996 resultados para Citotoxidade de medição celular Teses
Resumo:
P. aeruginosa um importante agente de infeces relacionadas assistncia em sade. Habitualmente, o estabelecimento de infeces agudas precedido pela colonizao das mucosas dos pacientes. No se sabe, porm, se os processos infecciosos so causados pelas prprias cepas bacterianas colonizadoras ou por outras com que os pacientes entrem em contato, dotadas ou no de maior potencial de virulncia ou de resistncia a antimicrobianos que as tornem mais eficientes como agentes infecciosos. Assim, este estudo teve como objetivos i) investigar a existncia de potenciais diferenas entre amostras de P. aeruginosa que causaram apenas colonizao e aquelas responsveis por infeco, isoladas de um mesmo paciente, quanto a seus fentipos de virulncia e de no susceptibilidade a antimicrobiamos; ii) pesquisar a existncia de associao entre caractersticas dos paciente, incluindo o tipo de evoluo clnica, com as demais variveis estudadas. No estudo foram includos 21 pacientes que desenvolveram infeco por P. aeruginosa durante sua internao no Centro de Terapia Intensiva do Hospital Universitrio Clementino Fraga Filho, entre abril de 2007 e abril de 2008. De cada paciente foram selecionadas duas amostras bacterianas: a primeira isolada durante o episdio de infeco e a amostra colonizadora obtida imediatamente antes da ocorrncia da infeco. As amostras selecionadas foram estudadas quanto a i) expresso de trs mecanismos de virulncia (citotoxicidade, aderncia a clulas epiteliais respiratrias humanas e capacidade de formao de biofilme); ii) presena de genes codificadores das protenas efetoras do sistema de secreo do tipo 3 (SST3 - exoS, exoT, exoU e exoY); iii) perfil de susceptibilidade a antimicrobianos, iv) perfil de fragmentao do DNA cromossmico por eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). As amostras bacterianas obtidas de infeces agudas foram significativamente mais citotxicas que aquelas obtidas de colonizao. Embora sem diferena estatstica, a citotoxicidade das amostras que causaram infeco em pacientes que evoluram para bito foi superior citotoxicidade das amostras de pacientes que sobreviveram. O gene que codifica a toxina ExoU foi detectado em 16 amostras (38%), sendo nove de colonizao e sete de infeco. No houve diferena significativa entre as amostras de colonizao e infeco quanto aderncia, produo de biofilme, expresso dos genes do SST3 e no-susceptibilidade s diferentes classes de antimicrobianos. Tambm no foi encontrada associao entre a no-susceptibilidade quinolona, ou a outras classes de antimicrobianos, e a presena do gene exoU. As 42 amostras de P. aeruginosa estudadas foram includas em 20 gentipos. Em 10 deles foi detectado o gene exoU. Amostras de um mesmo gentipo foram uniformes quanto expresso dos genes do SST3 e a no-susceptibilidade aos antimicrobianos, mas no quanto s outras variveis estudadas. Em apenas sete pacientes (33,3%), as amostras de colonizao e de infeco pertenciam ao mesmo gentipo. Assim, nesse estudo, o estabelecimento do processo infeccioso resultou no da perda do equilbrio estabelecido entre os mecanismos de agresso das amostras colonizadoras e os de defesa do hospedeiro e sim da introduo de nova cepa bacteriana no organismo hospedeiro, cepa esta dotada de maior potencial citotxico.
