Efeitos de diferentes tipos estressores sobre a memória e aprendizagem de ratas

The exposure to stressors produces physiological changes of the organism in order to adapt the individual to the environment. Depending on the type, intensity and duration, stress can affect some cognitive functions, particularly processes of learning and memory. Several studies have also proposed that some level of anxiety would be necessary for memory formation. In this context, memories of previously aversive experiences may determine the manner and intensity with which are expressed fear responses, which explains the great interest in analyzing both anxiety and memory in animals. In addition, males and females demonstrate different reactions in relation to stressful stimuli, showing different levels of anxiety and differences in processing of the acquisition, retention and recall of information. Based on this information, the present study aimed to verify the effect of stress on learning, memory and anxiety behavioral parameters in rats exposed at different types of stressors of long duration (seven consecutive days): restraint (4h/day), overcrowding (18h/day) and social isolation (18h/day) in the different phases of the estrous cycle. Our results showed that the stress induced by restraint and social isolation did not cause changes in the acquisition process, but impaired the recall of memory in rats. Furthermore, it is suggested a protective effect of sex hormones on retrieval of aversive memory, since female rats in proestrus or estrus phase, characterized by high estrogen concentrations, showed no aversive memory deficits. Furthermore, despite the increased plasma levels of corticosterone observed in female rats subjected to restraint stress and social isolation, anxiety levels were unaltered, compared to those various stress conditions. Animal models based on psychological and social stress have been extensively discussed in the literature. Correlate behavioral responses, physiological and psychological have contributed in increasing the understanding of stress-induced psychophysiological disorders

Influência do ciclo estral no efeito do diazepam na ansiedade e memória de ratas

Memory and anxiety are related phenomena. Several evidences suggest that anxiety is fundamental for learnining and may facilitate or impair the memory formation process depending of the context. The majority of animal studies of anxiety and fear use only males as experimental subjects, while studies with females are rare in the literature. However, the prevalence in phobic and anxiety disorders is greater in women than in men. Moreover, it is known that gender maybe influence benzodiazepine effects, the classic drugs used for anxiety disorders treatment. In this respect, to further investigate if fear/anxiety aspects related to learning in female subjects would contribute to the study of phobic and anxiety disorders and their relationship with learning/memory processes, the present work investigates (a) the effects of benzodiazepine diazepam on female rats performance in a aversive memory task that assess concomitantly anxiety/emotionality, as the interaction between both; (b) the influence of estrous cycle phases of female rats on diazepam effects at aversive memory and anxiety/emotionality, and the interaction between both and (c) the role of hormonal fluctuations during estrous cycle phases in absence of diazepam effects in proestrus, because female rats in this phase received or not mifepristone, the antagonist of progesterone receptor, previously to the diazepam treatment. For this purpose, the plus maze discriminative avoidance task, previously validated for studies of anxiety concomitantly to learning/memory, was used. The apparatus employed is an adaptation of a conventional plus maze, with two opens arms and two closed arms, one of which presenting aversive stimulation (noise and light). The parameters used were: time in non-aversive arm compared to time in aversive and percentage of time in aversive arm on several temporal divisions, in order to evaluate memory; percentage of time in open arms, risk assessment, head dipping and end exploring to evaluate anxiety ; and distance traveled for locomotion. In experiment I, we found anxiolytic effect of diazepam only for 4 mg/kg dose, however the amnestic effect appear at a dose of 2 mg/kg. In second experiment, rats were divided in groups according estrous cycle phase (metaestrus/diestrus, proestrus e estrus). In this experiment, when we considered estrous cycle phase or diazepam treatment, the results did not demonstrate any differences in anxiety/emotionality parameters. The amnestic effects of diazepam occur in female rats in metestrus/diestrus and estrus and is absent in proestrous rats. Proestrous female rats that received mifepristone exhibited the amnestic effect of diazepam and also anxiolytic effects, that it was not previously observed in this dose. The results have demonstrated dissociation of anxiolytic and amnestic diazepam effects, not previously observed in males; the absence of amnestic effect of diazepam in proestrous phase; and the possible role of progesterone in aversive memory over diazepam effect, because the mifepristone, associated with diazepam, caused amnestic effect in proestrus

