Sensitive and Rapid Detection of Genetic Modified Soybean (Roundup Ready) by Loop-Mediated Isothermal Amplification

Using the LAMP method, a highly specific and sensitive detection system for genetically modified soybean (Roundup Ready) was designed. In this detection system, a set of four primers was designed by targeting the exogenous 35S epsps gene. Target DNA was amplified and visualized on agarose gel within 45 min under isothermal conditions at 65 degrees C. Without gel electrophoresis, the LAMP amplicon was visualized directly in the reaction tube by the addition of SYBR Green I for naked-eye inspection. The detection sensitivity of LAMP was 10-fold higher than the nested PCR established in our laboratory. Moreover, the LAMP method was much quicker, taking only 70 min, as compared with 300 min for nested PCR to complete the analysis of the GM soybean. Compared with traditional PCR approaches, the LAMP procedure is faster and more sensitive, and there is no need for a special PCR machine or electrophoresis equipment. Hence, this method can be a very useful tool for GMO detection and is particularly convenient for fast screening.

Detection of transgenic DNA in tilapias (Oreochromis niloticus, GIFT strain) fed genetically modified soybeans (Roundup Ready)

We used nested-polymerase chain reaction (PCR) to detect Roundup Ready soybean in aquatic feeds and feeding tilapias. A template concentration of 10(-10) g mu L-1 DNA solution could be detected with a dilute degree of 0.01%. Most (90.6%) of the aquatic feeds containing soybean byproduct included exogenous DNA segments. We also compared genetically modified (GM) soybean with non-GM soybean diets in feeding tilapias (Oreochromis niloticus, GIFT strain) and examined the residual fragments (254 bp) of GM soybeans. Tilapias receiving GM soybean diets had DNA fragments in different tissues and organs, indicating that exogenous GM genes were absorbed systemically and not completely degraded by the tilapia's alimentary canal.

Toxicidade reprodutiva do herbicida glifosato-Roundup em ratos Wistar.

