Empleo de microorganismos entomopatógenos para el control biológico de mosca doméstica (Musca domestica) [por] Juan José Zárate Ramos

Tesis (Maestría en Ciencias con Especialidad en Microbiología) U.A.N.L.

Inoculaci?n y establecimiento endof?tico de cepas de los hongos entomopat?genos beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae y lecanicillium lecanii en plantas de fr?jol (Phaseolus vulgaris) [recurso electr?nico]

Los hongos end?fitos han recibido una creciente atenci?n en los a?os recientes, ya que han demostrado tener un potencial econ?mico en la agronom?a, debido a su posible uso como agentes de control biol?gico. El establecimiento endof?tico de hongos entomopat?genos en cultivos de inter?s, ofrece un campo amplio y prometedor para comprender las relaciones entre plantas y hongos y los mecanismos de defensa que estos ?ltimos pueden inducir en las plantas. El presente estudio busc? inocular y evaluar la colonizaci?n endof?tica de tres especies de hongos entomopat?genos en plantas de fr?jol (Phaseolus vulgaris). Para ello, se emplearon dos cepas de cada especie, una comercial y la otra de la colecci?n de entomopat?genos del Centro Internacional de Agricultura Tropical; cada cepa constituy? un tratamiento individual. A partir de la siembra y desarrollo de las cepas, se generaron in?culos de 108 conidios/mL que fueron inoculados en las plantas de fr?jol Diacol, variedad Calima. Se encontr? que Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae y Lecanicillium lecanii colonizaron individualmente las hojas de fr?jol. Los porcentajes de colonizaci?n promedio para las cepas de la colecci?n del CIAT fueron de 16% (?= 18,84) para B. bassiana, 13% (?= 4,96) en M. anisopliae y 4% (?= 4,64) para L. lecanii. Con respecto a las cepas comerciales, estos valores fueron 4% (?= 4,64) para B. bassiana; 26% (?= 32) para M. anisopliae y 44% (?= 13,02) para L. lecanii. Todas las cepas de hongos inoculadas pudieron ser recuperadas de tejido vegetal, lo que sugiere su posible uso como agentes de control biol?gico al menos para el cultivo del fr?jol.

Control Of The Properties Of Porous Chitosan-alginate Membranes Through The Addition Of Different Proportions Of Pluronic F68.

This work addresses the development and characterization of porous chitosan-alginate based polyelectrolyte complexes, obtained by using two different proportions of the biocompatible surfactant Pluronic F68. These biomaterials are proposed for applications as biodegradable and biocompatible wound dressing and/or scaffolds. The results indicate that thickness, roughness, porosity and liquid uptake of the membranes increase with the amount of surfactant used, while their mechanical properties and stability in aqueous media decrease. Other important properties such as color and surface hydrophilicity (water contact angle) are not significantly altered or did not present a clear tendency of variation with the increase of the amount of surfactant added to the polyelectrolyte complexes, such as real density, average pore diameter, total pore volume and surface area. The prepared biomaterials were not cytotoxic to L929 cells. In conclusion, it is possible to tune the physicochemical properties of chitosan-alginate polyelectrolyte complexes, through the variation of the proportion of surfactant (Pluronic F68) added to the mixture, so as to enable the desired application of these biomaterials.

Association of EGFR c.2073A > T polymorphism with decreased risk of diffusely infiltrating astrocytoma in a Brazilian case-control study

Epidermal growth factor receptor (EGFR) gene overexpression has been implicated in the development of many types of tumors, including glioblastomas, the most frequent diffusely infiltrating astrocytomas. However, little is known about the influence of the polymorphisms of EGFR on EGFR production and/or activity, possibly modulating the susceptibility to astrocytomas. This study aimed to examine the association of two EGFR promoter polymorphisms (c.-191C > A and c.-216G > T) and the c.2073A > T polymorphism located in exon 16 with susceptibility to astrocytomas, EGFR gene expression and survival in a case-control study of 193 astrocytoma patients and 200 cancer-free controls. We found that the variant TT genotype of the EGFR c.2073A > T polymorphism was associated with a significantly decreased risk of astrocytoma when compared with the AA genotype [sex- and age-adjusted odds ratio 0.51, 95% confidence interval 0.26-0.98]. No association of the two promoter EGFR polymorphisms (or combinations of these polymorphisms) and risk of astrocytomas, EGFR expression or survival was found. Our findings suggest that modulation of the EGFR c.2073A > T polymorphism could play a role in future therapeutic approaches to astrocytoma. (Int J Biol Markers 2008; 23: 140-6)

