Rapid production of a plasmid DNA encoding a malaria vaccine candidate via amino-functionalized poly(GMA-co-EDMA) monolith

Malaria is a global health problem; an effective vaccine is urgently needed. Due to the relative poverty and lack of infrastructure in malaria endemic areas, DNA-based vaccines that are stable at ambient temperatures and easy to formulate have great potential. While attention has been focused mainly on antigen selection, vector design and efficacy assessment, the development of a rapid and commercially viable process to manufacture DNA is generally overlooked. We report here a continuous purification technique employing an optimized stationary adsorbent to allow high-vaccine recovery, low-processing time, and, hence, high-productivity. A 40.0 mL monolithic stationary phase was synthesized and functionalized with amino groups from 2-Chloro-N,N- diethylethylamine hydrochloride for anion-exchange isolation of a plasmid DNA (pDNA) that encodes a malaria vaccine candidate, VR1020-PyMSP4/5. Physical characterization of the monolithic polymer showed a macroporous material with a modal pore diameter of 750 nm. The final vaccine product isolated after 3 min elution was homogeneous supercoiled plasmid with gDNA, RNA and protein levels in keeping with clinical regulatory standards. Toxicological studies of the pVR1020-PyMSP4/5 showed a minimum endotoxin level of 0.28 EU/m.g pDNA. This cost-effective technique is cGMP compatible and highly scalable for the production of DNA-based vaccines in commercial quantities, when such vaccines prove to be effective against malaria. © 2008 American Institute of Chemical Engineers.

The suitability of DEAE-Cl active groups on customized poly(GMA-co-EDMA) continuous stationary phase for fast enzyme-free isolation of plasmid DNA

The creation of a commercially viable and a large-scale purification process for plasmid DNA (pDNA) production requires a whole-systems continuous or semi-continuous purification strategy employing optimised stationary adsorption phase(s) without the use of expensive and toxic chemicals, avian/bovine-derived enzymes and several built-in unit processes, thus affecting overall plasmid recovery, processing time and economics. Continuous stationary phases are known to offer fast separation due to their large pore diameter making large molecule pDNA easily accessible with limited mass transfer resistance even at high flow rates. A monolithic stationary sorbent was synthesised via free radical liquid porogenic polymerisation of ethylene glycol dimethacrylate (EDMA) and glycidyl methacrylate (GMA) with surface and pore characteristics tailored specifically for plasmid binding, retention and elution. The polymer was functionalised with an amine active group for anion-exchange purification of pDNA from cleared lysate obtained from E. coli DH5α-pUC19 pellets in RNase/protease-free process. Characterization of the resin showed a unique porous material with 70% of the pores sizes above 300 nm. The final product isolated from anion-exchange purification in only 5 min was pure and homogenous supercoiled pDNA with no gDNA, RNA and protein contamination as confirmed with DNA electrophoresis, restriction analysis and SDS page. The resin showed a maximum binding capacity of 15.2 mg/mL and this capacity persisted after several applications of the resin. This technique is cGMP compatible and commercially viable for rapid isolation of pDNA.

Conformational analysis of antibody binding site using EDMA methods /

Euclidean distance matrix analysis (EDMA) methods are used to distinguish whether or not significant difference exists between conformational samples of antibody complementarity determining region (CDR) loops, isolated LI loop and LI in three-loop assembly (LI, L3 and H3) obtained from Monte Carlo simulation. After the significant difference is detected, the specific inter-Ca distance which contributes to the difference is identified using EDMA.The estimated and improved mean forms of the conformational samples of isolated LI loop and LI loop in three-loop assembly, CDR loops of antibody binding site, are described using EDMA and distance geometry (DGEOM). To the best of our knowledge, it is the first time the EDMA methods are used to analyze conformational samples of molecules obtained from Monte Carlo simulations. Therefore, validations of the EDMA methods using both positive control and negative control tests for the conformational samples of isolated LI loop and LI in three-loop assembly must be done. The EDMA-I bootstrap null hypothesis tests showed false positive results for the comparison of six samples of the isolated LI loop and true positive results for comparison of conformational samples of isolated LI loop and LI in three-loop assembly. The bootstrap confidence interval tests revealed true negative results for comparisons of six samples of the isolated LI loop, and false negative results for the conformational comparisons between isolated LI loop and LI in three-loop assembly. Different conformational sample sizes are further explored by combining the samples of isolated LI loop to increase the sample size, or by clustering the sample using self-organizing map (SOM) to narrow the conformational distribution of the samples being comparedmolecular conformations. However, there is no improvement made for both bootstrap null hypothesis and confidence interval tests. These results show that more work is required before EDMA methods can be used reliably as a method for comparison of samples obtained by Monte Carlo simulations.

