Quantification of Listeria monocytogenes in minimally processed leafy vegetables using a combined method based on enrichment and 16S rRNA real-time PCR

Modern lifestyle markedly changed eating habits worldwide, with an increasing demand for ready-to-eat foods, such as minimally processed fruits and leafy greens. Packaging and storage conditions of those products may favor the growth of psychrotrophic bacteria, including the pathogen Listeria monocytogenes. In this work, minimally processed leafy vegetables samples (n = 162) from retail market from Ribeirao Preto, Sao Paulo, Brazil, were tested for the presence or absence of Listeria spp. by the immunoassay Listeria Rapid Test, Oxoid. Two L. monocytogenes positive and six artificially contaminated samples of minimally processed leafy vegetables were evaluated by the Most Probable Number (MPN) with detection by classical culture method and also culture method combined with real-time PCR (RTi-PCR) for 16S rRNA genes of L monocytogenes. Positive MPN enrichment tubes were analyzed by RTi-PCR with primers specific for L. monocytogenes using the commercial preparation ABSOLUTET (TM) QPCR SYBR (R) Green Mix (ABgene, UK). Real-time PCR assay presented good exclusivity and inclusivity results and no statistical significant difference was found in comparison with the conventional culture method (p < 0.05). Moreover, RTi-PCR was fist and easy to perform, with MPN results obtained in ca. 48 h for RTi-PCR in comparison to 7 days for conventional method. (C) 2009 Elsevier Ltd. All rights reserved.

Exhumation history of the NW Indian Himalaya revealed by fission track and 40Ar/39Ar ages

New fission track and Ar/Ar geochronological data provide time constraints on the exhumation history of the Himalayan nappes in the Mandi (Beas valley) - Tso Monad transect of the NW Indian Himalaya. Results from this and previous studies suggest that the SW-directed North Himalayan nappes were emplaced by detachment from the underthrusted upper Indian crust by 55 Ma and metamorphosed by ca. 48-40 Ma. The nappe stack was subsequently exhumed to shallow upper crustal depths (<10 km) by 40-30 Ma in the Tso Monad dome (northern section of the transect) and by 30-20 Ma close to frontal thrusts in the Baralacha La region. From the Oligocene to the present, exhumation continued slowly.

Femur biometry, densitometry and chemical composition from Moxoto goats supplemented with concentrate in a semiarid region

The aim of study was to investigate if different intake levels of concentrate (supplementation levels) would have an influence on chemical composition, biometric aspects and bone mineral density (BMD) of femurs from Moxoto growing goats in the Brazilian semiarid region. Thirty-two castrated kids (15.69 +/- 0.78 kg initial BW) were used allocated randomly to one of the four levels of supplementation (SL) (treatments groups: 0: 5; 10 and 15 g/kg BW). When the animals of treatment group 15 g/kg BW reached 25 kg BW, the animals in the others treatments groups were also slaughtered. The increase SL resulted in linear increase (P<0.001) in the performance of animals as well as in fresh and dry weight of the femur and decrease of relative weight of the femur. The dry matter contents (g/kg) of femur increased linearly, however, the amounts of MM, ether extract, Ca, P. Mg, Na and K were not affected by the treatments. The values found in this study ranged from 134.84 to 155.90g of Ca, 48.14 to 55.95g of P. 1.69 to 1.87g of Mg, 2.87 to 3.24g of Na and 1.42 to 1.61 g of K/kg of bone in natura for animals with smaller and higher slaughter weight, respectively. The biometric and densitometric variables increased linearly with increasing treatments, except for the thickness of the sponge layer of the proximal and distal epiphysis and BMD measured in the distal epiphysis. The supplementation with concentrate did not affect the chemical composition of the femur, although it has positively influenced the structure and the bone mineral density. A BMD estimated via radiographic bone aluminum equivalent did not have correspondence with bone mineral content measured chemically. (C) 2011 Elsevier BM. All rights reserved.

Biologia de Iphiseiodes zuluagai Denmark & Muma (Acari: Phytoseiidae)

Iphiseiodes zuluagai Denmark & Muma (Acari: Phytoseiidae) é um ácaro predador comumente encontrado em plantas cítricas (Citrus spp.). Alimentado com pólen de mamoneira (Ricinus communis ) e a 25 ± 2°C, 70 ± 10% de UR e 14 horas de fotofase, a maioria das larvas eclodiu entre 12 e 24 horas. A duração do estágio de larva foi freqüentemente em torno de 24 horas, e a duração das fases de protoninfa e deutoninfa entre 24 e 48 horas. O ciclo de ovo a adulto durou 5 a 6 dias. A estimativa da capacidade inata de crescimento da população (r m) foi 0,122 fêmeas/ fêmea/ dia; a duração média de uma geração (T) 18,7 dias; a taxa líquida de reprodução (Ro) 9,82 fêmeas/ fêmea e a razão finita de aumento (1)1,13.