Mecanismos de Fotopercepción No-Visual y Control Circadiano en la Retina Interna de Vertebrados en Condiciones Fisiológicas y en un Modelo Animal de Ceguera. Mechanisms of Non-visual Perception and Circadian Control in the Vertebrate Inner Retina under Physiological Conditions and in Animal Model of Blindness.

La retina juega un rol esencial en el funcionamiento del sistema circadiano de los vertebrados al ser la encargada de sensar las condiciones de iluminación ambiental que ajustan el reloj interno con el fotoperíodo exterior a través de un circuito no-visual. Este circuito es independiente de la vía de formación de imágenes e involucra a las células ganglionares retinianas (CGRs) que proyectan a varias estructuras no-visuales del cerebro; esta vía es la encargada de regular el reflejo pupilar, la sincronización de los ritmos diarios de actividad, el sueño y la supresión de melatonina pineal. La retina contiene además un reloj autónomo que genera ritmos diarios autosostenidos en distintas funciones bioquímicas y fisiológicas, que le confiere la capacidad de predecir el tiempo y anticiparse en su fisiología a los cambios lumínicos a lo largo del ciclo día-noche. Este laboratorio ha demostrado por 1ra vez que las CGRs de pollo poseen osciladores endógenos que generan variaciones diarias en la biosíntesis de fosfolípidos (Guido et al, J Neurochem. 2001; Garbarino et al., J Neurosci Res. 2004a) y de la hormona melatonina con niveles máximos durante el día (Garbarino et al., J Biol Chem 2004b). Aún más, cultivos primarios de CGRs responden a la luz a través de una cascada bioquímica de fototransducción similar a la de invertebrados y que involucra la activación de la enzima fosfolipasa C (PLC) (Contin et al., FASEB J 2006). Estos cultivos fueron obtenidos a estadios embrionarios muy tempranos en dónde solo las CGRs son postmitóticas y mayoritariamente maduras. A estos estadios, los cultivos expresan marcadores de especificación de células ganglionares (pax6, brn3), la proteina Gq y los fotopigmentos melanopsina y criptocromos con gran homología con marcadores descriptos para fotorreceptores rabdoméricos de invertebrados (Contin et al, 2006). Recientemente comenzamos a investigar la percepción de luz en pollos GUCY1*, un modelo de ceguera, en animales que carecen de células fotorreceptoras-conos y bastones-funcionales. Resultados preliminares indicarían que la retina interna, y potencialmente las CGRs de estos animales conservarían la capacidad de responder a la luz regulando el reflejo pupilar y sincronizando los ritmos diarios de alimentación. La convergencia de osciladores y fotopigmentos en la población de CGRs podría contribuir al control temporal de la fisiología del organismo y regulación de funciones no-visuales. Son objetivos de este proyecto: a) Investigar el rol de las CGRs en el sistema circadiano estudiando: i- su habilidad para sintetizar melatonina y, su regulación por luz y dopamina; ii- su capacidad fotorreceptora intrínseca, investigando la presencia de fotopigmentos y componentes de la cascada de fototransducción fundamentalmente la vía de los fosfoinosítidos y la activación de PLC, mediante ensayos moleculares, bioquímicos y farmacológicos; b) Extender estos estudios a cultivos primarios de CGRs inmunopurificadas midiendo la respuesta a la luz sobre la síntesis de melatonina, y los niveles de los mensajeros 2rios Ca2+ y AMP cíclico, la inducción de genes tempranos y la regulación de la actividad NAT, enzima clave en la síntesis de melatonina; y c) Investigar la percepción de luz en pollos GUCY1*(ciegos), sobre distintas funciones no-visuales tales como el reflejo pupilar, la sincronización de los ritmos diarios de alimentación, la síntesis de melatonina y la expresión génica en animales expuestos a estimulación lumínica de distintas intensidades y longitudes de onda. Estos estudios permitirán construir el espectro de acción de la respuesta a la luz en los pollos ciegos a fin de identificar el/los fotopigmentos intervinientes en este fenómeno. Este proyecto profundizará el conocimiento sobre la capacidad fotorreceptora-no visual de la retina interna y particularmente de las CGRs, de la naturaleza de la cascada bioquímica que opera en las mismas y de los mecanismos de regeneración del cromóforo utilizado.