Resumo:
As <i>Aeromonas</i> so consideradas patgenos em potenciais para o homem e animais e esto amplamente distribudas no ambiente sendo a gua e os alimentos importantes veculos de transmisso. Muitos estudos tm demonstrado que a patologia causada pela infeco por <i>Aeromonas</i> complexa e envolvem inmeros fatores de virulncia, dentre eles a aderncia, invaso, enterotoxinas, hemolisinas, exoenzimas, siderforos, flagelos, formao de biofilme e mecanismos de secreo. No presente estudo, analisamos os mecanismos de patognese mediados por <i>A. caviae</i> e <i>A. hydrophila</i>, avaliando a participao desses microrganismos nos processos de adeso, invaso, persistncia intracelular e citotoxidade celular. Foram utilizados ensaios quantitativos <i>in vitro</i> para testar associao, invaso e persistncia intracelular em linhagens celulares HEp-2 e/ou T84. A interao de tecidos intestinais de coelho cultivados <i>in vitro</i> (IVOC) com trs cepas de <i>A. caviae</i> originrias de fezes diarricas tambm foi avaliada. Observamos que 10 (62,5%) das 16 cepas de <i>Aeromonas</i> spp. de diferentes origens, submetidas aos testes de invaso quantitativos foram capazes de invadir clulas HEp-2 e T84 em 6 horas de incubao. As cepas positivas nos testes de invaso foram submetidas ao teste quantitativo de persistncia em clulas HEp-2 e sobreviveram no ambiente intracelular por 48 e/ou 72 horas sem multiplicao. A interao de trs cepas de <i>A. caviae</i> com a mucosa intestinal de coelho <i>ex vivo</i> resultou em aderncia, produo de muco e alteraes como, intensa vacuolizao e drstica desorganizao estrutural que levaram a destruio das microvilosidades intestinais. Este estudo demonstrou que subconjuntos de cepas de <i>A. caviae</i> e <i>A. hydrophila</i> de diversas origens, foram capazes de invadir, persistir ou destruir linhagens celulares <i>in vitro</i>. Nosso estudo tambm evidenciou que cepas de <i>A. caviae</i> causaram expressivas alteraes morfolgicas que resultaram na destruio de epitlios intestinais de coelho <i>ex vivo</i>. Finalmente, nossos resultados contriburam para reforar o potencial patognico de cepas de <i>Aeromonas</i>, em especial, as de origem vegetal e clnica.
Resumo:
As estatinas so frmacos inibidores competitivos da enzima hidroxi-3-metil-glutaril Coenzima A (HMGCoA) redutase, amplamente utilizados para o controle da hipercolesterolemia total e, em especial, para a reduo dos nveis sricos de LDLc (Low Density Lipoprotein cholesterol). Alm do efeito primrio, esses frmacos apresentam vrios efeitos secundrios, chamados de efeitos pleiotrpicos, envolvendo atividade anti-inflamatria, antitumoral e antiparasitria. Para o desenvolvimento de inovaes na rea de qumica medicinal imprescindvel avaliar o risco de efeitos adversos para sade ou, em outras palavras, a segurana teraputica do novo produto nas condies propostas de uso. Nesse sentido, o objetivo desse trabalho foi investigar a genotoxicidade de quatro anlogos inibidores da biossntese de lipdios, da classe das estatinas, em modelos experimentais in vitro, testados previamente contra o clone W2 de Plasmodium falciparum a fim de se obter o IC50 dessas molculas frente ao patgeno. Foram desenvolvidas quatro novas molculas (PCSR02.001, PCSR09.001, PCSR08.002 e PCSR10.002). Para a avaliao da toxicidade, foram realizados o teste de mutagenicidade bacteriana (teste de Ames), o ensaio de viabilidade celular utilizando o reagente WST-1 e o ensaio de induo de microncleos, ambos utilizando uma linhagem ovariana (CHO-K1) e uma linhagem heptica (HepG2). Levando em conta o fato de nenhuma das amostras ter induzido efeitos mutagnicos nas linhagens de S. enterica sorovar Typhimurium, e PCSR10.002 ter apresentado citotoxicidade sugere-se ento que este composto seja o mais txico. Comparativamente, PCSR10.002 foi mais genotxico e citotxico para a linhagem CHO-K1 do que para a linhagem HepG2. PCSR02.001 apresentou elevado potencial genotxico para clulas ovarianas, mas no foi capaz de induzir a formao de microncleos em clulas hepticas, apresentando, portanto um perfil similar ao observado em PCSR10.002. Assim como a atorvastatina, PCSR09.001 apresentou elevado potencial pr-apopttico para a linhagem de hepatcitos. J PCSR08.002, apresentou aumento na apoptose de CHO-K1. A induo de apoptose no necessariamente um evento negativo, j que pouco lesiva e responsvel pela eliminao de clulas danificadas. Porm, as respostas de apoptose induzidas por esse composto foram muito inferiores quelas induzidas pela atorvastatina (cerca de 4 vezes menor que a atorvastatina). PCSR08.002 foi aquele se mostrou menos txico e essa amostra foi a que teve menor risco relativo, em uma anlise global das respostas de citotoxicidade e no demonstrou ter potencial genotxico para as linhagens utilizadas nesse estudo. Conclui-se, portanto, que a anlise da atividade toxicolgica utilizando modelos experimentais in vitro dessas estatinas constitui um importante passo para o estabelecimento de novos candidatos frmacos com maior segurana.