Nos últimos 50 anos houve uma redução significativa na fertilidade de animais selvagens. Estudos revelam que as alterações morfológicas e fisiológicas sobre os órgãos reprodutivos de animais e também de seres humanos podem ser conseqüência da exposição a contaminantes ambientais. Vários pesticidas presentes no ambiente têm sido apontados como substâncias capazes de afetar o sistema endócrino, incluindo efeitos sobre a reprodução (COLBORN et al., 1993). Inúmeros fatores contribuem para que o Brasil seja um dos maiores consumidores de pesticidas do mundo. E, neste país, os herbicidas são os pesticidas líderes em vendas. O Roundup® é o herbicida mais utilizado, sendo comercializado em preparação contendo 36% de glifosato e 18% de polioxietilenamida (POEA) (ANVISA, 2002a e 2002b). Estudos de toxicidade reprodutiva realizados com o glifosato técnico referem a possibilidade de efeito sobre o sistema reprodutivo (WHO, 1994). Entretanto a literatura carece de estudos sobre os efeitos do POEA e dos produtos comerciais que o contém associado ao glifosato (DALLEGRAVE, 2002). Sendo assim, o presente trabalho objetivou verificar a influência do herbicida glifosato-Roundup® sobre a fertilidade e o desenvolvimento de ratos Wistar e a possibilidade deste desregular o sistema endócrino. Foram avaliados os efeitos do herbicida glifosato Roundup (lote BS 1096/98) sobre a reprodução de ratos Wistar, incluindo os efeitos teratogênicos (segmento II), sobre fertilidade e performance reprodutiva de machos e fêmeas (segmento I) e sobre animais expostos pré e perinatalmente (segmento III). As concentrações desejadas foram elaboradas mediante adição de água destilada. As progenitoras do ensaio de teratogenicidade foram tratadas, por via oral, com 500, 750 ou 1000mg/kg de glifosato (Roundup) ou água destilada (10ml/kg), do 6° ao 15° dia de gestação. Os animais da geração paterna (segmento I) foram tratados diariamente, por via oral, com 50, 150 ou 450mg/kg de glifosato (Roundup) ou água destilada (10ml/kg). Os machos foram tratados por 70 dias no pré-acasalamento e por 15 dias consecutivos na fase de acasalamento. As fêmeas foram tratadas por 15 dias no pré-acasalamento, de 1 a 15 dias na fase de acasalamento, por 21 a 23 dias durante a gestação, e aquelas que foram deixadas parir, por mais 21 dias referente ao período de lactação. A segunda geração (segmento III) foi exposta apenas durante a gestação e a lactação (fêmeas do segmento I). Os resultados do ensaio de teratogênese mostraram sinais de toxicidade materna com 50% de letalidade para as fêmeas tratadas com 1000mg/kg e sinais de retardo de desenvolvimento do esqueleto dos fetos. Os machos da geração paterna mostraram sinais de toxicidade sistêmica, com aumento na massa relativa de fígado e rins, acompanhado de alterações histopatológicas, e de toxicidade reprodutiva, caracterizada por alterações histopatológicas nos testículos, redução na concentração de espermatozóides, na produção diária de espermatozóides, na concentração de testosterona e aumento no percentual de espermatozóides anormais. As fêmeas da geração paterna não apresentaram sinais de toxicidade sistêmica e/ou reprodutiva nas variáveis avaliadas. Os machos expostos durante as fases pré e perinatal manifestaram sinais de toxicidade reprodutiva, caracterizados por alterações histopatológicas nos testículos, como degeneração das espermátides em ambas as fases, aumento no percentual de espermatozóides anormais na puberdade e redução na concentração de espermatozóides na fase adulta. As fêmeas expostas durante as fases pré e perinatal não apresentaram sinais de toxicidade sistêmica e/ou reprodutiva nas variáveis avaliadas, como também a prole das mesmas não manifestou alterações de desenvolvimento ponderal ou geral. Este estudo revelou que o herbicida glifosato-Roundup provocou um retardo no desenvolvimento esquelético dos fetos expostos durante a fase de organogênese. Afetou ainda o sistema reprodutivo masculino de indivíduos tratados na fase adulta e expostos durante as fases pré e perinatal, interferindo nas variáveis de fertilidade masculina em puberdade e fase adulta. Também houve sinais de toxicidade sistêmica nas fêmeas do ensaio de teratogênese (segmento II) e nos machos do ensaio de fertilidade e performance reprodutiva (segmento I), em doses muito inferiores aquelas referidas na literatura (WHO, 1994) para o glifosato grau técnico. Conclui-se que o glifosato-Roundup manifestou maior grau de toxicidade sistêmica, reprodutiva masculina e de desenvolvimento esquelético fetal, do que o referido na literatura para o glifosato grau técnico. E, frente à toxicidade reprodutiva masculina evidenciada neste estudo, pode-se sugerir que o glifosato- Roundup® manifestou efeitos de modulação endócrina e conseqüentemente, potencial desregulador endócrino.

Determinação da toxicidade aguda e caracterização de risco ambiental do herbicida Roundup (glifosato) sobre três espécies de peixes

Considering their commercial importance, as these are the species of freshwater fish more commercialized in Brazil, their occurence in different kinds of aquatic environments (lakes, rivers and dams) and for being tolerant to a wide range of variation of various physical parameters and chemical water, the fish species Oreochromis niloticus, Cyprinus carpio and Colossoma macropomum were chosen for this study, furthermore, to test the toxicity we used the herbicide Roundup. The fingerlings of tilapia (Oreochromis niloticus), commun carp (Cyprinus carpio) and tambaqui (Colossoma macropomum) were submitted to the herbicide roundup in the following concentrations: 0.0 (control); 18,06; 19,10; 20,14; 21,18 and 22,22 mg.L-1, 0.0 (control); 13,89; 14,86; 15,83; 16,81 and 17,78 mg.L-1, and 0.0 (control); 18,06; 19,10; 20,14; 21,18 and 22,22 mg.L-1, respectively, three for 96 hours. The LC50 - 96h for O. niloticus, C. carpio and C. macropomum was 21,63, 15,33 and 20,06 mg.L-1 of the herbicide roundup, respectively. The results show that this herbicide is classified as slightly toxic to the three species. The values of dissolved oxygen, pH and temperature recorded in the aquarium control and aquarium experimental of the three fish species have remained without significant variations during the tests, which reduces the possibility of death caused by sudden variations of these parameters during the 96 hours the experiment. The values of LC50 between different species of fish were observed, noting that the species O.niloticus, C. carpio and C. macropomum showed no expressive differences. The values of environmental risk of Roundup were calculated to obtain more stringent parameters in assessing the dangerousness of those on nontargets. The risk of environmental contamination by Roundup for the Nile tilapia, common carp, and tambaqui are low for the lowest application rate (1 L.ha-1) and depths (1.5 and 2.0 m). The dilution of 100%, the highest recommended dose (5 L.ha-1) and depths (1.5 and 2.0 m) the risk is moderate for the three species. The values of the Risk Ratio (QR) were greater than 0,1, indicating that the values of the CAE and LC50 are above acceptable levels and there is a need, this study, a refinement in ecotoxicological tests