Les escales de detecció de maltratactaments domèstics i comportaments autonegligents en persones grans (EDMA). 'Las escalas de detección de maltratos domésticos y comportamientos autonegligentes en personas mayores (EDMA)'.

Resumen tomado parcialmente del autor

Les escales de detecció de maltractaments domèstics i comportaments autonegligents en persones grans (EDMA). 'Las escalas de detección de maltratos domésticos y comportamientos autonegligentes en personas mayores (EDMA)'.

Resumen tomado del autor

Versatility of polymethacrylate monoliths for chromatographic purification of biomolecules

Polymethacrylate monoliths, specifically poly(glycidyl methacrylate-co-ethylene dimethacrylate) or poly(GMA-co-EDMA) monoliths, are a new generation of chromatographic supports and are significantly different from conventional particle-based adsorbents, membranes, and other monolithic supports for biomolecule purification. Similar to other monoliths, polymethacrylate monoliths possess large pores which allow convective flow of mobile phase and result in high flow rates at reduced pressure drop, unlike particulate supports. The simplicity of the adsorbent synthesis, pH resistance, and the ease and flexibility of tailoring their pore size to that of the target biomolecule are the key properties which differentiate polymethacrylate monoliths from other monoliths. Polymethacrylate monoliths are endowed with reactive epoxy groups for easy functionalization (with anion-exchange, hydrophobic, and affinity ligands) and high ligand retention. In this review, the structure and performance of polymethacrylate monoliths for chromatographic purification of biomolecules are evaluated and compared to those of other supports. The development and use of polymethacrylate monoliths for research applications have grown rapidly in recent times and have enabled the achievement of high through-put biomolecule purification on semi-preparative and preparative scales.

Towards the design of a scalable and commercially viable technique for plasmid purification using a methacrylate monolithic stationary phase

A monolithic stationary phase was prepared via free radical co-polymerization of ethylene glycol dimethacrylate (EDMA) and glycidyl methacrylate (GMA) with pore diameter tailored specifically for plasmid binding, retention and elution. The polymer was functionalized. with 2-chloro-N,N-diethylethylamine hydrochloride (DEAE-Cl) for anion-exchange purification of plasmid DNA (pDNA) from clarified lysate obtained from E. coli DH5α-pUC19 culture in a ribonuclease/ protease-free environment. Characterization of the monolithic resin showed a porous material, with 68% of the pores existing in the matrix having diameters above 300 nm. The final product isolated from a single-stage 5 min anion-exchange purification was a pure and homogeneous supercoiled (SC) pDNA with no gDNA, RNA and protein contamination as confirmed by ethidium bromide agarose gel electrophoresis (EtBr-AGE), enzyme restriction analysis and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. This non-toxic technique is cGMP compatible and highly scalable for production of pDNA on a commercial level.

O jornal eletrônico Educação & Imagem: espaço tempo de tessitura de conhecimentos através de práticas de professores com imagens e narrativas

Este trabalho pesquisou os usos do Jornal Eletrônico Educação & Imagem, feitos para e por professores da rede pública. As práticas narradas e as imagens trazidas pelos docentes, que são usuários do jornal, nos possibilitou refletir sobre os currículos e os conhecimentos que têm sido tecidos cotidianamente. Para analisar as narrativas e as imagens presentes nos artigos escritos pelos professores foram pesquisados os editoriais redigidos por cada grupo de pesquisa, que faz parte da elaboração do periódico, e a seção Voz do leitor que publica artigos escritos por professores. Este estudo tem suas relações teóricoepistemológicas e teórico-metodológicas com as pesquisas nos/dos/com os cotidianos (Lefebvre, Certeau) que têm permitido compreender as redes de conhecimentos e significações que se dão nos múltiplos cotidianos em que vivemos, entendendoos como contextos educativos. Para falar sobre a importância da narrativa em pesquisa alguns autores como Walter Ong e Nilda Alves embasaram este estudo. Para o tratamento das noções de tecnologia, currículo e imagens dialogamos com os autores Nilda Alves, MartinBarbero, Boris Kossoy, Roberto Macedo, Alice Lopes, Elisabeth Macedo, Arlindo Machado, Pierre Lévy, Edméa Santos e Marco Silva. Dos artigos analisados observei que as imagens utilizadas pelos professores que escreveram para o jornal apresentaram uma multiplicidade de usos. A maioria fez uso de material fotográfico. Em seus artigos temos imagens usadas nos seguintes contextos: como registro de suas atividades com os alunos, como registro/memória autobiográfica, como reflexão da própria imagem apresentada ou como ilustração do texto dentre outros. Ao trabalhar com estas narrativas e imagens temos a oportunidade de discutir como se dá e como se tem desdobrado os usos do periódico eletrônico, possibilitandonos compreender e complexificar sobre outros processos cotidianos, a partir destes que nos é retratado e narrado.