Resumo:
A utilizao de testes de biocompatibilidade de materiais odontolgicos necessria para avaliar a segurana dos mesmos. Listerine um enxaguatrio comercial usado para a preveno e tratamento da gengivite. O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos citotxico e genotxico do Listerine em culturas de Escherichia coli e plasmdios. Na avaliao da citotoxicidade, culturas de E. coli AB1157 e BW9091 foram incubadas com Listerine (10, 50 e 100%) e o crescimento acompanhado pela densidade ptica (DO) em 600nm por 7 horas(h). Para avaliar a sobrevivncia, culturas de E. coli AB1157, em fase exponencial, foram centrifugadas, ressuspensas em soluo salina (NaCl 0,9%) e incubadas (1h, 37C) com Listerine (10, 50, 100%, 1h, 37 C). Alquotas foram semeadas em placas de Petri contendo meio nutritivo nos tempos 0, 30 e 60 minutos e armazenadas em estufa bacteriolgica (18h, 37 C). As unidades formadoras de colnias contadas e as fraes de sobrevivncia (FS) calculadas. Como controles, culturas tratadas salina ou etanol (21,6%). Para genotoxicidade, plasmdios pBSK foram incubados com Listerine (10, 50 e 100%) e com etanol (2,16%, 10,8% e 21,6%), associados ou no ao SnCl2(200g/mL, 30 minutos, temperatura ambiente), realizada eletroforese em gel de agarose (0,8%, 8V/cm), observados por transiluminao UV e obtido o percentual da forma superespiralada (%SE). Os resultados indicam que o enxaguatrio Listerine foi capaz de inibir o crescimento bacteriano de culturas de E. coli na maior concentrao utilizada. O enxaguatrio, na maior concentrao, diminuiu a sobrevivncia das culturas bacterianas testadas. Listerine no modificou o perfil eletrofortico do plasmdios, indicando ausncia de efeito genotxico e tambm foi capaz de proteger os plamdios da ao do SnCl2. Alm disso, o etanol, na mesma concentrao presente no Listerine, no alterou o perfil eletrofortico dos plasmdios, sendo capaz de proteg-lo da ao do SnCl2. Os resultados indicaram que o Listerine apresentou efeito citotxico em culturas de E. coli e ausncia de potencial genotxico em plamdios, sendo capaz de proteg-los, bem como o etanol, dos efeitos genotxicos do SnCl2.
Resumo:
2015
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Corynebacterium diphtheriae um importante patgeno humano e agente causal da difteria. Embora seja observada uma reduo mundial no nmero de casos da doena, a difteria permanece endmica em muitos pases e surtos so esporadicamente notificados. No Brasil, o ltimo surto ocorreu no estado no Maranho e revelou mudanas em aspectos clnico-epidemiolgicos da doena. Diferentemente da maioria das cepas de difteria brasileiras, que pertencem ao biovar mitis, nesse surto dois diferentes pulsotipos de C. diphtheriae biovar intermedius foram isolados. Alm disso, sinais patognomnicos da doena no foram relatados em parte dos casos. C. diphtheriae tambm vem sendo relacionado com quadros de infeces invasivas, apesar de ser reconhecido como patgeno tipicamente extracelular. Em conjunto, estas mudanas no perfil das infeces por C. diphtheriae sugerem a existncia de outros fatores de virulncia alm da produo da toxina diftrica. Neste sentindo, foram realizadas anlises de tipagem molecular e de genmica comparativa para avaliar a diversidade gentica e o potencial de virulncia de cepas de C. diphtheriae isoladas de difteria clssica e infeces invasivas. Os resultados obtidos demonstram a circulao de diferentes clones invasores no Brasil. Alm disso, revelaram diferenas marcantes na presena e na composio de ilhas de patogenicidade entre as amostras, bem como nos genes sob regulao do DtxR e nas sequncias dos corinefagos integradas ao cromossomo bacteriano. Uma vez que o potencial invasor bacteriano e a persistncia no ambiente podem estar relacionados tolerncia ao estresse oxidativo, foram procurados nos genomas sequenciados, genes possivelmente envolvidos neste processo. Dentre estes, os genes DIP0906, predito como gene de resistncia ao oxidante telurito (TeO32-), e DIP1421, codificador do regulador transcricional OxyR, foram caracterizados funcionalmente e tiveram seus papis na patogenicidade investigados. Ensaios in vivo utilizando o nematdeo Caenorhabditis elegans demonstraram que ambos so importantes para a virulncia de C. diphtheriae. Alm da resistncia ao TeO32, DIP0906 parece contribuir para a resistncia ao perxido de hidrognio (H2O2) e para a viabilidade no interior de clulas respiratrias humanas. J OxyR, alm de controlar negativamente a resposta ao H2O2, parece estar envolvido com a ligao de C. diphtheriae a protenas plasmticas e de matriz extracelular. Adicionalmente, foi investigada resistncia e a capacidade de adaptao de C. diphtheriae frente a agentes oxidantes, atravs da induo de resposta adaptativa e/ou resistncia cruzada e da formao de biofilme. As cepas de C. diphtheriae apresentaram diferentes nveis de resistncia e um comportamento heterogneo na presena dos agentes oxidantes, o que sugere a existncia de diferentes estratgias de sobrevivncia e adaptao de C. diphtheriae nas condies de estresse oxidativo.
