Patogenicidade causada pelo fungo Colletotrichum gloeosporioides (Penz) em diferentes espécies frutíferas

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a patogenicidade de Colletotrichum gloeosporioides em frutos de manga, mamão, goiaba e maracujá. A inoculação do C. gloeosporioides foi feita de forma direta, fazendo um furo no fruto e colocando, em seguida, um disco de meio de cultura contendo o micélio do fungo das diferentes espécies. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, com 25 tratamentos, 3 repetições, sendo as avaliações realizadas por esquema fatorial de 5 x 5. Os resultados obtidos demonstram que todos os isolados apresentam patogenicidade em todas as espécies frutíferas consideradas. A goiaba é o hospedeiro que apresenta menor suscetibilidade aos diversos isolados de C. gloeosporioides. As mangas Tommy Atkins e Rosa e o mamão apresentam o maior crescimento das lesões, portanto maior suscetibilidade.

Análisis de la infección de Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc. de frutos de aguacatero

La patogénesis de Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc. del estado de Michoacán, México se caracterizó en frutos de aguacatero (Persea americana L.) cultivar 'Hass'. El hongo causó los síntomas característicos de la enfermedad denominada 'antracnosis' a partir de los diez días después de la inoculación. La tasa de infección del hongo entre tratamientos fue significativamente diferente (p<0.05) a partir del sexto día de la inoculación y el desarrollo de la enfermedad se explicó por un modelo de regresión lineal simple (Y = 1.123 + 0.1133X). No se detectó la formación de apresorios pero sí la síntesis de una capa mucilaginosa asociada con los tubos germinativos. El proceso infectivo del hongo se manifestó con la penetración de las hifas intra e inter-celularmente y con la producción de acérvulos a partir de los 12 días después de la inoculación. Los síntomas de la antracnosis se asociaron con la degradación de polifenoles, plasmólisis, necrosis y desintegración celular.

Uso de extratos vegetais no controle in vitro do Colletotrichum gloeosporioides penz. Coletado em frutos de mamoeiro (Carica papaya L.)

Diversas alternativas vêm sendo estudadas e utilizadas no controle de doenças de plantas, no intuito de suprir as necessidades dos produtores e consumidores no desejo de reduzir o uso de defensivos agrícolas. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade de extratos vegetais de Azadirachta indica A. Juss., Anonna muricata L. e de Lippia alba (Mill) N. E. Brown. no controle de Colletotrichum gloeosporioides Penz. in vitro. O experimento foi conduzido na Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Câmpus de Vitória da Conquista, Bahia, Brasil. Extratos aquosos de folhas de graviola e erva-cidreira, e extratos aquosos de sementes de nim e graviola foram usados visando à inibição do crescimento micelial do patógeno causador da antracnose em frutos de mamão. A atividade antifúngica dos extratos foi mensurada mediante a medição do crescimento micelial das culturas. O delineamento adotado foi o DIC em esquema fatorial (3x3x3), com quatro repetições, nos dois experimentos. Os resultados obtidos indicam maior inibição ao crescimento micelial do patógeno com o uso dos extratos de folhas de erva-cidreira e de sementes de graviola.

Ocorrência de Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc. em Carthamus tinctorius L. no estado do Paraná

O cártamo (Carthamus tinctorius) é uma espécie cultivada de importância medicinal e industrial e atualmente é considerado uma planta de grande potencial na produção de biodiesel. O objetivo deste trabalho foi verificar qual o agente causal das manchas observadas em plantas de cártamo presentes no campo experimental do IAPAR em Londrina-PR. Foram realizados isolamentos a partir de lesões foliares de plantas sintomáticas e realizado teste de patogenicidade dos isolados em plantas sadias de cártamo. As plantas inoculadas apresentaram sintomas de antracnose nas folhas, nas hastes e no capítulo, assim como morte das plântulas. A observação e análise de estruturas reprodutivas do fungo em meio de cultura e no tecido do hospedeiro, assim como a PCR táxon-específica permitiu a identificação dos isolados do fungo como pertencentes à espécie Colletotrichum gloeosporioides. Este foi o primeiro relato de antracnose por C. gloeosporioides em cártamo no estado do Paraná.

