Ethylene and polyamine interactions in morphogenesis of Passiflora cincinnata: effects of ethylene biosynthesis and action modulators, as well as ethylene scavengers

Ethylene is a plant hormone that is of fundamental importance to in vitro morphogenesis, but in many species, it has not been thoroughly studied. Its relationship with polyamines has been studied mainly because the two classes of hormones share a common biosynthetic precursor, S-adenosylmethionine (SAM). In order to clarify whether competition between polyamines and ethylene influences in vitro morphogenetic responses of Passiflora cincinnata Mast., a climacteric species, different compounds were used that act on ethylene biosynthesis and action, or as ethylene scavengers. Treatment with the ethylene inhibitor, aminoethoxyvinylglycine (AVG) caused a greater regeneration frequency in P. cincinnata, whereas treatment with the ethylene precursor, 1-aminocyclopropane-1-carboxylic-acid (ACC) lessened regeneration frequencies. The data suggested that levels of polyamines and ethylene are not correlated with morphogenic responses in P. cincinnata. It was ascertained that neither the absolute ethylene and polyamine levels, nor competition between the compounds, correlated to the obtained morphogenic responses. However, sensitivity to, and signaling by, ethylene appears to play an important role in differentiation. This study reinforces previous reports regarding the requirement of critical concentrations and temporal regulation of ethylene levels for morphogenic responses. Temporal regulation also appeared to be a key factor in competition between the two biosynthetic pathways, without having any effects on morphogenesis. Further studies investigating the silencing or overexpression of genes related to ethylene perception, under the influence of polyamines in cell differentiation are extremely important for the complete understanding of this process.

A novel regeneration system for a wild passion fruit species (Passiflora cincinnata Mast.) based on somatic embryogenesis from mature zygotic embryos

The objective of the present work was to induce somatic embryogenesis from zygotic embryos of Passiflora cincinnata Masters. Zygotic embryos formed calli on media with different concentrations of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and 4.5 mu M benzyladenine (BA) after 30 days of in vitro culture. A concentration of 18.1 mu M 2,4-D resulted in the largest number of somatic embryos. Embryogenic calli were yellowish and friable, forming whitish proembryogenic masses. Morphologically, embryogenic cells were small and had large nuclei and dense cytoplasm, whereas non-embryogenic cells were elongated, with small nuclei and less dense cytoplasm. Calli cultured under white light on basal Murashige and Skoog`s medium with activated charcoal produced embryos in all developmental stages. There were differences among the treatments, with some leading to the production of calli with embryos and some only to callus formation. Some abnormalities were associated with somatic embryos, including fused axes, fused cotyledons and polycotyledonary embryos. Production of secondary somatic embryos occurred in the first cycle of primary embryo development. Secondary embryos differentiated from the surface of the protodermal layer of primary embryos with intense cell proliferation, successive mitotic divisions in the initial phase of embryoid development, and a vascular system formed with no connection to the parental tissue. This secondary embryogenic system of P. cincinnata is characterized by intense proliferation and maintenance of embryogenic competence after successive subcultures. This reproducible protocol opens new prospects for massive propagation and is an alternative to the current organogenesis-based transformation protocol.

GA4+7+ N-(Fenilmetil)-aminopurina na germinação de sementes e emergência de plântulas de Passiflora cincinnata Mast.

A espécie Passiflora cincinnata Mast. é silvestre, não-comercial, conhecida popularmente como maracujá-do-mato. Pode ser aproveitada como planta ornamental ou medicinal, além de ser comestível e ser considerada potencialmente importante para uso como porta-enxerto. O trabalho foi realizado no Departamento de Botânica, Instituto de Biociências da Unesp, Câmpus de Botucatu-SP, e objetivou avaliar o efeito dos reguladores vegetais GA4+7 + N-(fenilmetil)-aminopurina na germinação de sementes, emergência e desenvolvimento de plântulas de P. cincinnata Mast.. As sementes foram obtidas junto à Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) Semi-Árido a partir de plantas cultivadas no Campo Experimental da Caatinga, Petrolina-PE. Foram realizados dois experimentos, sendo o primeiro em laboratório, para estudo da germinação, e o segundo em casa de vegetação, para estudo da emergência e desenvolvimento das plântulas. em ambos os experimentos, foi utilizado o delineamento experimental inteiramente casualizado, cada um com 11 tratamentos de diferentes concentrações de GA4+7 + N-(fenilmetil)-aminopurina (zero; 100; 200; 300; 400; 500; 600; 700; 800; 900 e 1.000 mg L-1) e cinco repetições cada. Para análise dos dados, foram utilizadas análise de variância e análise de regressão. Com base nos resultados obtidos, concluiu-se que os reguladores vegetais, G A4+7 + N-(fenilmetil)-aminopurina, incrementaram o processo germinativo, bem como a emergência e o desenvolvimento de plântulas de P. cincinnata Mast..

