Resurrection of Two Species From Synonymy of Anopheles (Nyssorhynchus) strodei Root, and Characterization of a Distinct Morphological Form From the Strodei Complex (Diptera: Culicidae)

Anopheles albertoi Unti and Anopheles arthuri Unti are revived from the synonymy with Anopheles strodei Root, and a distinct morphological form (designated in this study as Anopheles CP Form) from the Strodei Complex of Anopheles (Nyssorhynchus) is characterized. The male genitalia of An. arthuri and An. albertoi are described and illustrated for the first time. An. strodei, An. arthuri, and An. albertoi were first distinguished based on scanning electron microphotos of the eggs, and then each egg type was associated with diagnostic characters of the male genitalia. Identification of Anopheles CP Form was based on morphological characters of the male genitalia, characterized and illustrated in this study. Molecular phylogenetic analysis was most clear when an outgroup was not included, in which case using the nuclear white gene, or the white gene in combination with the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (COI) gene, clearly separated these four taxa. When Anopheles quadrimaculatus Say and Anopheles stephensi Liston were included as an outgroup, combined white and COI data resolved An. strodei and An. albertoi, whereas An. arthuri was not well resolved. The single sequence of Anopheles CP Form was recovered well separated from other groups in all analyses.

Phylogenetic relationships among species of Anopheles (Nyssorhynchus) (Diptera, Culicidae) based on nuclear and mitochondrial gene sequences

Phylogenetic relationships among 21 species of mosquitoes in subgenus Nyssorhynchus were inferred from the nuclear white and mitochondrial NADH dehydrogenase subunit 6 (ND6) genes. Bayestan phylogenetic methods found that none of the three Sections within Nyssorhynchus (Albimanus, Argyritarsis, Myzorhynchella) were supported in all analyses, although Myzorhynchella was found to be monophyletic at the combined genes Within the Albimanus Section the monophyly of the Stroder Subgroup was strongly supported and within the Myzorhynchella Section Anopheles anrunesi and An lutzu formed a strongly supported monophyletic group The epidemiologically significant Albitarsis Complex showed evidence of paraphyly (relative to An lanet-Myzorhynchella) and discordance across gene trees, and the previously synonomized species of An. dunhami and An goeldii were recovered as sister species Finally, there was evidence of complexes in several species, including An antunesi, An deaneorum, and An. strodei (c) 2010 Elsevier B.V. All rights reserved

Neotype designation and redescription of adult male and immature stages of Anopheles (Nyssorhynchus) pictipennis (Philippi) (Diptera: Culicidae)

A neotype is designated for Anopheles (Nyssorhynchus) pictipennis (Philippi) and morphological redescriptions are provided for the adult male, male genitalia, fourth-instar larva and pupa. All specimens, including the neotype were collected in Rio Mapocho, Santiago, Chile in 1945/1946, and were deposited in the Entomological Collection of Faculdade de Saude Publica, Universidade de Sao Paulo (FSP-USP), Brazil. The neotype was previously invalidly designated the allotype of An. pictipennis by Lane and Neghme (1946). Illustrations are provided for diagnostic characteristics of the male genitalia, and larval stage.

Insight into Anopheles (Nyssorhynchus) (Diptera: Culicidae) Species from Brazil

Anopheles (Nyssorhynchus) benarrochi s.l., Anopheles (Nyssorhynchus) oswaldoi s.l., and Anopheles (Nyssorhynchus) konderi s.l. collected in Acrelandia, state of Acre, Brazil, were identified based on morphological characters of the male genitalia, fourth-instar larvae, and pupae. Morphological variation was observed in the male genitalia of these species in comparison with specimens from other localities in Brazil. DNA sequence from the nuclear ribosomal second internal transcribed spacer of individuals identified as An. benarrochi s.l. by using male genitalia characteristics showed that the various morphological forms are conspecific but are distinct from An. benarrochi B from Colombia. Anopheles konderi s.l. and An. oswaldoi s.l. both misidentified as An. oswaldoi s.s. (Peryassu) throughout Brazil, may actually comprise at least two undescribed species. Diagnostic morphological characteristics of the male genitalia are provided to distinguish Anopheles benarrochi s.l., Anopheles oswaldoi s.l., and Anopheles konderi s.l. from morphologically similar species. Incrimination of An. oswaldoi s.s. in malaria transmission in Brazil needs further investigation because other undescribed species from Acre may have been confounded with this taxon.