Efeito de Colletotrichum gloeosporioides Penz, agente etiológico da mancha manteigosa, na germinação e viabilidade de sementes de cafeeiro

Foi avaliada a influência de Colletotrichum. gloeosporioides na sanidade, germinação, viabilidade e vigor de sementes de cafeeiro. Sementes das cultivares Catuaí Vermelho, provenientes de plantas com sintomas de mancha manteigosa, e de lavouras sadias de Catuaí Vermelho IAC 44 e Mundo Novo 379-19 foram submetidas a inoculação por C. gloeosporioides, pelo contato direto com a colônia do fungo, por 0; 24; 48; 72; 96 e 120 horas. As variáveis analisadas foram sanidade, germinação, índice de velocidade de emergência e viabilidade pelo teste de tetrazólio. Verificou-se aumento da incidência de C. gloeosporioides com o do tempo de exposição ao fungo, sendo esta de 26% em Catuaí Vermelho, 21,5% em Catuaí Vermelho IAC-44 (21,5%) e de 11,0% em Mundo Novo IAC 379-19. O fungo afetou a germinação das sementes e o índice de velocidade de emergência das sementes da cultivar Catuaí Vermelho e Catuaí Vermelho IAC 44 a partir de 96 horas de exposição. O efeito de C. gloeosporioides na germinação e no estabelecimento de plântulas de cafeeiro é variável, dependendo da cultivar utilizada, da presença do pergaminho e do tempo de exposição ao fungo, mas a viabilidade das sementes decresce com o aumento do tempo de exposição ao fungo.

Uso de extratos vegetais no controle in vitro do Colletotrichum gloeosporioides penz. Coletado em frutos de mamoeiro (Carica papaya L.)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Interaction between Helicoverpa armigera and Colletotrichum gloeosporioides on the tropical pasture legume Stylosanthes scabra

Glasshouse experiments determined effects of a moth, Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae), and the anthracnose pathogen, Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. and Sacc., on each other when attacking the same host plant, Stylosanthes scabra (Vog.) (Leguminosae) cv. Fitzroy. The host was treated with both organisms in 2 ways of succession and at 2 different life stages each. Larvae of the moth preferred to feed on healthy plants rather than plants recently infected with C. gloeosporioides, and preferred such newly infected plants to severely diseased ones. Adult female moths laid more eggs on healthy and recently infected plants than on diseased plants, when given a choice of all 3 plant types. Severity of anthracnose disease was neither promoted nor retarded by damage to leaves caused by larvae of the moth.

Resistência de progênies de Stylosanthes capitata e S. macrocephala à antracnose causada por Colletotrichum gloeosporioides

Pós-graduação em Agronomia (Proteção de Plantas) - FCA

Colletotrichum gloeosporioides, a new causal agent of citrus post-bloom fruit drop

Citrus post-bloom fruit drop (caused by Colletotrichum acutatum) frequently occurs in the southwestern region of So Paulo State, Brazil. A survey of Colletotrichum isolates associated with symptoms of post-bloom fruit drop in So Paulo State showed C. gloeosporioides in addition to C. acutatum. The objectives of this study were to confirm the identification of C. gloeosporioides isolated from symptomatic citrus flowers, to test the pathogenicity of C. gloeosporioides isolates, to compare the development of disease caused by C. gloeosporioides and C. acutatum, and to determine the frequency of C. gloeosporioides in a sample of isolates obtained from symptomatic flowers in different regions of So Paulo State. Through the use of species-specific primers by PCR, 17.3% of 139 isolates were C. gloeosporioides, and the remaining 82.7% were C. acutatum. The pathogenicity tests, carried out in 3-year old potted plants of sweet oranges indicated that both species caused typical symptoms of the disease including blossom blight and persistent calyces. Incubation periods (3.5 and 3.9 days, respectively, for C. acutatum and C. gloeosporioides) and fruit sets (6.7 and 8.5%, respectively for C. acutatum and C. gloeosporioides) were similar for both species. The incidences of blossom blight and persistent calyces were higher on plants inoculated with C. acutatum than in those inoculated with C. gloeosporioides. Conidial germination was similar for both species under different temperatures and wetness periods. Under optimal conditions, appressorium formation and melanisation were higher for C. gloeosporioides than for C. acutatum. These results indicated that Colletotrichum gloeosporioides is a new causal agent of post-bloom fruit drop.

