Susceptibilidade a antimicrobianos por cepas de Staphylococcus coagulase-negativa isoladas de leite mastítico bovino proveniente de propriedades leiteiras de 9 estados brasileiros

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Estudo de amostras de Staphylococcus coagulase-negativa quanto a formação de biofilme

Pós-graduação em Biociências e Biotecnologia Aplicadas à Farmácia - FCFAR

Pesquisa dos genes icaD e bap de adesão intercelular bacteriana e formação de biofilme por Staphylococcus aureus e Staphylococcus coagulase-negativa isolados de mastite bovina

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Detecção da produção de slime por estafilococos coagulase-negativa isolados de cateter venoso central

Slime production is an important virulence factor of coagulase-negative Staphylococcus spp., allowing them to attach to smooth surfaces of biomaterials, and it has been associated with infections of implanted medical devices. In the present study the production of slime capsules in 27 strains of coagulase-negative Staphylococcus was investigated by culture in Congo Red agar (77.7% positivity), spectrophotometric or microplate method (81.4% positivity) and scanning electron microscopy (88.9% positivity). The resistance of coagulase-negative strains of Staphylococcus to various antimicrobial agents was also determined by agar disk diffusion. The proportion of strains resistant to penicillin G, oxacillin, erythromycin, clindamycin and gentamicin among the slime-producing staphylococci was 88.9%, 70.4%, 81.5%, 66.7% and 59.2%, respectively; all of the coagulase-negative staphylococci were susceptible to vancomycin. The strains isolated from central venous catheters were identified by a conventional method and the API Staph system. The 27 coagulase-negative Staphylococcus strains were identified as: S. saprophyticus (3.7%), S. xylosus (7.4%), S. haemolyticus (14.8%), S. epidermidis (37.0%), S. warneri (14.8%), S. lugdunensis (7.4%), S. hominis (7.4%), S. schleiferi (3.7%) and S. chromogenes (3.7%). It can be concluded that in the most of the coagulase-negative Staphylococcus species there was an association between slime production, the nosocomial origin of the strains and reduced sensitivity to the antibiotics, suggesting a pathogenic potential in the hospital environment.

Determinação do perfil toxigênico em Staphylococcus aureos e estafilococos coagulase-negativa isolados de recém-nascidos pela técnica de RT-PCR

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Caracterização do cassete cromossômico mec (SCCmec) e análise fenótípica e molecular de resistência a oxacilina em estafilococos coagulase-negativa e Staphylococcus aureus

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Detecção da produção de Biofilme em Staphylococcus aureus e Estafilococos Coagulase-negativa isolados de recém-nascidos

Uma coleção de 50 amostras de Staphylococcus aureus e 50 de estafilococos coagulase-negativa (ECN) isoladas de recém-nascidos (RN) da unidade neonatal do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu foram estudadas quanto à produção de biofilme. Para isto foi utilizada a técnica de PCR na detecção dos genes icaA, icaC e icaD e os métodos fenotípicos de aderência em placa de poliestireno, aderência em tubo de borossilicato e método do Agar Congo Vermelho (CRA). Dos 50 S. aureus estudados, 100% foram positivos para a produção de biofilme pela PCR, 98% pelo método do tubo, 100% pelo método da placa de poliestireno e 98% pelo CRA. Já das 50 amostras de ECN, 94% foram positivas pela PCR, 76% pelo método do tubo, 82% pelo teste da placa e 74% pelo CRA. Feita a comparação dos métodos utilizados, tendo por referência o padrão-ouro (PCR), foi possível observar que o método que melhor se correlacionou com o padrão-ouro, foi o método da aderência em placa de poliestireno, apresentando melhor sensibilidade e especificidade para ambas as espécies

Detecção dos genes de Biofilme, da leucocidina Panton-Valentine e da resistência a Meticilina em amostras de Staphylococcus aureus e Estafilococos Coagulase-Negativa

Uma coleção de 57 amostras de Staphylococcus aureus e 30 de estafilococos coagulasenegativa isoladas de recém-nascidos (RN) foram estudadas em relação à presença dos genes pvl, mecA e ica. Das 57 amostras de S. aureus, 31,6% apresentaram o gene mecA e 17,5% os genes pvl, sendo que dentre estas somente uma amostra foi mecA e pvl positiva. Os ECN apresentaram 36,7% de amostras mecA positivas, 93,3% ica positivas e nenhuma amostra pvl. Foi observada uma queda no número de amostras resistentes à meticilina no período de 1991-2005 para os S. aureus e também no período de 1990- 1996 para os ECN, porém a diferença não foi significativa. Também foram estudadas dez amostras de S. aureus isoladas de fossa nasal e nenhuma apresentou o gene mecA ou pvl. Já entre as dez amostras de ECN isoladas de fossa nasal, todas apresentaram o gene 11 ica, porém nenhuma foi resistente à meticilina. A análise dos dados clínicos dos RN revelou que o uso de cateter e outros corpos estranhos aumentam o risco de infecção por S. aureus e ECN. Assim, a produção de biofilme por ECN foi um importante fator de virulência presente em mais de 90% das amostras, confirmando a importância deste na ocorrência de infecções relacionadas com cateteres, e, apesar dos genes mecA e pvl estarem presentes concomitantemente em apenas uma amostra de S. aureus, esta revelou ter importância significativa