Alterações na evocação de uma memória aversiva ao liongo do ciclo estral de ratas: influências da transmissão gabaérgica na amígdala

GABAergic neurotransmission has been implicated in many aspects of learning and memory, as well as mood and anxiety disorders. The amygdala has been one of the major focuses in this area, given its essential role in modulating emotionally relevant memories. However, studies with male subjects are still predominant in the field. Here we investigated the consequences for an aversive memory of enhancing or decreasing GABAergic transmission in the basolateral nucleus of the amygdala (BLA). Wistar female rats were trained in the plus-maze discriminative avoidance task, in which they had to learn to avoid one of the enclosed arms where an aversive stimulus consisting of a bright light and a loud noise was given (day 1). Fifteen minutes before the test session (day 2) animals received 0,2 μL infusions of either saline solution, the GABAergic agonist muscimol (0,05 mg/ml), or the GABAergic antagonist bicuculine (0,025 mg/ml) bilaterally intra-BLA. On the test day, females in proestrous or estrous presented adequate retrieval and did not extinguish the task, while females in metestrous or diestrous presented impaired retrieval. In the first group, muscimol infusion impaired retrieval and bicuculline had no effect, suggesting naturally low levels of GABAergic transmission in the BLA of proestrous and estrous females. In the second group, muscimol infusion had no effect and bicuculline reversed retrieval impairment, suggesting naturally high levels of GABAergic transmission in the BLA of metestrous and diestous females. Additionally, proestrous and estrous females presented higher anxiety levels compared to metestrous and diestrous females, which could explain better performance of this group. On the other hand, BLA GABAergic system did not interfere with the innate fear response because drug infusions had no effect in anxiety. Thus, retrieval alterations caused by the GABAergic drugs were probably related specifically to memory processes

Avaliação ultra-sonográfica, perfil hormonal e imunoistoquímica de estrógeno e progesterona durante o ciclo estral em vacas Nelore(Bos taurus indicus)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Avaliação hormonal, imunoistoquímica e da expressão gênica de receptores de estrógeno e progesterona em cadelas(Canis familiaris) nas diferentes fases do ciclo estral e com piometra

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ

Análise morfológica neural e da densidade de espinhos dendríticos da amígdala medial de ratas durante o ciclo estral

A amígdala medial (AMe) é um núcleo superficial do complexo amigdalói-de, ocupando seu aspecto rostromedial. A AMe modula uma série de comportamen-tos, além de modular a memória e o aprendizado associado a estímulos olfativos e visuais. Em ratos, é uma estrutura sexualmente dimórfica e está dividida em quatro subnúcleos: ântero-dorsal (AMeAD), ântero-ventral (AMeAV), póstero-dorsal (AMePD) e póstero-ventral (AMePV). A AMe apresenta células com características morfológicas variadas e receptores para hormônios gonadais amplamente e heterogeneamente distribuídos entre todos os seus subnúcleos. O presente trabalho teve como obje-tivos caracterizar a morfologia dos neurônios dos subnúcleos AMeAD, AMeAV, AMePD e AMePV de ratas na fase de diestro e verificar a densidade de espinhos dendríticos de neurônios dos subnúcleos AMeAD, AMePD e AMePV de ratas nas fa-ses de diestro, pró-estro, estro e metaestro. Para tal, foram utilizadas ratas Wistar (N=24) que, após a identificação da fase do ciclo estral, foram anestesiadas e per-fundidas, tiveram seus encéfalos retirados e seccionados (cortes coronais de espes-sura de 100 e 200 µm), submetidos à técnica de Golgi. A seguir, os neurônios foram selecionados e desenhados com auxílio de câmara clara acoplada a um fotomicroscópio. Na avaliação da morfologia dos neurônios, observou-se que eles são do tipo multipolar, células estreladas e bitufted, sendo encontrados em todos os subnúcleos da AMe de ratas na fase de diestro além de células com corpos celulares arredondados, fusiformes, piriformes, ovais e com características piramidais. Para a quanti-ficação da densidade de espinhos dendríticos, foram desenhados os primeiros 40 µm de 8 ramos dendríticos de 6 fêmeas por fase do ciclo estral e por subregião da AMe. Os resultados da contagem dos espinhos dendríticos foram submetidos a ANOVA de uma via e ao teste de Newman-Keuls. Verificou-se que, em diestro, a densidade de espinhos nas regiões AMeAD, AMePD e AMePV, foi maior quando comparada às demais fases do ciclo estral. Além disso, em diestro, a AMePD apresentou a maior densidade quando comparada com as regiões AMeAD e AMePV. O estudo mostrou que os neurônios da AMe de ratas estudadas na fase de diestro apresentaram morfologia variada e a densidade de espinhos dendríticos va-riou na AMeAD, AMePD e AMePV durante o ciclo estral de ratas, especialmente na AMePD. Os resultados obtidos sugerem a plasticidade induzida por esteróides se-xuais na morfologia e na fisiologia da AMe de ratas.