Plantas nativas como fuente de biopesticidas: explorando distintas interacciones planta-organismo blanco dirigidas al control de plagas, malezas y microorganismos.

Continuando con nuestra búsqueda de biopesticidas de potencia relevante en plantas nativas, en este proyecto nos concentraremos en encontrar sustancias que controlen eficientemente hormigas cortadoras, moscas, cucarachas, mosquitos y malezas. En la primera parte del presente proyecto se determinará mediante aislamiento bioguiado, los principios activos de las plantas que en un trabajo anterior, mostraron mayor inhibición del forrajeo de la hormiga Acromyrmex lundi, Aristolochia argentina y Lantana grisebachii, como también de aquellas que inhibieron al hongo simbionte aislado del nido, A. argentina y Flourensia oolepis. Posteriromente se evaluará la efectividad de estos extractos y principios activos a campo contra A. lundi determinando dosis efectivas para inhibir el forrajeo y/o el desarrollo del hongo simbionte. Luego se extenderá los resultados a otras especies de hormigas cortadoras como A. crassispinus y A. striatus. En segundo lugar proponemos el desarrollo de una metodología para aumentar la efectividad de aceites esenciales (AE) y terpenos (T) contra distintas plagas domésticas aprovechando la interacción de componentes de aceites esenciales en la intoxicación del insecto. Hemos demostrado que Musca domestica al ser fumigada con T puros, por separado, oxida a la mayoría de ellos mediante citocromo P450. Sin embargo cuando es fumigada con AE (mezcla de T) detoxifica al T mayoritario preferentemente, mientras que los T minoritarios están en condiciones de intoxicar al insecto ya que no serían blanco del P450. En este proyecto determinaremos la DL50 de 10 T en moscas tratadas y sin tratar con un inhibidor de P450 (butóxido de piperonilo). Con estos datos podremos elegir mezclas de terpenos tales que uno de ellos sea blanco de P450 y otro/s intoxiquen al insecto. Nos proponemos verificar este mecanismo en M. domestica y luego extenderlo a otros insectos domésticos (cucarachas, mosquitos). Este estudio facilitará el desarrollo de bioinsecticidas mas eficientes para cada insecto disminuyendo sus costos y favoreciendo su aplicación futura. En la tercera parte de este proyecto proponemos aislar los principios activos fitotóxicos de Cortadeira rudiuscula y Ophryosporus charua, cuyos extractos inhibieron selectivamente la germinación de mono- y dicotiledóneas, respectivamente. También se determinará el tiempo de vida media en suelo, y la dosis efectiva a campo con el fin de evaluar a dichas especies como futuros herbicidas naturales selectivos.

Alveolar macrophages from susceptible mice are more competent than those of resistant mice to control initial Paracoccidioides brasiliensis infection

