Investigação das ectonucleotidases de células musculares lisas vasculares : efeito dos hormonios tireoideanos e estradiol

Nucleotídeos extracelulares (ATP, ADP, AMP) e seu derivado adenosina são conhecidos sinalizadores do sistema cardiovascular podendo mediar vários processos fisiológicos entre eles a proliferação celular, agregação plaquetária, inflamação e o tônus vascular. Os níveis destas substâncias, localmente e na circulação sanguínea, são controlados pelas ecto-NTPDases em conjunto com a ecto-5’nucleotidase (ecto-5’-NT) que realizam a degradação completa do ATP até adenosina. Os hormônios tireoideanos tiroxina (T4) e triiodotironina (T3) e o hormônio esteróide sexual estradiol (E2) atuam ativamente no sistema vascular promovendo vasodilatação. Nosso objetivo foi investigar quais enzimas da família das NTPDases estão presente em células musculares lisas vasculares (CMLVs) e se a atividade destas enzimas pode ser influenciada pela ação desses hormônios, uma vez que seus substratos e produtos podem sinalizar processos de relaxamento/contração muscular. Para tanto, as CMLVs foram extraídas da artéria aorta de ratos Wistar adultos e cultivadas em meio de cultura DMEM. Após atingirem a confluência, as células foram tratadas com 50 nM de T3 ou T4 ou 1M de 17-estradiol por 72 horas. As atividades enzimáticas foram medidas pela liberação de fosfato inorgânico enquanto que a expressão das ectonucleotidases foi verificada por imunocitoquímica (proteína) e RT-PCR (RNAm). Os resultados deste trabalho mostram que as CMLVs expressam as NTPDases 1, 2, 3, 5 e 6 e a ecto-5’-NT, responsáveis pelo controle dos níveis de nucleotídeos e nucleosídeos extracelulares. O tratamento com os hormônios T3, T4 e E2 nestas células mostrou que a atividade da ecto-5’-NT foi aumentada pelos três hormônios. A análise do RT-PCR demonstrou que os tratamentos foram capazes de aumentar também a quantidade de RNAm da ecto-5’NT, indicando mecanismos de ação genômica dos hormônios estudados. Por outro lado, O tratamento com os hormônios tireoideos não alterou as atividades ATPásica e ADPásica, somente o estradiol foi capaz de aumentar a atividade ATPásica. Estes resultados também sugerem que, pela hidrólise aumentada do AMP, disponibilizem-se níveis maiores de adenosina, com importante potencial vasodilatador local. Entretanto, o fato de o estradiol ter aumentado a hidrólise de ATP, mas não a de ADP, nos permite pensar que o ADP, agregador plaquetário bem estabelecido, possa estar acumulando extracelularmente, contribuindo para o desenvolvimento de problemas circulatórios.

Hipotireoidismo congênito: recomendações do Departamento de Tireoide da Sociedade Brasileira de Endocrinologia e Metabologia

O hipotireoidismo congênito (HC) é o distúrbio endócrino congênito mais frequente, com incidência variando de 1:2.000 a 1:4.000 crianças nascidas vivas e uma das principais causas de retardo mental que pode ser prevenida. Os Programas de Triagem Neonatal para a doença permitem a identificação precoce dos afetados e seu tratamento de modo a evitar as complicações da falta do hormônio. A maioria dos casos de hipotireoidismo congênito é decorrente de disgenesias tireoidianas (85%), entre elas a ectopia, hipoplasia ou agenesia tireoidianas, e os demais resultam de defeitos de síntese hormonal. As crianças afetadas (> 95%) geralmente não apresentam sintomas sugestivos da doença ao nascimento. Os sintomas e sinais mais comuns são: icterícia neonatal prolongada, choro rouco, letargia, movimentos lentos, constipação, macroglossia, hérnia umbilical, fontanelas amplas, hipotonia e pele seca. Várias estratégias são utilizadas para a triagem do HC. No Brasil, esta é obrigatória por lei e geralmente é feita com a dosagem de TSH em sangue seco coletado do calcanhar. A idade recomendada para sua realização é após as 48 horas de vida até o quarto dia. A confirmação diagnóstica é obrigatória com as dosagens de TSH e T4 livre ou T4 total.