Fotoperíodo, temperatura e reguladores vegetais na germinação de sementes de Passiflora cincinnata Mast.

A espécie Passiflora cincinnata Mast., pertencente à família Passifloraceae, é silvestre e popularmente conhecida como maracujá-do-mato, sendo considerada importante na produção de porta-enxertos, uma vez que é tolerante à seca, a doenças causadas por bactérias e a nematóides, além de poder ser utilizada em programas de melhoramento genético. O trabalho teve como objetivos estudar o efeito da luz e da temperatura e a interação entre temperatura e reguladores vegetais na germinação de sementes de Passiflora cincinnata Mast. Foi constituído de três experimentos: no primeiro, estudou-se o efeito da luz e da temperatura na germinação de sementes; no segundo, o efeito de diferentes concentrações dos reguladores vegetais GA4+7 + N-(fenilmetil)-aminopurina na germinação das sementes e, no terceiro, a interação entre temperatura e reguladores vegetais na germinação das sementes. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado para todos os experimentos e os dados foram submetidos à análise de variância e comparação das médias pelo teste Tukey, a 5% de probabilidade. É possível observar que a luz exerce efeito inibitório sobre a germinação das sementes, e que os reguladores vegetais, GA4+7 + N-(fenilmetil)-aminopurina, são eficientes na superação da dormência, além de ampliarem os limites de temperatura da germinação. A temperatura alternada 20-30ºC mostra-se a mais adequada para a germinação de sementes dessa espécie.

Combinações entre GA4+7 + N-(fenilmetil)-aminopurina e ethephon na germinação de sementes de Passiflora cincinnata Mast.

Neste experimento, objetivou-se avaliar a germinação de sementes de Passiflora cincinnata Mast., com o uso de diferentes combinações de GA4+7 + N-(fenilmetil)-aminopurina (zero, 100, 200, 300, 400, 500mg.L-1) e ethephon (zero, 25, 50, 75, 100mg.L-1), sob delineamento experimental inteiramente casualizado, com 5 repetições de 20 sementes por parcela. Para tanto, as sementes foram embebidas nas diversas soluções durante cinco horas, sob oxigenação constante. A seguir, foram transferidas para gerbox preto, sobre duas folhas de papel mata-borrão umedecidas, onde permaneceram sob temperaturas alternadas 20-30ºC (16/8h). Foram avaliadas as porcentagens de germinação, de sementes mortas e de sementes dormentes, o tempo e a velocidade médios de germinação. A contagem do número de sementes germinadas foi realizada diariamente, durante 44 dias. Pelos resultados, verificou-se que o uso de GA4+7 + N-(fenilmetil)-aminopurina promove incremento no percentual e na velocidade de germinação, pela redução da dormência de sementes de Passiflora cincinnata Mast. Além disso, o produto Ethephon, quando aplicado isoladamente, não é eficiente para superação da dormência de sementes dessa espécie.

Divergência genética entre acessos de Passiflora cincinnata mast com base em descritores morfoagronômicos

Este trabalho teve como finalidade estimar a divergência genética entre acessos de maracujazeiro (Passiflora cincinnata Mast.) conservados na coleção de trabalho da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) Semi-Árido, em Petrolina-PE. O experimento foi conduzido em delineamento de blocos ao acaso, com quatro repetições. A avaliação foi realizada em 32 acessos, com base em 23 caracteres: dois relativos à planta, três às folhas, seis às flores, quatro aos frutos, quatro às sementes, dois às características químicas dos frutos e dois à produção. O comportamento dos acessos foi pesquisado pelas análises univariada e multivariada, com estimativas das dissimilaridades obtidas pela distância generalizada de Mahalanobis (D²) e formação do agrupamento pelo método de Tocher. Os acessos apresentaram variabilidade genética para todos os descritores utilizados na avaliação. As distâncias genéticas entre pares de acessos variaram de 17 a 598, com média 152. O acesso 18-D0542 foi indicado como o mais divergente e o mais produtivo, devendo compor programas de intercruzamentos e ser recomendado para cultivos experimentais por produtores. As características de maior importância para a divergência genética foram: a massa total dos frutos (42,29%), a viabilidade de pólen (8,62%) e a área foliar (7,16%). O agrupamento dos acessos não se correlaciona às Unidades Geoambientais originais de coleta.