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Tem sido descrito que o acmulo de mutaes em proto-oncogenes e genes supressores de tumor contribui para o direcionamento da clula carcinognese. Na maioria dos casos de cncer, as clulas apresentam proliferao descontrolada devido a alteraes na expresso e/ou mutaes de ciclinas, quinases dependentes de ciclinas e/ou inibidores do ciclo celular. Os tumores slidos figuram entre o tipo de cncer mais incidente no mundo, sendo a quimioterapia e/ou hormnio-terapia, radioterapia e cirurgia os tratamentos mais indicados para estes tipos de tumores. Entretanto, o tratamento quimioterpico apresenta diversos efeitos colaterais e muitas vezes ineficaz. Portanto, a busca por novas molculas capazes de conter a proliferao destas clulas e com baixa toxicidade para o organismo se faz necessrio. Este trabalho teve por objetivo avaliar a ao antitumoral in vitro de um novo composto sinttico, a pterocarpanoquinona LQB118, sobre algumas linhagens tumorais humanas de alta prevalncia e estudar alguns dos seus mecanismos de ao. As linhagens tumorais estudadas neste trabalho foram os adenocarcinomas de mama (MCF7) e prstata (PC-3), e carcinoma de pulmo (A549). A citotoxicidade foi avaliada pelo ensaio do MTT e a proliferao celular pela contagem de clulas vivas (excluso do corante azul de tripan) e anlise do ciclo celular (citometria de fluxo). A expresso gnica foi avaliada por RT-PCR e a apoptose foi avaliada por condensao da cromatina (microscopia de fluorescncia-DAPI), fragmentao de DNA (eletroforese) e marcao com anexina V (citometria de fluxo). Das linhagens tumorais testadas, a de prstata (PC3) foi a que se mostrou mais sensvel ao LQB 118, e em funo deste resultado, os demais experimentos foram realizados com esta linhagem tumoral. O efeito citotxico do LQB 118 se mostrou tempo e concentrao dependente. Esta substncia inibiu a proliferao celular e prejudicou a progresso do ciclo celular, acumulando clulas nas fases S e G2/M. Buscando esclarecer os mecanismos desta ao antitumoral, demonstrou-se que o LQB 118 inibe a expresso do mRNA do fator de transcrio c-Myc e das ciclinas D1 e B1, e induz a apoptose de tais clulas tumorais. Em suma, o LQB 118 capaz de inibir a proliferao das clulas tumorais de prstata, alterando a expresso do mRNA de alguns genes reguladores do ciclo celular, resultando em interrupo do ciclo celular e induo de apoptose, indicando este composto como um potencial candidato a futuro medicamento no tratamento do cncer de prstata.