Redescription of Anopheles (Nyssorhynchus) lutzii, and Resurrection of Anopheles guarani From Synonymy With An. lutzii (Diptera: Culicidae)

Anopheles lutzii Cruz (Diptera: Culicidae) is redescribed using specimens collected in Pariquera-Acu, Vale do Ribeira, state of Sao Paulo, southeastern Mata Atlantica, Brazil. Specimens of An. lutzii from Vale do Ribeira and two females from Nova Friburgo, Rio de Janeiro, are compared with three syntypes of An. lutzii, deposited in the Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro. Comparisons of external morphology of specimens from the type locality of Anopheles guarani Shannon demonstrate it is a valid species, and that Anopheles niger Theobald is conspecific with Anopheles guarani stat. rev. The adult male, male terminalia, fourth-instar larva, and pupa of An. guarani stat. rev. are described for the first time. Diagnostic characters of the male and female, male terminalia, fourth-instar larva and pupa of An. lutzii and An. guarani stat. rev. are illustrated. An. guarani stat. rev. is herein resurrected from the synonymy with An. lutzii, and Anopheles niger comb. nov. is transferred from the synonymy with An. lutzii to the synonymy of An. guarani stat. rev.

Susceptibilidade experimental do Anopheles (Nyssorhynchus) nuneztovari Galbadon, 1940 ao Plasmodium vivax Grassi&Feletti, 1890 e Plasmodium falciparum Welch, 1897

A importância do An. nuneztovari como vetor primário de malária já foi comprovado em países da América do Sul como Venezuela, Colômbia e Peru. Na Amazônia brasileira, embora tenha sido encontrado naturalmente infectado com Plasmodium vivax e P. falciparum e em alta densidade, é ainda considerado vetor secundário desta doença. O objetivo deste presente trabalho foi avaliar a susceptibilidade do An. nuneztovari à infecção por plasmódios humanos. Para isso exemplares da geração F1, obtida em laboratório, de An. nuneztovari e An. darlingi (espécie controle) foram alimentados, em alimentador artificial, com sangue de pacientes com diagnóstico inicial de malária causada por P. falciparum, cuja revisão resultou no diagnóstico de infecção mista. Todas as amostras sangüíneas dos pacientes infectaram espécimes das duas espécies, não mostrando diferença significativa entre elas quanto à susceptibilidade. Para detecção de infecção malárica nos mosquitos foi usado o teste ELISA (Enzime – Linked Imunosorbent Assay) cujos resultados foram discordantes do diagnóstico laboratorial, já que o teste detectou infecções pelo P. falciparum, P. vivax VK210 ou P. vivax VK247entre os mosquitos positivos sugerindo que os pacientes apresentavam infecção mista. Também foi observado o curto período de desenvolvimento de oocistos e esporozoítos, de quatro a cinco dias, o que pode ser explicado pela alta temperatura (>30°C) que os mosquitos foram expostos. Assim nossos resultados sugerem possível envolvimento do An nuneztovari na transmissão de malária humana na área estudada e alertam para o papel deste, como possível vetor principal de malária humana na região amazônica brasileira.