Aspectos anatômicos, fisiológicos e bioquímicos da enxerta de maracujazeiros sobre Passiflora cincinnata Mast

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Caracterização da variabilidade morfoagronômica de maracujazeiro (Passiflora cincinnata Mast.) no semi-árido brasileiro

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Desenvolvimento inicial de maracujazeiros (Passiflora edulis f. flavicarpa, P. edulis f. edulis e P. alata) enxertados sobre Passiflora cincinnata

The present work aimed to evaluate the initial growth and leaf mineral levels in passion fruit trees (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg., P. edulis f. edulis Sims. and P. alata Dryander) grafted onto Passiflora cincinnata. To obtain seedlings, seeds were sown in plastic bags (500 mL) and hypocotyl grafting was performed when seedlings reached the stage of two fully expanded leaves. Fifteen days after grafting, plants were transplanted to 10L pots filled with previously limed and fertilized soil. Each pot contained two plants and corresponded to one plot. For each commercial species studied as rootstock, experimental design was completely randomized, in 3x5 (plant type x time of harvest) factorial arrangement, with four replicates of two plants per plot and five destructive harvests. Plant types were ungrafted P. cincinnata, ungrafted commercial passion fruit tree and commercial passion fruit tree grafted onto P. cincinnata. The first harvest was performed at 15 days after transplanting and the remaining ones at 14-day intervals (60, 74, 88, 102 and 116 DAS). At each harvest, the number of leaves per plant was counted, and leaf area, stem length, and stem, root, leaf and total dry matter were estimated. At the last harvest, the mineral composition (macro and micronutrients) of plants was analyzed. In general, it was observed that grafting onto P. cincinnata did not interfere negatively with the initial development and mineral levels of commercial passion fruit trees, and this interference varied according to the used canopy.

Somatic embryogenesis of a wild passion fruit species Passiflora cincinnata Masters: histocytological and histochemical evidences

The characterization of cellular changes that occur during somatic embryogenesis is essential for understanding the factors involved in the transition of somatic cells into embryogenically competent cells and determination of cells and/or tissues involved. The present study describes the anatomical and ultrastructural events that lead to the formation of somatic embryos in the model system of the wild passion fruit (Passiflora cincinnata). Mature zygotic embryos were inoculated in Murashige and Skoog induction media supplemented with 2,4-dichlorophenoxyacetic acid and 6-benzyladenine. Zygotic embryo explants at different development stages were collected and processed by conventional methods for studies using light, scanning, and transmission electron microscopy (TEM). Histochemical tests were used to examine the mobilization of reserves. The differentiation of the somatic embryos began in the abaxial side of the cotyledon region. Protuberances were formed from the meristematic proliferation of the epidermal and mesophyll cells. These cells had large nuclei, dense cytoplasm with a predominance of mitochondria, and a few reserve compounds. The protuberances extended throughout the abaxial surface of the cotyledons. The ongoing differentiation of peripheral cells of these structures led to the formation of proembryogenic zones, which, in turn, dedifferentiated into somatic embryos of multicellular origin. In the initial stages of embryogenesis, the epidermal and mesophyll cells showed starch grains and less lipids and protein reserves than the starting explant. These results provide detailed information on anatomical and ultrastructural changes involved in the acquisition of embryogenic competence and embryo differentiation that has been lacking so far in Passiflora.

