荧光法研究PTB与白蛋白的结合

利用药物对蛋白的荧光猝灭作用,用荧光法研究了N-苯酰甲噻唑溴（PTB）与牛血清白蛋白（BSA）及人血清白蛋白（HSA）的相互作用。测定发现BSA溶液的最大激发波长为280nm,HSA溶液的最大激发波长为290nm。分别向溶液中加入PTB后,原有的最大发射波长处的强度明显减弱。说明PTB对BSA和HAS有荧光猝灭作用。PTB与BSA,HSA有中等强度的结合。测得15℃时PTB与BSA,HSA的结合常数分别为3.66×10^3和3.83×10^3,结合位点数n分别为1.02和1.16;37℃时PTB与BSA,HSA的结合常数分别为3.58×10^3和3.35×10^3,结合位点数分别为0.95和0.87。根据热力学常数确定了PTB与BSA,HSA之间的主要作用力类型均为静电作用力。通过Fster偶级-偶级非辐射能量转移原理,得到BSA,HSA与PTB结合的位置距色氨酸残基的距离分别为7.5和7.9nm。根据白蛋白的结构,可以推测BSA,HSA与PTB结合的位点在ⅡA亚结构域,靠近Try214的区域。