Avaliação ultra-estrutural dos efeitos tóxicos da mitomicina C no epitélio ciliar de olhos de coelhos normais com e sem tratamento hipotensor ocular prévio

OBJETIVO: Avaliar o epitélio ciliar interno (ECI) do corpo ciliar após aplicação de mitomicina C (MMC) sob retalho escleral, em animais tratados com dois tipos de inibidores da produção do humor aquoso. MÉTODOS: Foram estudados ambos os olhos de 16 coelhos divididos em 4 grupos experimentais. Foi realizado retalho escleral em todos os olhos dos animais, mas apenas os olhos direitos (OD) receberam MMC. No grupo 1 (G1) não houve tratamento prévio. Nos grupos G2 e G4 foi administrada acetazolamida e nos grupos G3 e G4 maleato de timolol. O ECI foi examinado à microscopia eletrônica de transmissão (MET). Os olhos esquerdos formaram os grupos controle. RESULTADOS: em todos os grupos exceto no G1 OE, foram observadas: retração das células e/ou alargamento entre invaginações, mitocôndrias com rarefação, vesículas claras e corpos densos. A membrana limitante interna estava espessada, descontínua ou descolada em todos grupos exceto G1 OE e G2 OE. Foi observada liberação de material citoplasmático apenas nos grupos tratados com inibidores da produção de humor aquoso. CONCLUSÕES: 1- MMC, acetazolamida e maleato de timolol causaram alterações morfológicas no epitélio ciliar mesmo usados isoladamente. 2- A associação MMC e acetazolamida causou mais alterações do que a acetazolamida isoladamente, mas não mais do que a MMC isoladamente. 3- Nas demais associações as alterações foram semelhantes.

Exposição de fibroblastos da cápsula de Tenon normal de portadores de pterígio ao 5-fluorouracil e à mitomicina C

OBJETIVO: Avaliar a atividade proliferativa dos fibroblastos da cápsula de Tenon normal, proveniente de portadores de pterígios primários e recidivados. MÉTODOS: Foi realizado estudo prospectivo, aleatório, avaliando-se fragmentos da cápsula de Tenon normal, removidos de 20 portadores de pterígios primários e 21, recidivados. A taxa de proliferação foi avaliada em fibroblastos de terceira passagem, quando as culturas foram expostas a agentes antimitóticos: mitomicina C e 5-fluorouracil. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística. RESULTADOS: Dentre os 41 espécimes cultivados, apenas 1 de pterígio primário e 2 de recidivado proliferaram. Quando expostos a mitomicina C e ao 5-fluorouracil não houve diferença estatisticamente significativa quanto a inibição de proliferação celular. CONCLUSÃO: Desta forma, in vitro, ambos os antimitóticos estudados têm a mesma eficácia na inibição da proliferação sobre os fibroblastos de cápsulas de Tenon normal.

Toxicidade da mitomicina C ao endotélio da córnea de coelhos

Purpose: To evaluate corneal endothelium alterations after applying mitomycin C to the sclera using transmission and scanning electron microscopy, correlating alterations with time, concentration, and evaluation methods. Methods: The corneal endothelium of both eyes of 32 albino rabbits was evaluated and distributed into four groups of 8. Mitomycin C was applied under a scleral flap in the right eye for 5 minutes. Mitomycin C concentrations were 0.5 mg/ml for G1 and G2 and 0.2 mg/ml for G3 and G4. Examinations were performed 15 days after application to G1 and G3, and 30 days after application to G2 and G4. Four cornea in each group were prepared for transmission electron microscopy and four for scanning electron microscopy. Left eyes of all animals were used as controls. Results: Transmission electron microscopy showed corneal endothelium alterations in all groups: rarefied cytoplasm, dilation and fragmentation of rough endoplasmic reticulum cisternae, Golgi apparatus with cisternal dilation, reduced vacuoles, and irregularities of internal membrane more noticeable in G1 and G2. Scanning electron microscopy revealed alterations in all groups except G1: changes in the shape and size of cells and longer filopodial projections. Conclusions: 1-Corneal endothelium alterations were seen at both 0.5 and 0.2 mg/ml concentrations and at 15 and 30 days after mytomicin C application; 2 - Alterations were more intense with higher mytomicin C concentration by transmission electron but not by scanning electron microscopy; 3 - The alterations correlated with time by scanning electron microscopy but not by transmission electron microscopy.