Determinação da toxicidade aguda e caracterização de risco ambiental do herbicida Roundup (glifosato) sobre três espécies de peixes

Considering their commercial importance, as these are the species of freshwater fish more commercialized in Brazil, their occurence in different kinds of aquatic environments (lakes, rivers and dams) and for being tolerant to a wide range of variation of various physical parameters and chemical water, the fish species Oreochromis niloticus, Cyprinus carpio and Colossoma macropomum were chosen for this study, furthermore, to test the toxicity we used the herbicide Roundup. The fingerlings of tilapia (Oreochromis niloticus), commun carp (Cyprinus carpio) and tambaqui (Colossoma macropomum) were submitted to the herbicide roundup in the following concentrations: 0.0 (control); 18,06; 19,10; 20,14; 21,18 and 22,22 mg.L-1, 0.0 (control); 13,89; 14,86; 15,83; 16,81 and 17,78 mg.L-1, and 0.0 (control); 18,06; 19,10; 20,14; 21,18 and 22,22 mg.L-1, respectively, three for 96 hours. The LC50 - 96h for O. niloticus, C. carpio and C. macropomum was 21,63, 15,33 and 20,06 mg.L-1 of the herbicide roundup, respectively. The results show that this herbicide is classified as slightly toxic to the three species. The values of dissolved oxygen, pH and temperature recorded in the aquarium control and aquarium experimental of the three fish species have remained without significant variations during the tests, which reduces the possibility of death caused by sudden variations of these parameters during the 96 hours the experiment. The values of LC50 between different species of fish were observed, noting that the species O.niloticus, C. carpio and C. macropomum showed no expressive differences. The values of environmental risk of Roundup were calculated to obtain more stringent parameters in assessing the dangerousness of those on nontargets. The risk of environmental contamination by Roundup for the Nile tilapia, common carp, and tambaqui are low for the lowest application rate (1 L.ha-1) and depths (1.5 and 2.0 m). The dilution of 100%, the highest recommended dose (5 L.ha-1) and depths (1.5 and 2.0 m) the risk is moderate for the three species. The values of the Risk Ratio (QR) were greater than 0,1, indicating that the values of the CAE and LC50 are above acceptable levels and there is a need, this study, a refinement in ecotoxicological tests

Polinização por Apis mellifera em soja em soja transgênica [Glycine max (L.) Merrill] Merrill] Roundup ReadyTM cv. BRS 245 RR e convencional cv. BRS 133.