Avaliação dos efeitos do extrato de Passiflora cincinnata Masters em camundongos: efeito na ansiedade e potencial neuroprotetor

Anxiety disorders and Parkinson’s disease (PD) affect a large portion of the world population. Indeed, therapeutic alternatives available do not contribute to improve most clinical conditions and/or are linked with undesirable side effects. Thus, there is a great demand for the development of new drugs to treatment of these diseases. Passiflora cincinnata Mast. is a native species present in several Brazilian states, popularly known as “maracujá do mato”, “maracujá tubarão” or “maracujá mochila”. Additionally, species of Passiflora genus are traditionally known for their exotic flowers, edible fruits with pronounced flavor and for their sedative, tranquilizer and anxiolytic properties reported by folk medicine. These plants possess important organic compounds such as phenols, cyanogenic glycosides, flavonoids and alkaloids, which are responsible for the anxiolytic, antioxidant, anti-inflammatory, antihyperglycemic, among others activities when tested in mammals. Despite this fact, only a few studies have been conducted to investigate the possible in vivo biological effects of Passiflora cincinnata Mast extracts. Thereby, in this study we evaluated the effects of the alcoholic extract of this plant in anxiety and PD animal model. Mice acutely or chronically administered with ethanolic extract of P. cincinnata do not showed any anxiogenic- or anxyolitic-like effect in elevated plus maze (EPM). In order to reproduce PD symptom’s in mice, we administered repeated injections of reserpine which progressively induced motor impairments such as increase in catalepsy, oral movements, and reduction of the average speed of the animals in the open field, as well as depleted dopamine prodution in SNpc cells. Furthermore, this treatment resulted in the loss of aversive memory recall in mice when undergoing PMDAT. Yet, passiflora group also show this amnesic profile. However, animals treated concomitantly with the alcoholic extract of Passiflora cincinnata Mast. showed higher latency for the onset of motor impairment evaluated by catalepsy. Thus, our results shows that the alcoholic extract of the plant P. cincinnata was able to delay the onset of the catalepsy induced by reserpine administration, plus reverted the depletion of dopamine production in SNpc cells.

Produção de mudas do maracujazeiro silvestre: Passiflora cincinnata Mast. BRS Sertão Forte (BRS SF).

Cultivar de maracujazeiro silvestre BRS Sertão Forte foi obtida por pesquisas desenvolvidas na Embrapa Semiárido (Petrolina, PE) em parceria com a Embrapa Cerrados (Planaltina, DF), resultante de um processo de seleção massal de uma população de acessos silvestres da espécie Passiflora cincinnata Mast. de diferentes origens, visando, principalmente, ao aumento da produtividade e do tamanho do fruto.

Cultivar de maracujazeiro silvestre (Passiflora cincinnata Mast.) para a Caatinga e para o Cerrado BRS SF.

A cultivar de maracujazeiro silvestre BRS Sertão Forte (BRS SF) foi obtida por pesquisas desenvolvidas na Embrapa Semiárido (Petrolina, PE) em parceria com a Embrapa Cerrados (Planaltina, DF), resultante de um processo de seleção massal de uma população de acessos silvestres da espécie Passiflora cincinnata Mast. provenientes de diferentes origens, visando, principalmente, ao aumento da produtividade e do tamanho do fruto.

Cytogenetic characterization of the Passiflora edulis Sims x Passiflora cincinnata Mast. interspecific hybrid and its parents.

The genus Passiflora L. consists of approximately 530 widely distributed species, including Passiflora edulis, which has drawn interest because of its commercial and agronomic value. Passiflora cincinnata is another important species owing to its long flowering period and resistance or tolerance to diseases and pests. In the present study, the meiotic segregation and pollen viability of an interspecific hybrid (P. edulis x P. cincinnata) and its parents were analyzed. The genomic contents were characterized using chromomycin A3 (CMA3)/40-60-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining, fluorescent in situ hybridization with 5S/45S ribosomal DNA (rDNA), genomic in situ hybridization (GISH), and inter-simple sequence repeat (ISSR) markers. The results indicated the diploid chromosome number for the parents and interspecific hybrid was 2n = 18. We also observed regular meiosis, one pair of S rDNA sites, and two pairs of 45S rDNA sites that colocalized with two pairs of CMA3 /DAPI- bands. The GISH data revealed three distinct chromosomal groups in the hybrid. The genetic origins of the interspecific hybrid, and its relationship with its parents were also confirmed using ISSR markers.

Elaboração de geleia de maracujá-da-caatinga (Passiflora cincinnata Mast.) BRS Sertão Forte.

Desta forma este trabalho pretendeu utilizar a BRS Sertão Forte para elaboração de geleia, desenvolvendo e caracterizando o produto final.