Liberação de mitomicina C - Influência de diferentes materiais

Purpose: To evaluate the quantity of Mitomycin C discharged from different materials with the same size, potentially used in the application of this medicine accessible in the surgery center of an Universitarian Hospital. Material and Method: It was studied 20 fragments with 5 to 5mm, from each 5 materials: Lyostypt, Weck sponge, absorbable cloth which is used to clean, cotton plate and of cotton swab concerning the saturation capacity and the quantity of mitomicyn discharged. In the first stage, it was studied the saturation capacity from each material. In the second stage, it was applied 0,1 ml solution of Mitomicyn C (0,5 mg/ml) and it was measured the biggest discharge halo in the filter paper and the discharged quantity (the difference between the weight before and after the medicine discharge). Results: The absorveble capacity from each material varied from 0,144 ml (absorbable cloth) to 0,216 ml Weck sponge. The discharge of Mitomicyn C was varied too, the biggest was the cotton plate and absorbable cloth. The Weck sponge and the cotton (of cotton swab) discharges the same quantity. Conclusion: The different materials discharged different quantities of Mitomicyn C. This can explain the different results of the trabeculectomy with Mitomicyn C. The surveys must inform not only the material used to apply the mitomycin C but the volume used too. Because the same values of mitomycin C liberation, cotton may substitute Weck sponje in trabeculectomy.

Efeito da mitomicina c no epitélio ciliar estudo experimental em coelhos com microscopia eletrônica de varredura e de transmissão

Purpose: To evaluate and correlate in the rabbit the possible changes caused by mitomycin C under the scleral flap in the ciliary epithelium with transmission electron microscopy (TEM) and scanning electron microscopy (SEM). Methods: The eyes of 32 albino rabbits were studied and divided in 4 experimental groups. The right eye (RE) was intended for the experimental groups and the left eye (LE) for the controls. Group I (G1) was formed by 8 eyes that received 0,5 mg/ml of mitomycin C under the scleral flap and were examined after 15 days. Group II (G2) differed from G1 only in the time of the exam, after 30 days. Group III (G3) was formed by 8 eyes that received 0,2 mg/ml of mitomycin C under the scleral flap and were examined after 15 days. Group IV (G4) differed from group 3 just in the time of the exam, after 30 days. In each eye the internal ciliary epithelium were examined with TEM. Results: The following changes in the internal ciliary epithelium were observed in groups G2, G3, and G4 with TEM: discontinuous and irregular basement membrane, more irregular and electron-dense nucleous, enlargement among interdigitation, edematous mitochondria and myelin figures. These alterations were not found in all the animals of the groups. Group G 1 did not present alterations. Roughness in groups G 1, G2, G3 and G4 were observed with SEM. In groups G 1 and G2 continuity solutions were also observed. Conclusion: Mitomycin C in 0,2 mg/ml and 0,5 mg/ml concentrations caused changes in the internal ciliary epithelium 15 and 30 days after, with TEM and SEM. There was no correlation between dosage, time and with TEM and SEM.

Exposição de culturas de fibroblastos de pterígios primários e recidivados à mitomicina c e ao 5-fluorouracil

Purpose: To evaluate the proliferation of the fibroblasts from primary and recurrent pterygium in culture of cells, after the exposure to mitomycin C and to 5-fluorouracil. Methods: Cultures of fibroblasts from primary and recurrent pterygiuns had been carried through. The cells of the third passage were exposed to mitomycin C 0.4% during 3 minutes and to 5-fluorouracil 25mg/ml that was kept in the nutritional medium. After 3, 6, 12 and 18 days of the exposure, cell countings were made in hemocytometer, in triplicate, with a control not treated with the drugs for each day. The data were submitted to statistical analysis.Results: Mitomicyn C had homogeneous behavior in the primary and recurrent groups, which inhibited the cellular proliferation since the first counting day. However, with 5-fluorouracil, the proliferation inhibition was verified only after the third day of evaluation (in the second counting day) in the recurrent group, and since the first counting day in the primary group. At the end of the experimental period, 5-fluorouracil and mitomycin C were equally efficient in the inhibition of the fibroblasts from primary and recurrent pterygium proliferation. In the controls not exposed, the cell's numbers were increasing during the experimental time.Conclusion: Mitomycin and 5-fluorouracil are equally able to inhibit fibroblasts proliferation from primary and recurrent pterygium Tenon's capsule in cell culture.

