Transmission of Citrus leprosis virus C by Brevipalpus phoenicis (Geijskes) to Alternative Host Plants Found in Citrus Orchards

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Complete nucleotide sequence, genomic organization and phylogenetic analysis of Citrus leprosis virus cytoplasmic type

The complete nucleotide sequence of the genomic RNA 1 (8745 nt) and RNA 2 (4986 nt) of Citrus leprosis virus cytoplasmic type (CiLV-C) was determined using cloned cDNA. RNA 1 contains two open reading frames (ORFs), which correspond to 286 and 29 kDa proteins. The 286 kDa protein is a polyprotein putatively involved in virus replication, which contains four conserved domains: methyltransferase, protease, helicase and polymerase. RNA 2 contains four ORFs corresponding to 15, 61, 32 and 24 kDa proteins, respectively. The 32 kDa protein is apparently involved in cell-to-cell movement of the virus, but none of the other putative proteins exhibit any conserved domain. The 5' regions of the two genomic RNAs contain a 'cap' structure and poly(A) tails were identified in the 3'-terminals. Sequence analyses and searches for structural and non-structural protein similarities revealed conserved domains with members of the genera Furovirus, Bromovirus, Tobravirus and Tobamovirus, although phylogenetic analyses strongly suggest that CiLV-C is a member of a distinct, novel virus genus and family, and definitely demonstrate that it does not belong to the family Rhabdoviridae, as previously proposed. Based on these results it was proposed that Citrus leprosis virus be considered as the type member of a new genus of viruses, Cilevirus.

The influence of citrus rootstocks on the relationship between the mite Brevipalpus phoenicis and citrus leprosis disease

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

In vitro expression and antiserum production against the movement protein of Citrus leprosis virus C (CiLV-C)

Citrus leprosis, caused by Citrus leprosis virus C (CiLV-C), is currently considered the most important viral disease in the Brazilian citrus industry due to the high costs required for the chemical control of its vector, the mite Brevipalpus phoenicis. The pathogen induces a non-systemic infection and the disease is characterized by the appearance of localized lesions on citrus leaves, stems and fruits, premature fruit and leaf drop and dieback of stems. Attempts were made to promote in vitro expression of the putative cell-to-cell movement protein of CiLV-C in Escherichia coli and to produce a specific polyclonal antibody against this protein as a tool to investigate the virus-plant-vector relationship. The antibody reacted strongly with the homologous protein expressed in vitro by ELISA, but poorly with the native protein present in leaf lesion extracts from sweet orange caused by CiLV-C. Reactions from old lesions were more intense than those from young lesions. Western blot and in situ immunolocalization assays failed to detect the native protein. These results suggest low expression of the movement protein (MP) in host tissues. Moreover, it is possible that the conformation of the protein expressed in vitro and used to produce the antibody differs from that of the native MP, hindering a full recognition of the latter.

In vitro expression and antiserum production against the movement protein of Citrus leprosis virus C (CiLV-C)

Citrus leprosis, caused by Citrus leprosis virus C (CiLV-C), is currently considered the most important viral disease in the Brazilian citrus industry due to the high costs required for the chemical control of its vector, the mite Brevipalpus phoenicis. The pathogen induces a non-systemic infection and the disease is characterized by the appearance of localized lesions on citrus leaves, stems and fruits, premature fruit and leaf drop and dieback of stems. Attempts were made to promote in vitro expression of the putative cell-to-cell movement protein of CiLV-C in Escherichia coli and to produce a specific polyclonal antibody against this protein as a tool to investigate the virus-plant-vector relationship. The antibody reacted strongly with the homologous protein expressed in vitro by ELISA, but poorly with the native protein present in leaf lesion extracts from sweet orange caused by CiLV-C. Reactions from old lesions were more intense than those from young lesions. Western blot and in situ immunolocalization assays failed to detect the native protein. These results suggest low expression of the movement protein (MP) in host tissues. Moreover, it is possible that the conformation of the protein expressed in vitro and used to produce the antibody differs from that of the native MP, hindering a full recognition of the latter.