Imunolocalização e quantificação da proteína CYR61 no trato reprodutor de fêmeas caninas nas diferentes fases do ciclo estral, fêmeas pré-púberes e acometidas por piometra

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Caracterização da hemodinâmica uterina de éguas durante o ciclo estral

Pós-graduação em Medicina Veterinária - FMVZ

Determinação dos perfis de estrógenos e progestinas fecais durante o ciclo estral e gestação de paca (Cuniculus paca)

Pós-graduação em Cirurgia Veterinária - FCAV

Amígdala medial póstero-ventral : caracterização ultra-estrutural e volume somático neuronal em ratos machos e fêmeas ao longo do ciclo estral

A amígdala medial póstero-ventral (MePV) é uma estrutura encefálica onde os hormônios gonadais têm um efeito neurotrófico nos ratos. Os objetivos deste trabalho foram: 1) estimar e comparar o volume somático neuronal da MePV de machos (n=5) e fêmeas nas fases de diestro, proestro e estro (n=5 em cada fase) do ciclo ovariano, além de avaliar o possível efeito na lateralidade em ambos os hemisférios cerebrais. Para tanto utilizou-se a reconstrução estereológica de cortes seriados. 2) Caracterizar os aspectos ultra-estruturais neuronais e descrever a ultra-estrutura dos contatos sinápticos nas diferentes porções de tais células (dendritos, espinhos dendríticos, soma e axônio) da mesma região de ratos machos (n=8) e fêmeas em diestro (n=8). Todos os animais foram manipulados de acordo com os procedimentos éticos, anestesiados e perfundidos por via transcardíaca, tendo seus encéfalos sido removidos, pós-fixados e processados para a microscopia eletrônica. No primeiro experimento, as estimativas do volume somático médio de neurônios da MePV esquerda e direita foram realizadas usando-se o método de Cavalieri associado à técnica de contagem de pontos. Os dados foram comparados entre os grupos usando-se o teste de análise de variância (ANOVA) de duas vias para medidas repetidas e pelo teste post-hoc das mínimas diferenças significativas. O nível de significância estatística foi estabelecido em p < 0,05. A análise estatística dos dados mostrou que houve uma diferença no volume somático da MePV entre os grupos experimentais, machos, fêmeas em diestro, proestro e estro [F(3,16) = 3,42; p = 0,043], mas não houve diferença quanto à lateralidade [F(1,16) = 0,19; p = 0,668] nem na interação entre grupos e lateralidade [F(3,16) = 0,99; p = 0,421]. As comparações post-hoc mostraram que a média do volume dos machos não diferem quando comparados com fêmeas em diestro (p > 0,05), mas foi significativamente maior do que em fêmeas em proestro e em estro (p < 0,05 em ambos os casos). Quando foram comparadas as médias do volume somático da MePV nas diferentes fases do ciclo estral das fêmeas, não houve diferença significativa entre esses todos (p > 0,05). No segundo experimento, secções ultrafinas (70-80 nm) foram analisadas e a ultra-estrutura da MePV descrita. No neuropilo da MePV de machos e fêmeas em diestro, neurônios e suas organelas, dendritos com e sem espinho, processos axonais, feixes axônicos não-mielinizados e poucos axônios mielinizados, processos gliais e vasos sangüíneos foram identificados. Além disso, foram observadas sinapses axo-dendríticas supostamente