Étude de la localisation génomique du complexe HDAC Set3

La chromatine est un système de compaction de l’ADN jouant un rôle important dans la régulation de l’expression génique. L’acétylation de la chromatine provoque un relâchement de sa structure, facilitant le recrutement de facteurs de transcription. Inversement, des complexes histones déacétylases favorisent une structure compacte, réprimant l’expression de gènes. Un complexe HDAC, Rpd3S, est recruté par l’ARN polymérase II phosphorylée sur les régions codantes transcrites. Cette activité HDAC est stimulée par la déposition de la marque H3K36me générée par l’histone méthyltransférase Set2. Par approche génomique, en utilisant comme organisme modèle Saccharomyces cerevisiae, j’ai optimisé la méthode de ChIP-chip puis démontré que les sous unités Hos2 et Set3 d’un autre complexe HDAC, Set3C, étaient recrutées sur des régions codantes de gènes transcrits. De plus, Set3C est connu pour être recruté soit par H3K4me ou par la Pol II. La suite du projet portera sur le recrutement de Set3C qui semble similaire à Rpd3S.

SUB1 Plays a Negative Role during Starvation Induced Sporulation Program in Saccharomyces cerevisiae

Saccharomyces cerevisiae Sub1 is involved in several cellular processes such as, transcription initiation, elongation, mRNA processing and DNA repair. It has also been reported to provide cellular resistance during conditions of oxidative DNA damage and osmotic stress. Here, we report a novel role of SUB1 during starvation stress-induced sporulation, which leads to meiosis and spore formation in diploid yeast cells. Deletion of SUB1 gene significantly increased sporulation efficiency as compared to the wild-type cells in S288c genetic background. Whereas, the sporulation functions of the sub1(Y66A) missense mutant were similar to Sub1. SUB1 transcript and protein levels are downregulated during sporulation, in highly synchronized and sporulation proficient wild-type SK1 cells. The changes in Sub1 levels during sporulation cascade correlate with the induction of middle sporulation gene expression. Deletion of SUB1 increased middle sporulation gene transcript levels with no effect on their induction kinetics. In wild-type cells, Sub1 associates with chromatin at these loci in a temporal pattern that correlates with their enhanced gene expression seen in sub1. cells. We show that SUB1 genetically interacts with HOS2, which led us to speculate that Sub1 might function with Set3 repressor complex during sporulation. Positive Cofactor 4, human homolog of Sub1, complemented the sub1. sporulation phenotype, suggesting conservation of function. Taken together, our results suggest that SUB1 acts as a negative regulator of sporulation.

Caractérisation de la fonction des complexes histone déacétylases Rpd3S et Set3C

La chromatine est essentielle au maintien de l’intégrité du génome, mais, ironiquement, constitue l’obstacle principal à la transcription des gènes. Plusieurs mécanismes ont été développés par la cellule pour pallier ce problème, dont l’acétylation des histones composant les nucléosomes. Cette acétylation, catalysée par des histones acétyl transférases (HATs), permet de réduire la force de l’interaction entre les nucléosomes et l’ADN, ce qui permet à la machinerie transcriptionnelle de faire son travail. Toutefois, on ne peut laisser la chromatine dans cet état permissif sans conséquence néfaste. Les histone déacétylases (HDACs) catalysent le clivage du groupement acétyle pour permettre à la chromatine de retrouver une conformation compacte. Cette thèse se penche sur la caractérisation de la fonction et du mécanisme de recrutement des complexes HDACs Rpd3S et Set3C. Le complexe Rpd3S est recruté aux régions transcrites par une interaction avec le domaine C-terminal hyperphosphorylé de Rpb1, une sous-unité de l’ARN polymérase II. Toutefois, le facteur d’élongation DSIF joue un rôle dans la régulation de cette association en limitant le recrutement de Rpd3S aux régions transcrites. L’activité HDAC de Rpd3S, quant à elle, dépend de la méthylation du résidu H3K36 par l’histone méthyltransférase Set2. La fonction du complexe Set3C n’est pas clairement définie. Ce complexe est recruté à la plupart de ses cibles par l’interaction entre le domaine PHD de Set3 et le résidu H3K4 di- ou triméthylé. Un mécanisme indépendant de cette méthylation, possiblement le même que pour Rpd3S, régit toutefois l’association de Set3C aux régions codantes des gènes les plus transcrits. La majorité de ces résultats ont été obtenus par la technique d’immunoprécipitation de la chromatine couplée aux biopuces (ChIP-chip). Le protocole technique et le design expérimental de ce type d’expérience fera aussi l’objet d’une discussion approfondie.

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