Análise histopatológica e ultraestrutural do esôfago distal de ratos com lesão cáustica submetidos à aplicação tópica de mitomicina C

Pós-graduação em Bases Gerais da Cirurgia - FMB

Emprego da mitomicina C como agente antifibrótico na mioplastia do reto medial do bulbo do olho de coelhos (Oryctolagus cuniculus, Linnaeus, 1758) pela cápsula renal de eqüino ( Equus caballus, 1758)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Efeitos da administração tópica per-operatória da mitomicina C, em diferentes concentrações, sobre a cicatrização de mioplastias do reto dorsal do bulbo do olho de coelhos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Efeito da mitomicina c no endotélio corneano após cirurgia de pterígeo

Objectivo: O uso de Mitomicina C, na cirurgia de pterígeo, tem como objectivo diminuir a taxa de recidiva, contudo a sua aplicação não é isenta de complicações. O presente estudo pretende avaliar o efeito, a curto prazo, da aplicação intraoperatória de mitomicina C sobre o endotélio corneano, em doentes submetidos a excisão de pterígeo. Material e Métodos: Estudo prospectivo que incluiu 30 doentes submetidos a excisão de pterígeo primário. Em 15 doentes aplicou-se intraoperatoriamente mitomicina C a 0,02% durante 2 minutos, sobre a esclerótica com colocação posterior de auto-enxerto de conjuntiva. Nos restantes 15 doentes (grupo controlo) procedeu-se a excisão de pterigeo com auto-enxerto de conjuntiva, sem aplicação de mitomicina C. Realizou-se microscopia especular no pré-operatório e aos 2 meses de followup, avaliando-se a densidade de células endoteliais, coeficiente de variação, percentagem de células hexagonais e espessura central da córnea. Utilizou-se o Teste Paired Samples t-test para determinar a existência de diferença estatisticamente significativa entre o pré e pós-operatório, entre os 2 grupos, em relação aos parâmetros em estudo, adoptando-se um nível de significância de 5%. Resultados: Para todos os parâmetros analisados não se observaram diferenças estatisticamente significativas. A densidade de células endoteliais no grupo em que foi aplicada mitomicina C e no grupo controlo foi respectivamente de 2652,67±136,30; 2588,56±352,04 células/mm2 pré-operatoriamente e de 2714,57±204,04 ; 2279,89±875,71 células/mm2 pós-operatoriamente (p=0,185 ; p=0,32). O coeficiente de variação do tamanho celular no grupo em que foi aplicada mitomicina C e no grupo controlo foi respectivamente de 30,44±2,74; 34,22±3,27 células/mm2 pré-operatoriamente e de 30,11±2,71; 32,00±2,69 células/mm2 pós-operatoriamente (p=0,751 ; p=0,053). A percentagem de células hexagonais no grupo em que foi aplicada mitomicina C e no grupo controlo foi respectivamente de 44,11±2,85 ; 43,11±5,33 células/mm2 pré-operatoriamente e de 44,44±4,45 ; 48,22±4,41 células/mm2 pós-operatoriamente (p=0,824 ; p=0,056). A espessura central da córnea no grupo em que foi aplicada mitomicina C e no grupo controlo foi respectivamente de 534,33±49,80 ; 542,56±47,21 células/mm2 pré-operatoriamente e de 518±33,47 ; 536,11±43,24 células/mm2 pós-operatoriamente (p=0,072 ; p=0,183). Conclusão: O uso de mitomicina tópica a 0.02% não afectou de forma estatisticamente significativa o endótelio corneano.