Acaricides used in conventional and organic citrus orchard: leprosis and phytoseiid mites population control

The citrus leprosis control in São Paulo state is performed exclusively by acaricides to control the vector mite, Brevipalpus phoenicis, which increases the production costs and may affect the beneficial organism's population. Therefore, the aim of this trial was to evaluate during four seasons, the effects of acaricides recommended to control the mite B. phoenicis in conventional and organic citrus over evolution of citrus leprosis and over phytoseiids' population. The experiment was installed in October of 2003 in a citrus orchard in Reginopolis city, state of São Paulo. The experimental design used randomized blocks, the dosages was expressed as mL c.p./100L of water and the treatments were the following: spirodiclofen (20 mL); cyhexatin (50 mL) (used in rotation), lime sulfur (4,000 mL) and control (without pesticide application). However, the rotation between spirodiclofen and cyhexatin began in September 2006. Prior to that time, only spirodiclofen had been used. Surveys were conducted every 15 days on the B. phoenicis, Iphiseioides zuluagai, and Euseius populations. The control level adopted by the B. phoenicis was 8.3%, and the pesticide applications were conducted using tractor-sprayers. During the 2007-08 seasons, 10 infected fallen fruits per plot were collected and the number of leprosis lesions was quantified by each fruit. By the end of the 2007-08 seasons, the productivity, harvest losses, the disease incidence and severity were evaluated. It was found that the lesions' location over the fruit is more important in determining its drop than the lesions' number. The more intense the mite infestation, the greater is the number of lesions, resulting in increased premature fruit drop. A strategy using acaricides spirodiclofen and cyhexatin in rotation promoted more efficient control of B. phoenicis compared to lime sulfur, resulting in greater productivity, lower fruit losses and severity levels. The lime sulfur applications reduced the mite population incidence below the control level; however it did not prevent the lesions' occurrence. The acaricides applicarevented adverse effects on phytoseiid population because there was a reduction of their density.

Technical and economic evaluation of different types of control of Brevipalpus phoenicis (Acari: Tenuipalpidae) in citrus leprosies management

The objective of this work was to evaluate the effect of acaricide applications and pruning of symptomatic branches in citrus leprosis management in Brazil. It was conducted in an orange plantation of the 'Pera' variety, grafted onto the 'Cleopatra' tangerine, in two seasons (2006-2007 and 2007-2008). The experimental design was randomized blocks in a factorial scheme consisting of the following factors: (A) acaricide, in three levels: spirodiclofen and cyhexatin applied in rotation, lime sulphur; no acaricides; (B) pruning to remove branches that showed symptoms of leprosis, with two levels: with pruning, without pruning. We carried out periodic assessments of Brevipalpus phoenicis (Geijskes) populations (vector of the leprosis virus), leprosis incidence and severity, fruit yield, and the economic feasibility of the applied strategies. Based on the results, we concluded that spirodiclofen and cyhexatin were more effective than lime sulphur in B. phoenicis control. Control with lime sulphur required more applications than spirodiclofen and cyhexatin in rotation, making it more expensive. Pruning of symptomatic branches used in isolation was not sufficiently effective to control leprosis and significantly increased control costs. Profits were higher when the control involved sprayings of spirodiclofen and cyhexatin in alternation, with or without pruning.

Resíduos de calda sulfocálcica sobre a eficiência de acaricidas no controle de Brevipalpus phoenicis

O objetivo do trabalho foi verificar a influência dos resíduos de calda sulfocálcica sobre a eficiência de acaricidas empregados no controle de Brevipalpus phoenicis. Inicialmente, o experimento foi instalado em um pomar de citros, em que foram selecionadas 10 plantas que continham frutos com verrugose. Realizou-se a aplicação de calda sulfocálcica (8g i.a. L-1 de água) em cinco plantas e as outras cinco plantas permaneceram sem aplicação de produto fitossanitário. Protegeram-se, com copos de plástico transparente de 500mL, 64 frutos nas plantas tratadas com calda e 64 frutos nas plantas não-tratadas, totalizando 128 frutos protegidos. Decorridos 30 dias da aplicação, os frutos foram colhidos e levados para o laboratório. Estes frutos foram parcialmente parafinados, deixando-se em cada fruto uma arena de 2,5cm de diâmetro com verrugose e sem parafina, delimitada com cola entomológica. em seguida, procedeu-se à aplicação sobre os frutos em Torre de Potter dos seguintes acaricidas nas concentrações expressas em mg de ingrediente ativo por litro de água: propargite a 720mg, óxido de fenbutatina a 400mg, cyhexatin a 250mg, azocyclotin a 250mg, fenpyroximate a 50mg, dicofol a 960mg e dinocap a 738mg e a testemunha sem aplicação de acaricida. Após 1, 7 e 16 dias da aplicação, transferiram-se para cada fruto 10 ácaros B. phoenicis para avaliar a mortalidade. Constatou-se que os resíduos de calda sulfocálcica não prejudicaram a eficiência dos acaricidas avaliados no controle de B. phoenicis.