RESUMO: O objetivo deste estudo foi verificar a influência de Apis mellifera na produção de grãos e qualidade de sementes da soja transgênica Glycine max (L.) Merrill Roundup ReadyTM e convencional. A soja transgênica foi plantada intercalada com a convencional, em 18 parcelas, em três tratamentos: gaiolas com abelhas A. mellifera, gaiolas sem abelhas e áreas descobertas, com livre visitação de insetos. Na soja transgênica, em três parcelas de cada tratamento, foi aplicado glifosato, 30 dias após a emergência. Os parâmetros analisados foram: produção de grãos; número de vagens por planta; peso de 100 sementes e porcentagem de germinação das sementes. Não houve diferença entre as cultivares, entretanto a produção de 2.757,40 kg ha-1 obtida na área coberta por gaiola com abelhas, e 2.828,47 kg ha-1 na área livre para visitação de insetos foram superiores a 2.000,53 kg ha-1 da área coberta por gaiola sem abelhas. O número de vagens por planta foi maior na área coberta por gaiola com abelhas (38,28) e área livre (32,65), quando comparado com o da área coberta por gaiola sem abelhas (21,19). O peso médio de 100 sementes e a germinação das sementes não foram diferentes entre as cultivares e nem entre os tratamentos. Conclui-se que, para as cultivares estudadas, houve benefício na produção de grãos de 37,84%, quando foi permitida a visita de abelhas. ABSTRACT. Pollination by Apis mellifera in transgenic soy (Glycine max (L.) Merrill) Roundup Ready? cv. BRS 245 RR and conventional cv. BRS 133. This research was carried out to evaluate the influence of Africanized honeybees in grain production and seed quality of Glycine max (L.) Merrill Roundup Ready? transgenic soy, as well as of conventional soy. Transgenic soy was interposed with conventional soybean, in 18 plots and three treatments: covered area with Africanized honeybees, covered area without honeybees, and uncovered area with free insect visitation. The herbicide Glyphosate was applied on three plots of each treatment of transgenic soy, 30 days after emergence. Grain production, number of pods/plant, weight per 100 seeds, and seed germination percentage were evaluated. There was no difference among cultivars; however, the production in the covered area with honeybees (2757.4 kg ha-1) and in the uncovered area (2828.47 kg ha-1) were higher than in the covered area without honeybees (2000.53 kg ha-1). The number of pods/plant was greater than in the covered area with honeybees (38.28) and in the uncovered area (32.65) as compared to the covered area without honeybees (21.19). The weight per 100 seeds seed germination did not differ among cultivars or treatments. It can be concluded that, for these cultivars, there was a rise in grain production of 37.84% when honeybee visits were allowed.

Determinação da toxicidade aguda e caracterização de risco ambiental do herbicida Roundup (glifosato) sobre três espécies de peixes

Considering their commercial importance, as these are the species of freshwater fish more commercialized in Brazil, their occurence in different kinds of aquatic environments (lakes, rivers and dams) and for being tolerant to a wide range of variation of various physical parameters and chemical water, the fish species Oreochromis niloticus, Cyprinus carpio and Colossoma macropomum were chosen for this study, furthermore, to test the toxicity we used the herbicide Roundup. The fingerlings of tilapia (Oreochromis niloticus), commun carp (Cyprinus carpio) and tambaqui (Colossoma macropomum) were submitted to the herbicide roundup in the following concentrations: 0.0 (control); 18,06; 19,10; 20,14; 21,18 and 22,22 mg.L-1, 0.0 (control); 13,89; 14,86; 15,83; 16,81 and 17,78 mg.L-1, and 0.0 (control); 18,06; 19,10; 20,14; 21,18 and 22,22 mg.L-1, respectively, three for 96 hours. The LC50 - 96h for O. niloticus, C. carpio and C. macropomum was 21,63, 15,33 and 20,06 mg.L-1 of the herbicide roundup, respectively. The results show that this herbicide is classified as slightly toxic to the three species. The values of dissolved oxygen, pH and temperature recorded in the aquarium control and aquarium experimental of the three fish species have remained without significant variations during the tests, which reduces the possibility of death caused by sudden variations of these parameters during the 96 hours the experiment. The values of LC50 between different species of fish were observed, noting that the species O.niloticus, C. carpio and C. macropomum showed no expressive differences. The values of environmental risk of Roundup were calculated to obtain more stringent parameters in assessing the dangerousness of those on nontargets. The risk of environmental contamination by Roundup for the Nile tilapia, common carp, and tambaqui are low for the lowest application rate (1 L.ha-1) and depths (1.5 and 2.0 m). The dilution of 100%, the highest recommended dose (5 L.ha-1) and depths (1.5 and 2.0 m) the risk is moderate for the three species. The values of the Risk Ratio (QR) were greater than 0,1, indicating that the values of the CAE and LC50 are above acceptable levels and there is a need, this study, a refinement in ecotoxicological tests

Mustering a wild bunch

A travel article about the South Dakota Governor's annual Buffalo Roundup Publication title: "Saddle up for South Dakota Governor Buffalo Roundup" “The crowd always cheers for the buffalo,” says Linda Daugaard, wife of the South Dakota governor. Up to now she and I have been talking about life in the state and her role, as its First Lady, in promoting youth literacy and other programs for families and children...