Significância clínica de estafilococos coagulase-negativa isolados de recém-nascidos

Objetivo: avaliar a significância clínica de estafilococos coagulase-negativa (ECN) isolados de processos infecciosos em recém-nascidos da unidade neonatal do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu. Método: as linhagens de ECN isoladas foram identificadas e classificadas em significativas e contaminantes, com base em uma série de dados clínicos e laboratoriais obtidos dos prontuários dos pacientes internados na unidade neonatal. Foram pesquisados os dados referentes a fatores perinatais de risco para infecção, evolução clínica, alterações do hemograma e/ou positividade de proteína C-reativa e antibioticoterapia. Resultados: das 117 linhagens de ECN isoladas, 60 (51,3%) foram classificadas como significativas, e 57 (48,7%) como contaminantes. Das 54 crianças com infecção por ECN, 43 (79,6%) eram prematuras, e 27 (50,0%) tiveram peso ao nascimento Conclusões: a maioria dos recém-nascidos com infecção por ECN apresentou fatores predisponentes importantes para a instalação do processo infeccioso, incluindo o peso de nascimento < 1.500g, a não remoção de corpo estranho e a antibioticoterapia prévia. A identificação de espécies de ECN constitui um marcador útil de infecção, visto que o S. epidermidis foi o agente etiológico mais freqüentemente associado aos processos infecciosos.

Beta-lactamase detection in Staphylococcus aureus and coagulase-negative Staphylococcus isolated from bovine mastitis

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Staphylococcus haemolyticus e Staphylococcus epidermidis isolados de fômites de origem hospitalar: perfis de resistência aos agentes antimicrobianos e produção de biofilme

Os Staphylococcus coagulase-negativos (SCN) são encontrados na pele e mucosas de seres humanos e outros animais, já que algumas espécies são parte constituinte da microbiota normal destes mesmos sítios, e podem constituir um reservatório para SCN. A espécie Staphylococcus epidermidis, é reconhecida como grande oportunista e agente de graves infecções nosocomiais e comunitárias, além de associado com infecções em pacientes submetidos a implantes com dispositivos médicos, e a espécie Staphyloccus haemolyticus é a segunda espécie mais isolada de hemoculturas humanas, sendo uma das espécies que apresenta elevada resistência aos antimicrobianos. O presente estudo teve como objetivo principal investigar a presença de SCN em fômites (estetoscópios, termômetros e esfigmomanômetros) no ambiente hospitalar, identificar as espécies S. haemolyticus e S. epidermidis e correlacionar seus perfis de resistência aos antimicrobianos com a capacidade de produção de biofilme. A técnica de multiplex-mPCR foi empregada na determinação das espécies e a fenotipagem foi realizada pelos testes fenotípicos convencionais. Os perfis de resistência aos antimicrobianos foram verificados através do teste de disco-difusão, determinação da CIM (oxacilina e vancomicina), determinação da CBM e presença do gene mecA. A capacidade de produção de biofilme foi investigada pelos testes do Ágar Vermelho do Congo e ensaios de aderência em superfícies abióticas (poliestireno e vidro) na presença e ausência de oxacilina e vancomicina, além da PCR para o gene icaAD. Os resultados demonstraram que pelos testes bioquímicos convencionais, a espécie mais encontrada foi S. epidermidis (43,5%). Após a confirmação pela técnica de PCR, 29 amostras (82%) foram identificadas como S. epidermidis, e 6 amostras (18%) foram identificadas como S. haemolyticus. Todas as amostras foram multirresistentes, oxacilina resistentes e vancomicina sensíveis, sendo que apenas 5 amostras S. epidermidis (17,2%) foram tolerantes a oxacilina. A presença do gene mecA foi detectada em 71,4% das amostras. Apesar da maioria das amostras ter apresentado capacidade de produzir slime e/ou biofilme não foi observada total correlação com a presença do gene icaAD enfatizando a natureza multifatorial da produção de biofilme. As amostras aderiram melhor ao esfigmomanômetro, e também, neste fômites, foi encontrado a maior porcentagem de amostras positivas para a produção de slime. Para aderência ao vidro e aderência ao poliestireno não foi encontrada correlação com os fômites. Foram isoladas amostras S. epidermidis de todos os sítios hospitalares estudados e S. haemolyticus só não foi encontrado em Enfermaria de Clínica Médica. Em relação aos fômites, S. epidermidis foi encontrado em todos os fômites estudados, e S. haemolyticus, apenas foi encontrado em esfigmomanômetro e em outros fômites. Os fômites estão servindo como fontes de transmissão e disseminação de micro-organismos, sendo necessário maiores estudos a respeito.