Aspectos da fisiopatologia da sepse em Piaractus mesopotamicus induzida por Aeromonas hydrophila

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Avaliação adrenocortical, tireoideana e do estresse oxidativo de cães naturalmente infectados por Ehrlichia canis

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FCAV

Consensos em tireoide: guias para a prática clínica

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Consenso brasileiro para a abordagem clínica e tratamento do hipotireoidismo subclínico em adultos: recomendações do Departamento de Tireoide da Sociedade Brasileira de Endocrinologia e Metabologia

INTRODUCTION: Subclinical hypothyroidism (SCH), defined as elevated concentrations of thyroid stimulating hormone (TSH) despite normal levels of thyroid hormones, is highly prevalent in Brazil, especially among women and the elderly. Although an increasing number of studies have related SCH to an increased risk of coronary artery disease and mortality, there have been no randomized clinical trials verifying the benefit of levothyroxine treatment in reducing these risks, and the treatment remains controversial. OBJECTIVE: This consensus, sponsored by the Thyroid Department of the Brazilian Society of Endocrinology and Metabolism and developed by Brazilian experts with extensive clinical experience with thyroid diseases, presents these recommendations based on evidence for the clinical management of SCH patients in Brazil. MATERIALS AND METHODS: After structuring the clinical questions, the search for evidence in the literature was initially performed in the MedLine-PubMed database and later in the Embase and SciELO - Lilacs databases. The strength of evidence was evaluated according to the Oxford classification system and established based on the experimental design used, considering the best available evidence for each question and the Brazilian experience. RESULTS: The topics covered included SCH definition and diagnosis, natural history, clinical significance, treatment and pregnancy, and the consensus issued 29 recommendations for the clinical management of adult patients with SCH. CONCLUSION: Treatment with levothyroxine was recommended for all patients with persistent SCH with serum TSH values > 10 mU/L and for certain patient subgroups.

Concentrações plasmáticas de testosterona, triiodotironina (T3) e tiroxina (T4) em bodes submetidos ao estresse calórico

Para verificar o efeito do estresse calórico (EC) nas concentrações plasmáticas de testosterona, triiodotironina (T3) e tiroxina (T4), oito bodes, das raças Saanen (n=4) e Alpina (n=4), foram mantidos em câmara bioclimática, sob condições de termoneutralidade (13,0ºC a 26,7ºC) durante 30 dias e, após um período (60 dias) de descanso, submetidos ao EC (23,7ºC a 34,0ºC) por 30 dias. Para minimizar as variações sazonais nos perfis hormonais devido ao fotoperíodo, durante toda fase experimental, incluindo a de adaptação em condições de termoneutralidade (30 dias), o fotoperíodo foi controlado utilizando-se alternância de dias longos (16h de luz e 8h de escuro) e de dias curtos (8h de luz e 16h de escuro) a cada 30 dias. As amostras de sangue foram coletadas duas vezes por semana durante cinco semanas. No conjunto das raças, o EC não influenciou (P>0,05) as concentrações de testosterona (1,8±0,2 vs 1,3±0,2ng/ml) e nem a de T4 (52,7±2,8 vs 50,0±2,8ng/ml). Houve declínio (P<0,01) das concentrações de T3 nos animais submetidos ao experimento (1,3±0,1 vs 1,0±0,1ng/ml), mas a redução foi observada somente nos bodes Saanen. Em ambas as raças, as concentrações de T3 e T4 variaram (P<0,01) conforme o dia da coleta das amostras de sangue. O EC foi suficiente para produzir uma resposta fisiológica com redução das concentrações plasmáticas de T3 em bodes das raças Saanen, mas não da raça Alpina, assim como não foi capaz de alterar os níveis plasmáticos de testosterona e nem de T4.

Is sympathectomy at T4 level better than at T3 level for treating palmar hyperhidrosis?