Manejo de malezas bajo dos sistemas de labranza en cultivo de soya (Glycine max (L.) Merril)

El presente trabajo fue realizado en el Centro Experimental del Algodón, en el ciclo agrícola 1989-1990 con el objetivo de estudiar la influencia del control químico y la Labranza Minina y Convencional en las poblaciones de malezas, durante el primer ciclo del cultivo de soya. Se utilizó un diseño de Bloque Completos al Azar non tres tratamientos y cuatro repeticiones. Se realizaron recuentos de malezas a los 15, 30 y 45 días después de la emergencia del cultivo. Se tomaron datos de individuos/especie y biomasa seca de malezas en un metro cuadrado. Al final se midió el rendimiento del cultivo en Kg/ha Los Tratamientos fueron: Tratamiento (Lab. Min; Lab. Min; Lab. Conv.) N. Común (Paraguat; Glifosto; Imazaquin + Pendimentalin) N. Comercial (Gramoxone; Roundup; Scepter + Prowl) Dosis (1/ha) (2.13; 4.26; 0.99+1.42) En el estudio se encontró que el mejor tratamiento fue donde se utilizó Labranza Convencional y control de malezas ron Scepter y Prowl.

Compatibility of Glyphosate with Galerucella calmariensis; a Biological Control Agent for Purple Loosestrife (Lythrum salicaria)

By integrating Galerucella calmariensis with glyphosate there is potential to achieve both immediate and sustained control of purple loosestrife (Lythrum salicaria). The objective of this study was to determine the compatibility of glyphosate on the oviposition and survival of adult G. Calmariensis and on the ability of G. calmariensis third instar larvae to pupate to teneral adults. Our results revealed glyphosate (formulated as Roundup) at a concentration of 2% (2.43L/acre) and 4% solution (4.86 L/acre) had no impact on the ability of G. calmariensis third instar larvae to pupate to new generation adults. To examine the effect of a 2% solution of glyphosate on adult G. calmariensis oviposition and survival, adults were randomly divided between a direct contact group (adults sprayed directly), an indirect contact group (host plants with adults were sprayed), and a control group. Our results revealed that glyphosate does not impact G. calmariensis oviposition or adult survival. The results of this study indicate that G. calmariensis is compatible with glyphosate indicating that further field studies examining integrated control strategies for purple loosestrife are warranted.

The effects of two pesticides on Clarias gariepinus

Bioassays were carried out to determine the toxicity of two pesticides, Roundup and Gramoxone on Clarias gariepinus. The acute toxicity of both pesticides decreased towards the end of the bioassay period. The calculated safe concentrations for Roundup and Gramoxone are 0.99 ppm - 0.99 ppm and 0.09 ppm - 0.9 ppm respectively. Histological examination revealed that there were pathological changes in the gills and liver even when the fish were subjected to sub-lethal levels

An electrochemical DNA sensor based on electrodepositing aluminum ion films on stearic acid-modified carbon paste electrode and its application for the detection of specific sequences related to bar gene and CP4 Epsps gene