Intraoperative topical administration of mitomycin C, in different concentrations, on the cicatrization of mioplasties of the dorsal rectus of rabbits

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Evaluation of epithelial cell proliferating activity and fibroblast nuclear kariometry in recurrent pterygium treated with mitomycin C

OBJETIVO: Avaliar a eficácia da mitomicina C (MMC) na prevenção da recorrência quando previamente utilizada no transplante autólogo de conjuntiva (TAC). A avaliação da proliferação celular epitelial pelo antígeno Ki-67 e a cariometria do núcleo dos fibroblastos foram usados como auxiliares na avaliação do tratamento. MÉTODOS: Vinte e nove pacientes com pterígio recidivado foram divididos em três grupos: Grupo (G) 1-TAC e colírio placebo (PLA); G2-TAC, MMC 0,015% subconjuntival e PLA; G3-TAC e colírio de MMC 0,02%. A imuno-histoquímica foi realizada no tecido excisado para o antígeno Ki-67, como a cariometria dos núcleos dos fibroblastos (divididos em lado nasal e temporal). A cariometria dos núcleos dos fibroblastos foi avaliada de acordo com os seguintes parâmetros: volume (Vl) e área (Ar) em pelos menos 50 células por paciente. RESULTADOS: A porcentagem das células epiteliais positivas para o antígeno Ki-67 no lado nasal e temporal após o tratamento dos três grupos estudados foi: nasal (3,30% G1, 4,49% G2 e 3,38% G3) e temporal (3,30% G1, 4,46% G2 e 4,14% G3) não mostrando diferença significativa. A cariometria do núcleo dos fibroblastos foi: Vl nasal (792,1 µ3 G1, 605,1 µ3 G2, e 549,9 µ3 G3) e a Ar (100,58 µ2 G1, 83,13 µ2 G2, e 78,41 µ2 G3). Os três grupos mostraram uma diferença significativa p=0,039 e p=0,035, respectivamente do Vl e da Ar no lado nasal. Após seis meses de tratamento, os três grupos apresentaram a seguinte taxa de recidiva: 22,22% G1, 18,18%, G2 e 33,33% G3 respectivamente. CONCLUSÃO: O uso da MMC não interferiu nas células epiteliais positivas para o antígeno Ki-67 no pterígio recidivado, mas acarretou diminuição do volume e área dos núcleos dos fibroblastos no lado nasal do pterígio. As células epiteliais positivas para o antígeno Ki-67 parecem não ter relação com a recidiva do pterígio após seis meses da cirurgia. Outros estudos devem ser realizados para avaliar o papel da proliferação das células epiteliais na recorrência do pterígio.

Estudio de la trabeculectomía experimental mediante implante de PLGA como dispositivo de liberación controlada de fármacos

225 p. : il.

Novo sistema de aplicação de drogas em cirurgias oftalmológicas

The topical corneal application of antimitotic mitomycin-C (MMC) during refractive surgery is still characterized by a lack of standardization and considerable empirism. For this reason the creation of a system capable of reliable drug delivery represents a beneficial innovation for patients submitted to these procedures. Objective: Elaborate a new MMC delivery system during the transoperatory period of photorefractive keratectomy (PRK) followed by patent application. Methods: The project consists of an in vitro experimental study to create an MMC (0.02%) release system. The drug was impregnated in sterile Whatman® 41 paper filter discs with a diameter of 8 mm. After drying, the discs were applied to antibiogram plates seeded with Staphylococcus epidermidis (American Type Culture Collection ATCC 12228), followed by the addition of a drop of sterile water. At the end of 1 minute, the discs were removed and the plates incubated for 48 hours at 35oC. Mean drop volume in the collyrium flasks was measured using analytical balance weighing. The inhibition halo (mm) was correlated with the MMC impregnated into the disc. After completion of the invention design a patent application was lodged at the National Institute of Industrial Property. Results: The correspondence between MMC-produced inhibition halos indicated that a dose of 16μg was ideal for impregnating into the discs. The mean drop volume obtained from the collyrium flasks was 37.7 μL. A minute after the application of one drop of balanced saline solution, the system released an adequate concentration for PRK surgery. Conclusion: A new MMC delivery system was created for transoperatory application in photorefractive keratectomy (PRK). Publication of the patent application (number PI 0704739-8) gives the authors exclusive intellectual property rights. The study was sponsored by Ophthalmos Indústria e Comércio de Produtos Farmacêuticos S.A. (São Paulo-SP, Brazil) and received the indispensable scientific contribution of researchers from the fields of Pharmacy, Medicine, Biology, Statistics and Law, characterizing the work as multidisciplinary, in accordance with norms established by the Postgraduate Health Sciences Program of the Federal University of Rio Grande do Norte (UFRN)

Cultivo e caracterização de celulas-tronco obtidas de blastocistos equinos frescos e refrigerados

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