excitatórias com suas regiões pré-sinápticas contendo vesículas claras arredondadas com algumas achatadas e outras de centro denso. Os dendritos algumas vezes recebem vários terminais axonais sobre um mesmo ramo e axônios contatando com mais de uma estrutura pós-sináptica também foram observados. Os espinhos dendríticos apresentavam diferentes morfologias e geralmente recebiam um único contato sináptico, ainda que se tenha observado espinhos com mais de um terminal em aposição a sua membrana. Sinapses simétricas supostamente inibitórias também foram observadas e geralmente no soma neuronal. Os presentes resultados demonstram que: 1) o volume somático neuronal é um parâmetro sexualmente dimórfico na MePV, sendo maior em machos do que em fêmeas em proestro e estro, mas não em fêmeas em diestro. 2) para evidenciar portanto, os efeitos dos hormônios gonadais nos neurônios da MePV é relevante considerar os estágios do ciclo estral das ratas. 3) o volume somático neuronal não mostrou lateralidade nem interação entre os grupos e lateralidade. 4) as peculiaridades nucleares e citoplasmáticas dos neurônios da MePV de ratos machos e fêmeas em diestro não diferem entre si e são semelhantes àquelas de outras áreas encefálicas. 5) espinhos dendríticos formam somente sinapses assimétricas (tipo I), aparentemente excitatórias, e podem ter mais de um contato sináptico. 6) sinapses simétricas (tipo II), aparentemente inibitórias, ocorrem somente sobre ramos dendríticos proximais e somas neuronais. 7) os terminais axonais formando sinapses foram observadas vesículas claras arredondadas e algumas achatadas e ocasionalmente algumas de centro denso. 8) aparentemente as fêmeas apresentaram maior quantidade de vesículas de centro denso do que em machos. O presente trabalho acrescenta novos achados que são importantes para o estudo da organização celular e sináptica da MePV e que podem se associar a outros dados morfológicos previamente descritos na literatura de modo a aumentar a compreensão que se tem a respeito da atividade funcional dessa área do encéfalo de ratos machos e fêmeas, ainda pouco explorada.

Avaliação dos níveis séricos de triiodotironina (T3) e tiroxina (T4) durante o ciclo estral em marrãs (Sus scrofa domestica - Linnaeus, 1758)

No presente trabalho, foram utilizadas 21 fêmeas suínas, virgens, sexualmente aptas, criadas e mantidas sob condições industriais, para observação dos perfis hormonais séricos de triiodotironina e tiroxina, durante o ciclo estral. As colheitas de sangue foram efetuadas sempre no mesmo intervalo, entre 8 e 10 horas. Cada animal foi submetido a 14 punções venosas, distribuídas nos dias zero, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 21, 22 e 23 do ciclo estral. Consideramos o dia zero como o primeiro dia da fase estral, e o 23º dia como o primeiro do estro subseqüente. Os ensaios para dosagens hormonais foram executados utilizando-se a técnica de radioimunoensaio (RIE) em fase sólida e para isso foi empregado conjunto de reagentes comerciais (Coat-A-Count®). Para o hormônio triiodotironina foram observados valores altos no 1º e 23º dia e valor mínimo no 12º dia do ciclo estral. O hormônio tiroxina apresentou valores que oscilaram entre 2,42 e 3,74 mig/dl.