An electrochemical DNA biosensor was fabricated by immobilizing DNA probe on aluminum ion films that were electrodeposited on the surface of the stearic acid-modified carbon paste electrode (CPE). DNA immobilization and hybridization were characterized with cyclic voltammetry (CV) by using methylene blue (MB) as indicator. MB has a couple of well-defined voltammetric redox peaks at the CPE. The currents of redox peaks of MB decreased after depositing aluminum ion films on the CPE (Al(III)/CPE) and increased dramatically after immobilizing DNA probe (ssDNA/Al(III)/CPE). Hybridization of DNA probe led to a marked decrease of the peak currents of MB, which can be used to detect the target single-stranded DNA. The conditions for the preparation of Al(III)/CPE, and DNA immobilization and hybridization were optimized. The specific sequences related to bar transgene in the transgenic corn and the PCR amplification of CP4 epsps gene from the sample of transgenic roundup ready soybean were detected by differential pulse voltammetry (DPV) with this new electrochemical DNA biosensor. The difference between the peak currents of MB at ssDNA/Al(III)/CPE and that at hybridization DNA modified electrode (dsDNA/Al(III)/CPE) was applied to determine the Specific sequence related to the target bar gene with the dynamic range comprised between 1.0 X 10(-7) mol/L to 1.0 x 10(-4) mol/L. A detection limit of 2.25 x.10(-8) mol/L. of oligonucleotides can be estimated.

TECNOLOGIAS de produção de soja - Paraná 2007.

A propriedade agrária, sua reserva legal e as áreas de preservação permanente; Exigências climáticas; Exigências hídricas; Exigências térmicas e fotoperiódicas; Rotação de culturas; Informações gerais; Conceito; Planejamento da lavoura; Escolha do sistema de rotação de culturas; Escolha da rotação de culturas; Cobertura vegetal do solo; Planejamento da rotação de culturas; Indicações de rotação de culturas; Sugestões para rotação de culturas anuais e pastagem; Manejo do Solo; Semeadura direta; Cobertura do solo; Desempenho e condução do sistema de semeadura direta; Sugestões para Manejo do solo para a região do arenito; Sistema convencional de preparo do solo; Compactação do solo no preparo convencional; Rotação de culturas; Correção e manutenção da fertilidade do solo; Amostragem e análise do solo; Acidez do solo; Calagem; Calagem no sistema de plantio direto; Qualidade e uso do calcário; Correção da acidez subsuperficial; Exigências minerais e adubação para a cultura da soja; Adubação; Sugestões para adubação no arenito de Caiuá; Adubação fosfatada e potássica para a sucessão soja-trigo em sistema de semeadura direta em solo Latossolo Roxo; Cultivares; Tecnologia de sementes e colheita; Qualidade da semente; Armazenamento das sementes; Padronização da nomenclatura do tamanho das sementes, após classificação por tamanho; Tratamento de sementes com fungicidas; Seleção do local para produção de sementes; Avaliação da qualidade na produção de sementes; DIACOM (Diagnóstico Completo da Qualidade da Semente de Soja); Metodologia alternativa para o teste de germinação de sementes de soja; Remoção de torrões para prevenir a disseminação do nematóide de cisto; Alerta sobre dessecação em pré-colheita de campos de produção de semente; Manejo de plantas daninhas na entressafra; Colheita; Inoculação das sementes com Bradyrhizobium; Qualidade e quantidade dos inoculantes; Aplicação de fungicidas às sementes junto com o inoculante; Aplicação de micronutrientes nas sementes; Aplicação de fungicidas e micronutrientes nas sementes, junto com o inoculante; Inoculação em áreas com cultivo anterior de soja; Inoculação em áreas de primeiro cultivo com soja; Nitrogênio mineral; lnstalação da lavoura; Umidade e temperatura do solo; Cuidados na semeadura; Época de semeadura; Semeadura em épocas não convencionais; Diversificação de cultivares; População e densidade de semeadura; Cálculo da quantidade de sementes e regulagem da semeadora; Controle de plantas daninhas; lnformações importantes; Semeadura direta; Manejo de plantas daninhas na soja RR (Roundup Ready); Disseminação; Resistência; Dessecação em pré-colheita da soja; Manuseio de herbicidas e descarte de embalagens; Manejo de insetos-pragas; Definição; Pragas principais; Outras pragas; Manuseio de inseticidas e descarte de embalagens; Doenças e medidas de controle; Doenças identificadas no Brasil; Principais doenças e medidas de controle; Manuseio de fungicidas e descarte de embalagem; Retenção foliar e haste verde.