Infection of guava by Colletotrichum gloeosporioides and Colletotrichum acutatum under different temperatures and wetting periods

Anthracnose, caused by Colletotrichum gloeosporioides and C acutatum, is one of file main post-harvest diseases in guavas. This study aimed to determine the influence of environmental variables oil germination and appressorium formation of Colletotrichum gloeosporioides and C acutatum and infection of Kumagai guavas by these pathogens. The germination rate and the apressorium formation rate in vitro were determined under temperatures of 10, 15, 20, 25, 30, 35 and 40 degrees C, with wetting periods of 6, 12 and 24 hours, The infection of guavas was determined under temperatures of 15, 20, 25 and 30 degrees C and wetting period of 24 hours. There was no germination at 40 degrees C for either species. The germination and apressorium formation rate were rather high in the range of 15 to 30 degrees C for C. gloeosporioides, with a maximum at 25 degrees C. For the species C. acutatum, germination and apressorium formation rates were more sensitive to variations in temperature, with a maximum at 20 degrees C. The wetting periods tested somewhat influenced the germination of C. gloeosporioides, whereas in C acutatum the germination was significantly lower with 6 hours of wetting than 12 and 24 hours. The infection of guavas, for both fungal species, increased with the temperature, unlike conidium germination and apressorium formation. Incidences of 100% occurred with 30 degrees C, at 10 days after the inoculation.

Isolation of genotype- and chromosome-specific DNA markers in a biotype of Colletotrichum gloeosporioides using random amplified polymorphic DNA analysis

Genetic markers that distinguish fungal genotypes are important tools for genetic analysis of heterokaryosis and parasexual recombination in fungi. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers that distinguish two races of biotype B of Colletotrichum gloeosporioides infecting the legume Stylosanthes guianensis were sought. Eighty-five arbitrary oligonucleotide primers were used to generate 895 RAPD bands but only two bands were found to be specifically amplified from DNA of the race 3 isolate. These two RAPD bands were used as DNA probes and hybridised only to DNA of the race 3 isolate. Both RAPD bands hybridised to a dispensable 1.2 Mb chromosome of the race 3 isolate. No other genotype-specific chromosomes or DNA sequences were identified in either the race 2 or race 3 isolates. The RAPD markers hybridised to a 2 Mb chromosome in all races of the genetically distinct biotype A pathogen which infects other species of Stylosanthes as well as S. guianensis. The experiments indicate that RAPD analysis is a potentially useful tool for obtaining genotype-and chromosome-specific DNA probes in closely related isolates of one biotype of this fungal pathogen.

Transfer of a supernumerary chromosome between vegetatively incompatible biotypes of the fungus Colletotrichum gloeosporioides

Two biotypes (A and B) of Colletotrichum gloeosporioides infect the tropical legumes Stylosanthes spp. in Australia. These biotypes are asexual and vegetatively incompatible. However, field isolates of biotype B carrying a supernumerary 2-Mb chromosome, thought to originate from biotype A, have been reported previously. We tested the hypothesis that the 2-Mb chromosome could be transferred from biotype A to biotype B under laboratory conditions. Selectable marker genes conferring resistance to hygromycin and phleomycin were introduced into isolates of biotypes A and B, respectively. A transformant of biotype A, with the hygromycin resistance gene integrated on the 2-Mb chromosome, was cocultivated with phleomycin-resistant transformants of biotype B. Double antibiotic-resistant colonies were obtained from conidia of these mixed cultures at a frequency of approximately 10(-7). Molecular analysis using RFLPs, RAPDs, and electrophoretic karyotypes showed that these colonies contained the 2-Mb chromosome in a biotype B genetic background. In contrast, no double antibiotic colonies developed from conidia obtained from mixed cultures of phleomycin-resistant transformants of biotype B with biotype A transformants carrying the hygromycin resistance gene integrated in chromosomes >2 Mb in size. The results demonstrated that the 2-Mb chromosome was selectively transferred from biotype A to biotype B. The horizontal transfer of specific chromosomes across vegetative incompatibility barriers may explain the origin of supernumerary chromosomes in fungi.