Avaliação dos níveis séricos de 17-alfa-OH progesterona e androstenediona durante o ciclo estral em marrãs (Sus Scrofa Domestica - Linnaeus, 1758)

No presente trabalho, foram utilizadas 21 fêmeas suínas, virgens, sexualmente aptas, criadas e mantidas sob condições industriais, para observação dos perfis hormonais séricos de 17-alfa-OH progesterona e androstenediona, durante o ciclo estral. As colheitas de sangue foram efetuadas sempre no mesmo intervalo, entre 8 e 10 horas. Cada animal foi submetido a 14 punções venosas, distribuídas nos dias zero, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 21, 22 e 23 do ciclo estral. Considerou-se o dia zero como o primeiro dia da fase estral, e o 23º dia como o primeiro do estro subseqüente. Os ensaios para dosagens hormonais foram executados utilizando-se a técnica de radioimunoensaio (RIE) em fase sólida e para isso foi empregado conjunto de reagentes comerciais (Coat-A-Count®). Para o hormônio 17-alfa-OH progesterona, foram encontrados valores médios que variaram entre 0,18 e 2,7 ng/ml e para o hormônio androstenediona esses valores oscilaram entre 0,08 e 0,24 ng/ml.

Efeito da frequência de amamentação sobre a taxa de ovulação após tratamento com desmame temporário + GnRH, sobre a incidência de luteólise prematura no primeiro ciclo estral pós-parto e sobre o desempenho da progênie de vacas Nelore

Avaliou-se o efeito da restrição na frequência de amamentação sobre o diâmetro folicular no dia 0 (DFOL), sobre a taxa de ovulação (TO), e sobre a incidência de luteólise prematura no primeiro ciclo estral pós-parto (ILP) de vacas Nelore multíparas, em anestro, submetidas à amamentação ad libitum (controle; n= 115) ou amamentação uma vez ao dia (restrito; n= 109), entre os dias -14 e 9 do experimento, e estudou-se o efeito desses tratamentos sobre o peso à desmama da progênie dessas vacas. Induziu-se ovulação com remoção de bezerros entre os dias -2 e 0 e aplicação de 100μg de GnRH no dia 0. Somente animais que ovularam foram mantidos no experimento (n= 125). A ocorrência de luteólise prematura foi avaliada por meio da dosagem da concentração sérica de progesterona nos dias 5 e 9. A TO não foi influenciada pelos tratamentos (55,8%; P>0,1), e as vacas do tratamento restrito apresentaram maior DFOL (10,90±0,26 vs. 10,18±0,21mm; P<0,05) e menor ILP (21,4% vs. 43,5%; P<0,05). Os bezerros do tratamento controle foram mais pesados (162,32±2,08 vs. 155,91±4,12kg; P<0,05). Conclui-se que a restrição na frequência de amamentação em vacas Nelore reduz a ILP, porém com possível efeito negativo no desenvolvimento dos bezerros.

Perfil hormonal de Progesterona durante o ciclo Estral em novilhas Nelore confinadas com Diferentes Ondas de Crescimento Folicular

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Níveis séricos de cortisol e 17-& estradiol durante o ciclo estral em marrãs (Sus domestica - Linnaeus 1758)

In the present study 21 young swine females, sexually mature, reared and kept under an industrial management system were assessed for cortisol and oestradiol-17 beta serum prolifes during the oestrus cycle. Blood sampling was performed always at the same interval, from 8:00 to 10:00 a.m. Each animal was submitted to 14 venal punctions at days 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 21, 22 and 23 of the oestrous cycle. The first day of the oestrous phase was assumed to be day 0 and the 23(rd) as the first of the next cycle. Hormone determinations were performed using a solid phase radioimmunoassay (RIA). Regarding to cortisol concentrations, there was a variation from 3.5 to 8.0 mu g/dl and for oestradiol-17 beta the mean values detected varied from 3.5 to 14.9pg/ml.