Estudo da filogenia dos anofelinos brasileiros do subgênero Nyssorhynchus e padronização da amplificação dos genes do receptor do peptídeo sexual (SPR) e do peptídeo sexual (SP)

Pós-graduação em Ciências Biológicas (Genética) - IBB

Systematics of the Oswaldoi Complex (Anopheles, Nyssorhynchus) in South America

Abstract Background Effective malaria control relies on accurate identification of those Anopheles mosquitoes responsible for the transmission of Plasmodium parasites. Anopheles oswaldoi s.l. has been incriminated as a malaria vector in Colombia and some localities in Brazil, but not ubiquitously throughout its Neotropical range. This evidence together with variable morphological characters and genetic differences supports that An. oswaldoi s.l. compromises a species complex. The recent fully integrated redescription of An. oswaldoi s.s. provides a solid taxonomic foundation from which to molecularly determine other members of the complex. Methods DNA sequences of the Second Internal Transcribed Spacer (ITS2 - rDNA) (n = 192) and the barcoding region of the Cytochrome Oxidase I gene (COI - mtDNA) (n = 110) were generated from 255 specimens of An. oswaldoi s.l. from 33 localities: Brazil (8 localities, including the lectotype series of An. oswaldoi), Ecuador (4), Colombia (17), Trinidad and Tobago (1), and Peru (3). COI sequences were analyzed employing the Kimura-two-parameter model (K2P), Bayesian analysis (MrBayes), Mixed Yule-Coalescent model (MYC, for delimitation of clusters) and TCS genealogies. Results Separate and combined analysis of the COI and ITS2 data sets unequivocally supported four separate species: two previously determined (An. oswaldoi s.s. and An. oswaldoi B) and two newly designated species in the Oswaldoi Complex (An. oswaldoi A and An. sp. nr. konderi). The COI intra- and inter-specific genetic distances for the four taxa were non-overlapping, averaging 0.012 (0.007 to 0.020) and 0.052 (0.038 to 0.064), respectively. The concurring four clusters delineated by MrBayes and MYC, and four independent TCS networks, strongly confirmed their separate species status. In addition, An. konderi of Sallum should be regarded as unique with respect to the above. Despite initially being included as an outgroup taxon, this species falls well within the examined taxa, suggesting a combined analysis of these taxa would be most appropriate. Conclusions: Through novel data and retrospective comparison of available COI and ITS2 DNA sequences, evidence is shown to support the separate species status of An. oswaldoi s.s., An. oswaldoi A and An. oswaldoi B, and at least two species in the closely related An. konderi complex (An. sp. nr. konderi, An. konderi of Sallum). Although An. oswaldoi s.s. has never been implicated in malaria transmission, An. oswaldoi B is a confirmed vector and the new species An. oswaldoi A and An. sp. nr. konderi are circumstantially implicated, most likely acting as secondary vectors.

Revisão taxonômica e filogenia da Seção Myzorhynchella de Anopheles (Nyssorhynchus) (Diptera: Culicidae)

Anopheles é o gênero da família Culicidae mais estudado devido sua importância médica. Atualmente o gênero Anopheles compreende 472 espécies válidas que estão divididas em sete subgêneros. Os principais vetores de plasmódio da Malária no Brasil pertencem ao subgênero Nyssorhynchus, que inclui 39 espécies oficialmente reconhecidas e um número crescente de complexos de espécies crípticas que estão distribuídas em três Seções: Myzorhynchella, Albimanus e Argyritarsis. Atualmente a Seção Myzorhynchella é formada por seis espécies: An. lutzii, An. parvus, An. nigritarsis, An. guarani, An. antunesi e An. pristinus. Para o desenvolvimento da análise morfológica, observou-se material-tipo depositado em diferentes coleções, espécimes depositados na coleção entomológica da FSP/USP, além de outros obtidos em coletas realizadas durante o presente estudo em diferentes localidades do Brasil. As análises moleculares foram desenvolvidas a partir de espécimes obtidos nas coletas. Revisão taxonômica da Seção Myzorhynchella é apresentada, incluindo-se descrições de quatro novas espécies e redescrições das demais, informações sobre bionomia, importância médica, caracterização molecular, distribuição geográfica, estado de preservação do material-tipo, além de chaves de identificação de adultos, larva de quarto estádio e genitália masculina. Os resultados das análises filogenéticas utilizando sequências de ITS2, COI e Catalase indicam a existência de pelo menos doze espécies dentro da Seção Myzorhynchella, os espécimes que vêm sendo identificados como An. antunesi constitui um complexo formado por possíveis cinco espécies e aqueles de An. parvus e An. pristinus também podem representar complexos de espécies. As sequências de ITS2 podem ser utilizadas como marcador diagnóstico para espécies da Seção Myzorhynchella. Contudo, o estudo ainda demonstra que pouco se conhece sobre a diversidade de espécies de Anopheles que ocorrem em ambientes onde a malária ocorre em baixa endemicidade. Pelo número de espécies novas encontradas e pela escassez de trabalhos com espécies da Seção, fica evidente a necessidade de mais estudos.