Purpose: We compared the results from a video-assisted thoracoscopic sympathectomy (VTS) at the T4 denervation level with those from a VTS at the T3 level for the treatment of palmar hyperhydrosis (PH). Methods: Seventy patients with PH were prospectively followed for VTS at the T3 or T4 denervation levels for 6 months. The end points of this study were: absence of PH, compensatory hyperhydrosis (CH), and quality-of-life assessment. Results: Sixty-seven patients reported a complete resolution of PH after surgery. One failure occurred in the T3 group and 2 in the T4 group. When anhydrosis was obtained, we noticed totally dry hands in 26 patients in the T3 group and 6 patients in the T4 group. The other 27 patients in the T4 group and 8 in the T3 group maintained a small level of sweating and were also considered to be therapeutic successes. At 6 months, 25 patients in the T4 group had some degree of CH (71.42%) and all patients in the T3 group (100%), though the T4 group had a lower degree of severity of CH at the 6-month follow-up (P < 0.05). After the operation, quality of life was improved similarly in both groups. Conclusions: VTS at either the T3 or T4 level provides an effective treatment for PH. VTS at the T4 level is associated with a less severe form of CH. Despite the occurrence of CH, patients' quality of life is significantly improved following VTS at the T3 or T4 levels. For this reason, the T4 resection can now be used as a treatment for PH.

Exploiting pi-acceptors for the determination of thyroid hormones (T3 and T4) using a single interface flow system

A fully automated methodology was developed for the determination of the thyroid hormones levothyroxine (T4) and liothyronine (T3). The proposed method exploits the formation of highly coloured charge-transfer (CT) complexes between these compounds, acting as electron donors, and pi-acceptors such as chloranilic acid (CIA) and 2,3-dichloro-5,6-dicyano-p-benzoquinone (DDQ). For automation of the analytical procedure a simple, fast and versatile single interface flow system (SIFA)was implemented guaranteeing a simplified performance optimisation, low maintenance and a cost-effective operation. Moreover, the single reaction interface assured a convenient and straightforward approach for implementing job`s method of continuous variations used to establish the stoichiometry of the formed CT complexes. Linear calibration plots for levothyroxine and liothyronine concentrations ranging from 5.0 x 10(-5) to 2.5 x 10(-4) mol L(-1) and 1.0 x 10(-5) to 1.0 x 10(-4) mol L(-1), respectively, were obtained, with good precision (R.S.D. <4.6% and <3.9%) and with a determination frequency of 26 h(-1) for both drugs. The results obtained for pharmaceutical formulations were statistically comparable to the declared hormone amount with relative deviations lower than 2.1%. The accuracy was confirmed by carrying out recovery studies, which furnished recovery values ranging from 96.3% to 103.7% for levothyroxine and 100.1% for liothyronine. (C) 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.

Identification of initiation sites for T4 lysozyme folding using CD and NMR spectroscopy of peptide fragments

Using CD and 2D H-1 NMR spectroscopy, we have identified potential initiation sites for the folding of T4 lysozyme by examining the conformational preferences of peptide fragments corresponding to regions of secondary structure. CD spectropolarimetry showed most peptides were unstructured in water, but adopted partial helical conformations in TFE and SDS solution. This was also consistent with the H-1 NMR data which showed that the peptides were predominantly disordered in water, although in some cases, nascent or small populations of partially folded conformations could be detected. NOE patterns, coupling constants, and deviations from random coil Her chemical shift values complemented the CD data and confirmed that many of the peptides were helical in TFE and SDS micelles. In particular, the peptide corresponding to helix E in the native enzyme formed a well-defined helix in both TFE and SDS, indicating that helix E potentially forms an initiation site for T4 lysozyme folding. The data for the other peptides indicated that helices D, F, G, and H are dependent on tertiary interactions for their folding and/or stability. Overall, the results from this study, and those of our earlier studies, are in agreement with modeling and IID-deuterium exchange experiments, and support an hierarchical model of folding for T4 lysozyme.

Conformational analysis of LYS(11-36), a peptide derived from the beta-sheet region of T4 lysozyme, in TFE and SDS

The solution conformation of a peptide LYS(11-36), which corresponds to the beta-sheet region in T4 lysozyme, has been examined in aqueous solution, TFE, and SDS micelles by CD and H-1 NMR spectroscopy. Secondary structure predictions suggest some beta-sheet and turn character in aqueous solution but predict a helical conformation in a more hydrophobic environment. The predictions were supported by the CD and NMR studies which showed the peptide to be relatively unstructured in aqueous solution, although there was some evidence of a beta-turn conformer which was maintained in 200 mM SDS and, to a lesser extent, in 50% TFE. The peptide was significantly helical in the presence of either 50% TFE or 200 mM SDS. TFE and SDS titrations showed that the peptide could form helical, sheet, or extended structure depending on the TFE or SDS concentration. The studies indicate that peptide environment is the determining factor in secondary structure adopted by LYS(11-36).