Efeito da adição de óleos mineral e vegetal a acaricidas no controle do ácaro-da-leprose dos citros Brevipalpus phoenicis (Geijskes) (Acari: Tenuipalpide)

Com a finalidade de esclarecer os efeitos da adição de óleo vegetal e mineral aos acaricidas foi conduzido um ensaio de campo em 1994 no município de Viradouro, SP, utilizando-se de Assist, Triona e Natur'l Óleo, na dosagem de 500 mL por 100 litros de água, adicionados aos acaricidas: pyridaben nas formulações 200 CE e 750 PM, nas dosagens de 75 mL e 20 g; propargite 720 CE a 100 mL; óxido de fenbutatina 500 SC a 80 mL e cyhexatin 500 PM a 50 g. O delineamento estatístico adotado foi o de blocos casualizados. As aplicações foram feitas com pulverizador tipo pistola. Após a preparação da calda, foi determinado o pH. Empregou-se máquina de varredura e microscópio estereoscópico para as avaliações da população acarina. A adição de Natur'l Óleo pode afetar negativamente a eficiência do pyridaben 200 CE e 750 PM e cyhexatin 500 PM, no controle do ácaro-da-leprose. Triona e Assist não afetaram as eficiências dos acaricidas testados. Pelo índice de iodo, mediu-se o grau de insaturação das misturas dos acaricidas com Natur'l Óleo, concluindo-se que houve incorporação das moléculas dos acaricidas pelas ligações insaturadas do óleo; porém, isto não explica o diferente comportamento dos produtos no controle do ácaro da leprose dos citros.

Aspectos biológicos do ácaro Brevipalpus phoenicis vetor da leprose dos citros em plantas de buva (Conyza canadensis)

O ácaro Brevipalpus phoenicis, vetor da leprose dos citros, é uma espécie polífaga que tem ampla gama de hospedeiros alternativos nos pomares cítricos, nos quais se pode manter e/ou incrementar suas populações. O objetivo deste trabalho foi estudar a sobrevivência, a oviposição e o modo de alimentação do ácaro B. phoenicis em plantas de buva (Conyza canadensis) com diferentes tamanhos. Para avaliação da sobrevivência e oviposição do ácaro B. phoenicis, foi utilizado o delineamento estatístico inteiramente casualizado, com cinco tratamentos e doze repetições. Os tratamentos estudados foram: (1) secções de caules de plantas menores que 20 cm, (2) entre 21 e 50 cm, (3) entre 51 e 100 cm e (4) maiores que 101 cm de altura; e (5) secções de ramos de laranja. Dez fêmeas adultas de B. phoenicis, procedentes de uma criação-estoque, foram transferidas para cada secção de caule de buva e ramos de citros como testemunha. Avaliou-se a sobrevivência e a oviposição dos ácaros até 120 horas após a transferência. Alguns aspectos comportamentais do ácaro B. phoenicis foram fotomicrografados, utilizando-se microscópico eletrônico de varredura. Verificou-se que as plantas de maior altura de buva foram mais favoráveis à sobrevivência do ácaro B. phoenicis do que as de menor tamanho. Contudo, a quantidade de ovos postos pelo ácaro não diferiu em relação à altura das plantas de buva. Com base nas fotomicrografias, constatou-se a preferência do ácaro B. phoenicis por se alimentar na base dos tricomas presentes na superfície do caule da planta de buva, justificado, possivelmente, pela maior turgescência das células encontradas nessa região da planta. Esses resultados reforçam a importância do manejo de buva nos pomares cítricos, pois a sua presença no campo pode favorecer a sobrevivência e o desenvolvimento do ácaro B. phoenicis, servindo, portanto, como hospedeira alternativa, o que pode contribuir para a disseminação do ácaro e, consequentemente, da leprose nos pomares cítricos.