Relação entre a resistência a oxacilina e a produção de biofilme de amostras de origem comunitária e hospitalar pertencentes a diferentes espécies de Staphylococcus coagulase negativo

Nas últimas décadas, os Staphylococcus coagulase-negativo, têm sido considerados como patógenos verdadeiros, sendo um dos principais grupos bacterianos responsáveis pelas infecções relacionadas a assistência a saúde (IRAS). O presente estudo teve como objetivo geral: avaliação da relação entre a resistência a oxacilina e a produção de biofilme de amostras Staphylococcus coagulase-negativo de origem comunitária e hospitalar. Neste sentido, foram desenvolvidos os seguintes objetivos específico: identificar ao nível de espécie os Staphylococcus coagulase-negativo; analisar por técnica fenotípica (Ágar vermelho do Congo) a produção de slime; avaliar quantitativamente, a produção de biofilme; correlacionar a produção de polissacarídeos extracelulares (slime) com a produção de biofilme; avaliar a relação da resistência a oxacilina como indicador da presença do gene mecA; avaliar a relação entre a concentração inibitória mínima e a concentração bactericida mínima para oxacilina; pesquisar a presença dos genes mecA, icaAD e atlE, pela técnica de PCR. Foi estudado um total de 150 amostras, sendo 50 isoladas de fômites, 50 isoladas de sangue e 50 isoladas de comunidade. Independente da origem, foram identificadas 14 espécies de Staphylococcus coagulase-negativo, sendo mais frequentes S. epidermidis 42,6%, S. haemolyticus 13,3% e S. cohnii cohnii 10,7%. A análise geral da expressão fenotípica de slime mostrou que 64% das amostras avaliadas eram produtoras de slime. Das 150 amostras testadas neste estudo, 95,3% foram produtoras de biofilme. Ao considerarmos a análise da quantificação do biofilme em relação às origens das amostras estudadas não encontramos diferenças significativas e a maioria das amostras foi considerada moderadamente produtora de biofilme. O gene mecA foi detectado em 6 amostras comunitárias, 34 amostras de fômites e 34 amostras de sangue. Não houve diferença significativa entre as amostras de fômites e sangue. Porém, houve diferença significativa entre as amostras de origem comunitária e as de origem hospitalar - fômites e sangue (p < 0,0001). Ao compararmos as três origens de isolamento quanto a presença do gene atlE observamos que houve diferença significativa (p = 0,0012) entre elas. Sendo, as amostras isoladas de sangue, as que apresentaram maior número de amostras que possuíam o gene atlE (n = 18). Das 150 amostras testadas observamos a presença do gene icaAD em 46% amostras comunitárias, 56% amostras de fômites e 60% amostras de sangue, não encontramos diferença significativa (p = 0,5750). Observamos uma correlação entre a resistência a oxacilina e a produção de slime, pois as amostras de origem hospitalar (fômites e sangue) apresentaram altos níveis de resistência a oxacilina e em sua grande maioria foram produtoras de slime. A espécie S. epidermidis foi a mais isolada e deve-se ressaltar que, quando comparada com as outras espécies, apresentou altos níveis de resistência a oxacilina, sendo a maioria produtora de slime e biofilme.

Ocorrência de Staphylococcus sp. em água utilizada em propriedades leiteiras do Estado de São Paulo

Com o objetivo de verificar o papel da água utilizada durante a produção do leite como via de transmissão de Staphylococcus sp., fez-se a contagem de Staphylococcus coagulase negativa e Staphylococcus aureus nas amostras de água das fontes, dos reservatórios e dos estábulos de 30 propriedades leiteiras situadas na região Nordeste do Estado de São Paulo. As maiores ocorrências de isolamentos (10,0 e 16,6%) e os maiores valores médios (4,3×10(4) e 2,5×10(4)) de contagens desses microrganismos foram encontrados nas amostras de água dos estábulos utilizada na obtenção de leite. Estes resultados são importantes pois evidenciam a possibilidade de contaminação do leite ou dos animais por cepas patogênicas.

Comparação de métodos de detecção de biofilme em estafilococos coagulase-negativa provenientes de infecções em recém-nascidos

Pós-graduação em Biologia Geral e Aplicada - IBB