Transfer of an autonomously replicating vector between vegetatively incompatible biotypes of Colletotrichum gloeosporioides

Previous research has indicated that biotypes A and B of Colletotrichum gloeosporioides that infect Stylosanthes spp. in Australia are asexual and vegetatively incompatible. Selectable marker genes conferring resistance either to hygromycin or phleomycin were introduced into isolates of these biotypes. Vectors conferring resistance to hygromycin and carrying telomeric sequences from Fusarium oxysporum replicated autonomously in C. gloeosporioides and gave frequencies of transformation 100-times higher than vectors that integrated into the genome. Monoconidial colonies resistant to both antibiotics were recovered when hygromycin-resistant biotype-A transformants carrying an autonomously replicating vector were paired in culture with a phleomycin-resistant biotype-B transformant carrying integrative vector sequences. Molecular analysis of double antibiotic-resistant progeny indicated that they contained the autonomous vector in a biotype-B genetic background, Results indicate that transfer of the autonomous vector had occurred from biotype A to biotype B, demonstrating the potential for transfer of genetic information between these biotypes.

Atividade fungicida de triazóis obtidos a partir de glicerol sobre Colletotrichum gloeosporioides

A antracnose é responsável por significativos danos no pós-colheita em frutos de mamão, ocasionando expressivas perdas aos produtores. Desta forma, objetivou-se avaliar a eficiência de novas moléculas fungicidas do grupo dos triazóis obtidas a partir de glicerol no manejo in vitro de Colletotrichum gloeosporioides. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 18x5+1 (17 moléculas inéditas de triazóis (T1 a T17), 1 fungicida comercial (tebuconazol), cinco concentrações e uma testemunha adicional, com cinco repetições por tratamento. Para avaliar o efeito das moléculas no crescimento micelial e esporulação do fungo foi empregado o método de incorporação de cada molécula ao meio de cultura batata-dextrose-ágar nas concentrações de 1, 10, 100, 500 e 1000 ppm. Com base nos resultados obtidos foi observada diferença significativa entre os tratamentos e concentrações tanto para o crescimento micelial quanto esporulação, sendo que quanto maior a concentração testada maior o efeito fungistático e/ou fungicida dos compostos triazólicos. O efeito inibitório dos fungicidas foi maior sobre a esporulação do que no crescimento micelial, sendo os triazóis T12 e T14 os mais eficazes, havendo inibição completa do patógeno a partir das concentrações de 414,17 e 393,79 ppm, respectivamente. É válido ressaltar que além destes os triazóis T11, T16 e T17 também apresentaram completa inibição do patógeno em concentrações acima de 500 ppm, merecendo ser também estudados em experimentos futuros in vivo. Os valores médios de ED50 e ED100 foram menores para esporulação em relação ao crescimento micelial, demonstrando a eficiência antiesporulante dos novos triazóis sintetizados a partir do glicerol. Assim, conclui-se que compostos com anel 1,2,3-triazol sintetizados a partir do glicerol possuem atividade fungicida sobre C. gloeosporioides, sendo promissores para o manejo da antracnose em mamoeiro.

Potencial fungitóxico do óleo essencial de Piper hispidinervum (pimenta longa) sobre os fungos fitopatogênicos Bipolaris sorokiniana, Fusarium oxysporum e Colletotrichum gloeosporioides

O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade fungicida in vitro do óleo essencial das folhas de Piper hispidinervum sobre Bipolaris sorokiniana, Fusarium oxysporum e Colletotrichum gloeosporioides. Para os ensaios biológicos, empregou-se o teste bioanalítico in vitro utilizando as concentrações de 100, 200, 500, 1000, 1500 e 2000 µg.mL-1 do óleo essencial. Estas foram incorporadas no meio de cultura BDA (batata-dextrose-ágar) para avaliação do crescimento ou inibição micelial. O delineamento estatístico utilizado foi o inteiramente casualizado, com quatro repetições. Na concentração de 200 µg.mL-1, observou-se uma inibição total do fitopatógeno Bipolaris sorokiniana enquanto que, para o Fusarium oxysporum e o Colletotrichum gloeosporioides esta ocorreu na concentração de 1000 µg.mL-1.