Resumo:
Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
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Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP)
Resumo:
Bacillus thuringiensis (Bt), is an environmental Gram-positive spore-forming bacterium that produces crystalline parasporal protein (Cry) during sporulation. The inclusions often exhibit strong and specific insecticidal activity, making Bt an agent for agricultural controlling insects pest, mites, protozoa and nematodes. Recent studies reported that some of these Crys do not show cytotoxicity against insects but they are capable to kill some human and animal cancer cells. These proteins were denominated parasporins (PS). However, antitumor activity of Bt parasporin on the development of murine colorectal cancer (CT-26), are not well studies and these are no reports on the in vivo effect of these proteins. Thus, the present study evaluated the in vitro and in vivo anti-tumoral activity of Bt parasporin against the murine colorectal cancer line CT-26. Therefore, Balb/c mice were s.c. inoculated with CT-26 cells and weekly treated with parasporin (i.p.) pre-activated by enzymatic digestion with trypsin or proteinase K. Our results have shown, for the first time, that despite the anti-tumor activity in vitro, parasporin crystals couldnt combat tumor growth in vivo. Instead, this protein was highly toxic, affecting the liver and spleen, with possible effect on other organs, decreasing the survival of treated animals. The results indicate the need for studies to better detoxification or manipulation of parasporin for therapeutic use and new studies for analysis of toxicological effects of repetitive exposure of farmers to this toxin
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Ps-graduao em Biopatologia Bucal - ICT
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Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES)
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This dissertation has the purpose to present a portable device named PlugData MG100G, equipped with a cellular module, to analyze the radiofrequency coverage in a GSM network situated in Joo Pessoa city, state of Paraba, at four distinct regions. The equipment, originally, was developed to be used in fixed environments, so it was adapted so that it could be used in conditions of mobility. From the Mobile Measurement Reports (MMRs) RF coverage and the handover process are analyzed. The MMRs enable the identification of the serving cell and the list of the closest neighboring cells monitored by the mobile. This work analyses only data referent to the serving cell and the two closest neighboring cells. Inter-cell and intra-cell handovers are identified. The frequency planning and quality of service offered by the network related to the regions are discussed as well
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Se presentan los porcentajes de germinacin de 12 especies representativas de la vegetacin de ribera y matorral del ecosistema del ro Tinto en diferentes condiciones de pH (5,4; 3,2; 1,8 y agua del ro Tinto). Se observan distintas respuestas de germinacin en las especies estudiadas, encontrando los mayores porcentajes de germinacin en Nerium oleander y Salicornia ramosissima. Dada la respuesta positiva de estas dos especies, se discute su utilidad para la restauracin de los territorios afectados en los alrededores del ro Tinto. Para el resto de especies, se observan bajos porcentajes de germinacin y en la mayora de las especies analizadas el pH no influye en la germinacin. Hay muchos factores que limitan la germinacin de las semillas tales como la latencia que requiere de un pre-tratamiento (de fro o de calor), variacin en las condiciones naturales que son difciles de recrear en el laboratorio o la baja calidad de las semillas.
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Este estudo tem como propsito analisar a eficcia de diferentes formulaes de antisspticos bucais presentes no mercado brasileiro sobre um monobiofilme de Streptococcus mutans (ATCC 25175). O experimento foi realizado expondo as amostras s formulaes por 1 minuto. Os biofilmes foram desenvolvidos semeando as cepas em tubos de ensaio contendo meio de cultura TSB acrescido de 1% de sacarose por 7 dias, com trocas de meio a cada 48 horas. A amostra foi dividida em grupos: monobiofilme tratado com soluo contendo clorexidina (controle positivo); monobiofilme tratado com soluo contendo leos essenciais; monobiofilme tratado com soluo contendo triclosan; biofilme tratado com soluo contendo triclosan acrescido de cloreto de zinco; monobiofilme tratado com soluo contendo cloreto de cetilpiridnio; monobiofilme tratado com soluo salina fisiolgica estril (controle negativo). Para a anlise do efeito ps antibiotico, as cepas foram removidas e plaqueadas imediatamente aps a exposio e aps 2 horas de crescimento em meio TSB. A mdia do crescimento bacteriano foi convertida em unidades formadoras de colnia (UFC) para anlise. Para analizar a capacidade de recolonizao as cepas foram inoculadas em TSB acrescido de sacarose por 48hs. os valores submetidos anlise estatstica pelo teste t-student e ANOVA com modificao de Tukey e Dunnett. Os resultados nos permitem concluir que: todos os grupos tratados com antisspticos apresentaram reduo das concentraes de microrganismos viveis em relao ao controle negativo, nos dois tempos analizados. As formulaes contendo triclosan e leos essenciais no apresentaram diferena nem relao ao controle positivo e nem entre eles mesmos, tambm nos dois tempos. As formulaes de antisspticos, contendo clorexidina, leos essenciais, triclosan podem alterar a capacidade de recolonizao do monobiofilme, neste modelo.