Alveolar macrophages ( AM) are the first host cells to interact with Paracoccidioides brasiliensis (Pb), a primary human pathogen that causes severe pulmonary infections in Latin America. To better understand innate immunity in pulmonary paracoccidioidomycosis, we decided to study the fungicidal and secretory abilities of AM from resistant (A/J) and susceptible (B10.A) mice to infection. Untreated, IFN-gamma and IL-12 primed AM from B10. A and A/J mice were challenged with P. brasiliensis yeasts and cocultured for 72 h. B10. A macrophages presented an efficient fungicidal ability, were easily activated by both cytokines, produced high levels of nitric oxide ( NO), IL-12, and MCP-1 associated with low amounts of IL-10 and GM-CSF. In contrast, A/J AM showed impaired cytokine activation and fungal killing, secreted high levels of IL- 10 and GM-CSF but low concentrations of NO, IL- 12, and MCP-1. The fungicidal ability of B10. A but not of A/J macrophages was diminished by aminoguanidine treatment, although only the neutralization of TGF-beta restored the fungicidal activity of A/J cells. This pattern of macrophage activation resulted in high expression of MHC class II antigens by A/J cells, while B10. A macrophages expressed elevated levels of CD40. Unexpectedly, our results demonstrated that susceptibility to a fungal pathogen can be associated with an efficient innate immunity, while a deficient innate response can ultimately favor the development of a resistant pattern to infection. Moreover, our data suggest that different pathogen recognition receptors are used by resistant and susceptible hosts to interact with P. brasiliensis yeasts, resulting in divergent antigen presentation, acquired immunity, and disease outcomes.

Biofertilizer for control of Guignardia citricarpa, the causal agent of citrus black spot

Biofertilizers generated from the anaerobic and aerobic digestion of cattle manure, known as Bio1 and Bio2, respectively, were studied with regard to their microbial composition and effect on the mycelial growth of Phyllosticta citricarpa, the causal agent of citrus black spot (CBS). Two field experiments were conducted to determine the biofertilizer's potential (Bio1) in controlling CBS (2001/2002 and 2002/2003 crops). It was observed that the greatest number of microorganisms was found in the aerobically produced biofertilizer. Bio2 did not inhibit the mycelial growth of P. citricarpa. Mycelial growth of P. citricarpa was inversely proportional to the Bio1 biofertilizer concentration. In the 2001/2002 cropping season, the Biol effect in controlling CBS was directly proportional to its concentration, at the rate of 0 (healthy fruit), with R-2 = 0.88. Biol had a significant effect in controlling CBS, at a concentration of 10%, during the 2001/2002 cropping season, with DI values of 0.246 and 0.229 for the. 10 and 20% doses, respectively, compared to DI of 0.329 for the control. A directly proportional effect of the biofertilizer concentration on the percentage of fruits with a rating of zero was. also observed in the 2002/2003 cropping season, with R-2 = 0.48. However, even at doses higher than in the preceding cropping season, the biofertilizer was less effective, possibly due to a higher occurrence of the disease. Copper oxychloride and combined applications of copper oxychloride and carbendazim plus mancozeb controlled the disease. The possibility of using the biofertilizer as a protective biofungicide to replace copper oxychloride, especially in organic agriculture, should be explored. (c) 2005 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Efficacy evaluation of a commercial neem cake for control of Haematobia irritans on Nelore cattle

Muita atenção tem sido dada ao desenvolvimento de inseticidas vegetais buscando-se um efetivo controle de ectoparasitas de bovinos, sem prejudicar animais, consumidores e meio ambiente. Este estudo, realizado de abril a julho de 2008, na Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) Pecuária Sudeste, em São Carlos, SP, Brasil, avaliou a eficácia de uma torta comercial de nim (Azadirachta indica) no controle da mosca-dos-chifres (Haematobia irritans) em bovinos. A torta de nim, misturada ao sal mineral na concentração de 2%, foi fornecida a 20 vacas Nelore, durante nove semanas, e sua eficácia foi monitorada através de contagens semanais nos grupos tratado e controle. Infestações individuais foram registradas por meio de fotos digitais em todos os animais de ambos os grupos, e o número de moscas foi, posteriormente, quantificado com o auxílio de um sistema de análise de imagem computadorizado. A quantificação dos componentes da torta de nim, por cromatografia líquida, revelou a presença de azadiractina (421 mg.kg-1) e 3-tigloyl-azadirachtol (151 mg.kg-1). A adição da torta de nim a 2% reduziu o consumo de sal mineral em cerca de 22%. O tratamento com torta de nim a 2% não reduziu as infestações por mosca-dos-chifres em bovinos durante as nove semanas do estudo.

HPV16-associated tumors control myeloid cell homeostasis in lymphoid organs, generating a suppressor environment for T cells

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)