Habitat suitability of Anopheles vector species and association with human malaria in the Atlantic Forest in south-eastern brazil

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Contribuição ao conhecimento da fauna anofélica antropofílica da Praia da Saudade na Ilha de Cotijuba - Belém - Pará: uma área endêmica da malária

Apesar da sua localização perto de Belém, Pará, a Ilha de Cotijuba tem sido assolada por surtos de malária durante os últimos anos, principalmente nos meses de abril a maio. A ilha faz parte de um arquipélago situado às margens da baía do Marajó, a 29 km de Belém, constituindo uma parte insular dessa cidade, e possui uma área de cerca de 60 km² e uma costa com 20 km de praias, que corresponde a 66% da área total da ilha. Por causa da epidemia, tomou-se necessário conhecer as espécies de anofelinos vetores de malária na ilha. Nos anos de 2002 a 2004 foram realizadas coletas periódicas de larvas e adultos de mosquitos e os seus criatórios foram localizados e caracterizados. Os imaturos foram coletados com auxílio de conchas e em bandejas plásticas. Para os adultos utilizou-se o método de captura manual com isca humana. Duas coletas de adultos na floresta foram realizadas, uma no período seco e outra no período chuvoso, com duração de 24 horas ininterruptas. Seis coletas bimensais no peridomicílio foram feitas, com duração de 6 horas. Tanto na floresta como no peridomicilio foram registradas apenas duas espécies em atividade atacando o homem, Anopheles (Nyssorhynchus) aquasalis e Anopheles (Anopheles) intermedius. A. aquasalis foi mais freqüente no peridomicílio, enquanto A. intermedius teve maior freqüência na floresta. Verificou-se que o maior número de casos de malária na ilha ocorre dois meses depois do início das chuvas, no mês de maio. Na i, como um todo, existem quatro lagos que são os possíveis criatórios de anofelinos da ilha e o lago da Gabriela é o principal criatório da ilha de Cotijuba, sendo responslha de Cotijubaável por 42% dos casos de malária na ilha no ano de 2003. As condições climáticas, o comportamento dos residentes e a falta de recursos para o efetivo controle dos vetores da doença, entre outros fatores, favorecem a persistência de malária na Ilha de Cotijuba.

Amazonian malaria: Asymptomatic human reservoirs, diagnostic challenges, environmentally driven changes in mosquito vector populations, and the mandate for sustainable control strategies

Across the Americas and the Caribbean, nearly 561,000 slide-confirmed malaria infections were reported officially in 2008. The nine Amazonian countries accounted for 89% of these infections; Brazil and Peru alone contributed 56% and 7% of them, respectively. Local populations of the relatively neglected parasite Plasmodium vivax, which currently accounts for 77% of the regional malaria burden, are extremely diverse genetically and geographically structured. At a time when malaria elimination is placed on the public health agenda of several endemic countries, it remains unclear why malaria proved so difficult to control in areas of relatively low levels of transmission such as the Amazon Basin. We hypothesize that asymptomatic parasite carriage and massive environmental changes that affect vector abundance and behavior are major contributors to malaria transmission in epidemiologically diverse areas across the Amazon Basin. Here we review available data supporting this hypothesis and discuss their implications for current and future malaria intervention policies in the region. Given that locally generated scientific evidence is urgently required to support malaria control interventions in Amazonia, we briefly describe the aims of our current field-oriented malaria research in rural villages and gold-mining enclaves in Peru and a recently opened agricultural settlement in Brazil. (C) 2011 Elsevier B.V. All rights reserved.