Processos colaborativos e interacionais de construção do conhecimento em ambientes virtuais de aprendizagem

A presente pesquisa tem por objeto os processos colaborativos e interacionais de construção do conhecimento em ambientes virtuais de aprendizagem. Discute a formação humana em ambientes virtuais de aprendizagem numa perspectiva democrática. Parte da análise do homem que se quer formar para transformar a atual sociedade capitalista desigual numa sociedade mais igualitária. Sob este aspecto, analisa-se também a educação que se faz necessária. Como todo esforço dialético, traz à tona algumas contradições que serão importantes para a melhor compreensão da atualidade e para a busca de caminhos alternativos. Por fim, analisa a Educação Online como caminho democrático de educação, destacando indicativos para o desenvolvimento de uma proposta que privilegie os processos colaborativos e interacionais de construção do conhecimento em ambientes virtuais de aprendizagem. A metodologia usada é o Estudo de Caso, em uma perspectiva longitudinal e qualitativa, com abordagem sócio-histórica. A coleta de dados envolveu a observação participante e a análise documental. O tratamento dos dados utiliza a análise de conteúdo. Os resultados apontam que a educação online, pautada em processos colaborativos e interacionais de construção do conhecimento, além de mais democrática é mais eficaz em relação à aprendizagem que o ensino a distância mais tradicional, de perspectiva instrucional. Além disso, apontam seis indicativos fundamentais para a elaboração de propostas de educação online: o conceito claro de educação online; a consciência de que as tecnologias são do homem e como tal podem favorecer a emancipação humana; a profissionalização docente; a integração dos saberes docentes; a importância da configuração do AVA; e a necessidade de práticas pedagógicas que alternem trabalho autônomo com trabalho colaborativo.

Aprender e ensinar na idade mídia: quando os jovens ocupam as duas dimensões do processo

Este trabalho teve como objetivo geral investigar dimensões dos processos de ensino e de aprendizagem utilizados na contemporaneidade e protagonizados por jovens, estudantes do ensino médio integrado ao profissionalizante, de uma escola pública da cidade de Campina Grande/PB e seus professores, estudantes do Curso de Informática da Universidade Estadual da Paraíba (UEPB). Parte do princípio de que a juventude, como um conceito forjado na modernidade, não dá conta de cobrir as diversidades de jovens que constroem suas subjetividades de maneiras distintas, forjadas em contextos culturais próprios em que eles se constituem como sujeitos ativos. Se quisermos, pois, conhecer os jovens e suas práticas, devemos procurar observá-los em contextos concretos. Nesse sentido, minha incursão pelas práticas dos jovens docentes-alunos junto aos estudantes do ensino médio se constituiu como uma oportunidade ímpar de observar como eles mediam as aprendizagens dos alunos para os usos das TIC. Além disso, a necessidade de conhecer como os alunos da UEPB (alunos-docentes) são formados para os usos das TIC me levou à busca de como ocorre sua formação na Universidade, enquanto alunos de professores adultos. Para a realização do estudo assumi com os sujeitos - estudantes do ensino médio e seus professores universitários uma relação pautada no diálogo e na alteridade (AMORIM,2002, 2004; JOBIM E SOUZA, 1995, 2011; BAKHTIN, 1981, 2003 dentre outros). No estudo comparecem diversos autores que, trazendo esclarecimentos sobre a relação dos sujeitos com os ambientes ciberculturais, me auxiliaram a construir os dados com os sujeitos e a interpretá-los; (LÉVY, 1993, 1996, 1999; LEMOS, 2007, 2011; PRIMO, 2008; SANTAELLA, 2003, 2004; CAVALCANTI & NEPOMUCENO, 2007; VEEN & VRAKKING, 2009; BONILLA, 2009, 2011; PRETTO, 1996, 1999, 2002, 2008 dentre outros). O estudo mostrou que os jovens, alunos-docentes da UEPB, possuem mais experiência com as TIC do que os seus professores (adultos). A proficiência para o uso das TIC pelos docentes-alunos do ensino médio se revelou em diferentes momentos de suas práticas junto àqueles alunos. O estudo mostra, ainda, que os alunos do ensino médio vêem inúmeras vantagens em estudar com os docentes-alunos do UEPB porque eles compartilham de sua imersão na cibercultura, porque eles se colocam no patamar de interlocutores dos alunos, valorizando seus conhecimentos, seus modos de ser e de expressar-se, porque eles demonstram que ensinar e aprender são processos que supõem trocar de lugar, entendendo o outro em sua alteridade. Tais achados permitem discernir, para além da especificidade do estudo realizado, que o mal-estar de professores e alunos na escola pode ser superado pela transformação das relações que se baseiam na superioridade da experiência dos primeiros sobre a dos segundos.

