20 stimulated growth of hypocotyls, while PttXET16-34 overexpression did not show this effect. In vitro extension of frozen/thawed hypocotyls measured by a constant-load extensiometer started from a high-amplitude initial deformation followed by a slow time-dependent creep. Creep of growing XTH-overexpressing (OE) hypocotyls was more linear in time compared with the wild type at pH 5.0, reflecting their higher potential for long-term extension. XTH-OE plants deposited 65?84% more cell wall material per hypocotyl cross-sectional area than wild-type plants. As a result, their wall stress under each external load was lower than in the wild-type. Growing XTH-OE hypocotyls had higher values of initial deformation·stress?1 compared with the wild type. Plotting creep rates for each line under different loads against the respective wall stress values gave straight lines. Their slopes and intercepts with the abscissa correspond to ? (in vitro cell wall extensibility) and y (in vitro cell wall yield threshold) values characterizing cell wall material properties. The wall material in XTH-OE lines was more pliant than in the wild type due to lower y values. In contrast, the acid-induced wall extension in vitro resulted from increasing ? values. Thus, three factors contributed to the XTH-OE-stimulated growth in Arabidopsis hypocotyls: their more linear creep, higher values of initial deformation·stress?1, and lower y values.