Toxicidade diferencial de produtos à base de abamectina ao ácaro Brevipalpus phoenicis (Geijskes, 1939) (Acari: Tenuipalpidae) em citros

O ácaro Brevipalpus phoenicis é uma das principais pragas dos citros por ser vetor do Citrus Leprosis Virus (CiLV), agente causal da leprose, uma das mais graves doenças da citricultura. Objetivou-se avaliar o efeito tóxico de produtos à base de abamectina sobre o ácaro B. phoenicis. Foram realizados um experimento de ação direta e três de ação residual no Laboratório de Acarologia do Departamento de Proteção de Plantas (Fitossanidade) da FCAV - UNESP, Jaboticabal-SP. O delineamento adotado nos bioensaios foi o inteiramente casualizado, onde 10 tratamentos foram repetidos 7 vezes, sendo cada repetição composta por um fruto de laranja. Os tratamentos estudados (mL p.c./100 L de água) foram: Acaramik a 20; 30; 40 e 50 mL; Vertimec a 30 e 40 mL; Abamectin Nortox a 30 e 40 mL; Tricofol a 77 mL e uma testemunha sem aplicação. Utilizaram-se frutos com presença de verrugose, que foram lavados e parcialmente parafinados, deixando-se uma área sem parafina, que foi circundada com cola entomológica para contenção dos ácaros. Transferiram-se 20 ácaros adultos B. phoenicis para cada fruto. No bioensaio de ação direta, a transferência foi realizada antes das aplicações e, nos bioensaios de ação residual, aos 5; 10 e 15 dias após a aplicação dos produtos. A aplicação dos produtos sobre os frutos foi realizada em Torre de Potter. Os resultados obtidos nos bioensaios evidenciaram que os melhores tratamentos foram: Tricofol a 77 mL, Acaramik a 40 e 50 mL e Vertimec a 40 mL. de forma geral, os produtos testados podem ser utilizados no controle do ácaro B. phoenicis.

Acaricidas utilizados na citricultura convencional e orgânica: manejo da leprose e populações de ácaros fitoseídeos

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Efeito da adição de óleos ao acaricida cyhexatin sobre o ácaro Brevipalpus phoenicis e na retenção de calda por folhas de citros

A adição de óleos à calda de pulverização, muitas vezes, é utilizada a campo sem o adequado conhecimento sobre a absorção do produto fitossanitário pelo alvo, retenção de calda e até mesmo sobre a praga e a cultura. O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da adição de óleos ao acaricida cyhexatin sobre o ácaro Brevipalpus phoenicis e na retenção de calda por folhas de citros. Avaliou-se a mortalidade de ácaros, utilizando-se de frutos de laranja com uma arena circundada com cola entomológica para confinar os ácaros. Adotou-se o delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial, constituído pelos fatores: duas formulações de cyhexatin (WG e SC), dois tipos de óleo (mineral e vegetal) e duas concentrações dos óleos (0,5 e 1,0%), e mais dois tratamentos adicionais (acaricidas não adicionados de óleo) e uma testemunha sem aplicação. A aplicação dos produtos foi realizada sobre frutos de laranja até além do ponto de escorrimento. Logo após a aplicação, transferiram-se 10 ácaros B. phoenicis para cada fruto.A contagem dos ácaros vivos, mortos e retidos na barreira adesiva foi realizada um dia após a aplicação. Para a determinação da quantidade de calda retida, utilizaram-se folhas de laranjeira, que foram pulverizadas até além do ponto de escorrimento, adotando-se os mesmos tratamentos e o delineamento estatístico mencionados para a avaliação da mortalidade de ácaros, com exceção da testemunha sem aplicação. Determinou-se a massa de líquido retido após a aplicação dos produtos por folha, com auxílio de balança de precisão. Verificou-se que um dia após a aplicação dos produtos, todos os tratamentos apresentaram mortalidade de B. phoenicis acima de 99%. Dessa forma, a adição de óleo, seja mineral, seja vegetal, ao acaricida cyhexatin não afetou a eficácia biológica deste acaricida nas formulações SC e WG. A maior fuga de B. phoenicis para a barreira de cola foi verificada nos tratamentos com adição de óleos, em comparação ao cyhexatin aplicado isoladamente. A adição de óleo, seja mineral, seja vegetal, ao cyhexatin na calda de pulverização reduziu a quantidade máxima de líquido retido pelas folhas de citros, podendo contribuir para a redução da quantidade de calda necessária para uma boa cobertura da planta.

Toxicidade diferencial de agrotóxicos utilizados em citros para Neoseiulus californicus, Euseius concordis e Brevipalpus phoenicis

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Influência da dureza e potencial hidrogeniônico da calda de pulverização sobre o controle do ácaro-da-leprose em frutos de laranja doce

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)