A tessitura do conhecimento via mídias digitais e redes sociais: itinerâncias de uma pesquisa-formação multirreferencial

A cibercultura é a cultura contemporânea estruturada pelos usos sociotécnicos e culturais das mídias digitais em rede. Suas dimensões vêm afetando diretamente os cotidianos no ciberespaço e nas cidades. Neste contexto, esta dissertação buscou compreender como os professores vêm utilizando as mídias digitais em rede. Constamos a emergência e a interconexão de práticas, narrativas e aprendizagens mediadas na e pela cibercultura. Para tanto, dialogamos com as abordagens da pesquisa-formação multirreferencial (Ardoino, Macedo e Santos) e com as pesquisas nos/dos e com os cotidianos (Certeau, Alves, Oliveira). Utilizamos uma bricolagem de dispositivos baseada em conversas presenciais e online (ambiente Moodle, via metodologia WebQuest interativa) no contexto formativo da disciplina "Informática na Educação" do EDAI - Curso de Especialização em Educação com Aplicação da Informática - da Faculdade de Educação da UERJ. Além do ambiente Moodle dialogamos com os praticantes via imersão nas mídias e redes sociais da internet (Orkut, Twitter, YouTube, Blogger). Para enunciar tais práticas recorremos, além dos estudos das abordagens multirreferencial e dos cotidianos, aos estudos da cibercultura (Levy, Castells, Lemos , Santaella, Santos, Silva) e da educação online (Santos, Silva). Analisando os rastros das itinerâncias e narrativas dos praticantes, chegamos aos seguintes achados: a) o digital em rede potencializa e faz emergir outros espaçostempos de aprendizagem e formação, proporcionando fazeressaberesfazeres autorais e colaborativos; b) as redes educativas são tecidas dentrofora do ciberespaço, das escolas e de outros espaços multirreferenciais; c) precisamos repensar os currículos em tempo de cibercultura, articulando propostas de formação na escola, na universidade e no ciberespaço.

O papel mediador das mídias digitais na relação da criança com a leitura e a escrita

Diante de um mundo cada vez mais marcado por transformações na sociedade trazidas pela cultura digital e, portanto, buscando contribuições para a construção de práticas pedagógicas mais concernentes às necessidades das crianças na contemporaneidade, o presente estudo teve como objetivo investigar as mediações dessa cultura nas relações da criança com a leitura e a escrita. Tendo como interlocutores teóricos autores como Magda Soares, Lucia Santaella, Pierre Lévy, André Lemos, dentre outros, o estudo, desenvolvido na perspectiva da pesquisa-intervenção com o aporte de Maria Teresa Freitas, foi realizado numa escola da rede pública municipal do Rio de Janeiro, tendo como sujeitos doze crianças na faixa etária dos 8 aos 12 anos, matriculados no 3 ano do ensino fundamental. O procedimento metodológico privilegiado foi a oficina de produção de textos na internet. Também foi solicitado às crianças que expressassem sua visão dos lugares em que a escrita estivesse presente na internet e na escola, por intermédio do recurso do print screen no primeiro caso e do registro fotográfico no segundo. A interpretação dos dados apontou que é possível considerar que as mídias digitais, com as quais as crianças convivem contemporaneamente, foram mediadoras dos processos de ler e escrever no que refere aos sujeitos da pesquisa, tendo favorecido o interesse destes pela leitura e pela escrita. Pretende-se que os achados da pesquisa possam constituir-se como pistas ao delineamento de políticas e práticas de letramento, pautadas nas experiências históricas e culturais das crianças.

Cibercultura, Juventude e Alteridade: aprendendo-ensinando com o outro no Facebook

As dinâmicas comunicacionais da cibercultura em sua fase atual são possíveis devido à revolução do processo de digitalização, que fez com que imagem, vídeo e som pudessem ser produzidos e compartilhados em/na rede, e pela possibilidade de todo e qualquer internauta ser emissor e receptor em potencial de informação. Diante disso, a pesquisa se dedicou a investigar a relação de jovens usuários do software social Facebook com os saberes que circulam na referida interface. Para interpretar os dados construídos com os sujeitos da pesquisa busquei auxílio nas contribuições de autores de diversas áreas do conhecimento, principalmente do campo da comunicação. A abordagem da etnografia virtual (ou netnografia) também forneceu aporte teórico-metodológico imprescindível ao estudo. As considerações finais sistematizam os achados do estudo que ressaltam a relevância da dinâmica cibercultural do Facebook na constituição de processos de ensino-aprendizagem interativos e co-autorais que colocam em xeque as práticas educativas individuais e autorais próprias da cultura tipográfica. Isso proporcionou refletir sobre a criação de metodologias de ensino baseadas numa perspectiva alteritária, considerando as dinâmicas da interação e da colaboração, próprias da cibercultura.