Isolierung, Reinigung und Expression zentraler Enzyme der Biosynthese des pflanzlichen Antiarrhythmikums Ajmalin

Zusammenfassung In der vorliegenden Arbeit wurden im Zuge derAjmalinbiosynthese in Rauvolfia serpentina die NADPH2abhängigen Reduktionsschritte des Alkaloids Vomilenin zu 17O Acetylnorajmalin genauer untersucht.Dabei konnte erstmals die exakte Reaktionsreihenfolgeaufgedeckt und die daran beteiligten Enzyme ausPflanzenzellsuspensionskulturen isoliert und aufgereinigtwerden. Die ausgearbeiteten, optimierten Reinigungsprotokolleführten in wenigen Stufen gezielt zu den voneinandergetrennten Reduktase Fraktionen. Durch die Trennung derReduktase Aktivitäten war der Grundstein gelegt, dasZwischenprodukt der Reaktion anzureichern und mitverschiedenen analytischen Verfahren als 2?-(R)-1.2Dihydrovomilenin zu identifizieren. Die daraufhin vergebenenBezeichnungen Vomilenin Reduktase (EC.1.5.1.32) und 1.2Dihydrovomilenin Reduktase (EC.1.3.1.73) zielen auf dasumzusetzende Substrat ab.Für die Vomilenin Reduktase konnte eine 4 stufige Reinigungüber (NH4)2SO4 Fällung, Anionen-austauschchromatographie mitSOURCE 30Q, Hydrophobe Interaktionschromatographie an SOURCE15Phe und Affinitätschromatographie mit 2’,5’ ADP Sepharoseausgearbeitet werden. Hierbei konnte die 1.2Dihydrovomilenin Reduktase schon nach dem erstensäulenchromatogra-phischen Schritt (S 30Q) abgetrenntwerden. Das am Ende der Proteinreinigung angefertigte SDSGel zeigte nur noch 3 Banden, von denen die beiden bei ca.40 und 43 kDa gelegenen Banden mit dem Aktivitätsverlaufder Vomilenin Reduktase korrelierten. Diese wurden einempartiellen Verdau mit der Endoproteinase LysC unterworfen,wobei jeweils 2 Spaltpeptide erhalten werden konnten.Die 1.2 Dihydrovomilenin Reduktase Reinigung umfaßte 6Reinigungsschritte mit (NH4)2SO4-Fällung, SOURCE 30QAnionenaustauschchromatographie, HydroxylapatitChromatographie, 2’,5’ ADP Sepharose-Chromatographie,Anionenaustausch an DEAE Sepharose und abschließen-denAnionenaustausch über MonoQ. Die resultierendeProteinfraktion wies eine ca. 200 fache Anreicherung an 1.2Dihydrovomilenin Reduktase auf. Auch hierbei wurde die nachSDS Gelelek-trophorese als 1.2 Dihydrovomilenin Reduktasebestimmte Proteinbande (bei ca. 48 kDa) sequen-ziert. Eskonnten vier Peptidfragmente erhalten werden, die ebenso wiedie sequenzierten Peptidstücke der 40 und 43 kDa Bande einehohe Homologie zu Oxidoreduktasen, im einzelnen zuCinnamoylalcohol- und Mannitol Dehydrogenasen, aufwiesen.Um die Identität der sequenzierten Proteinbanden zubestätigen, wurde über „reverse genetics“ die jeweilscodierende cDNA eruiert. Dafür wurden - ausgehend von denPeptidstücken der Mikro-sequenzierung - degenerierte Primerentwickelt und über PCR Teilbereiche der cDNA amplifiziert.Diese konnten für eine radioaktive Durchmusterung einerRauvolfia cDNA Bank herangezogen werden. Alternativ botallein die Kenntnis der spezifischen Nukleotidabfolge dieMöglichkeit der Gewinnung von 5’ und 3’ Ende derVollängenklone durch RACE PCR.Nach Abschluß dieser Arbeiten konnten für die 40 und 48 kDaBande je ein Vollängenklon und für die 43 kDa Bande 2Vollängenklone (Isoformen) gefunden werden. SämtlicheVollängenklone besitzen einen offenen Leserahmen, der durchnicht zu translatierende Bereiche am 5’ und 3‘ Endeeingefaßt wird. Um die entsprechenden Proteine produzierenzu können, mußten die dafür codierenden cDNA Bereiche dereinzelnen Klone in ein geeignetes Vektor Wirt-System(Expressionssystem) eingebracht werden.Nach erfolgreicher Umklonierung wurde die Expression durchIPTG Zugabe kontrolliert und Proteinrohextrakte aus denBakterienstämmen isoliert. Als Substrate wurden Vomilenin,das strukturisomere Alkaloid Perakin und aufgrund derHomologien zu Cinnamoylalcohol und Mannitol Dehydrogenasen Zimtaldehyd, Dihydrozimtaldehyd und D(-)Fructose getestet. In allen E. coli Stämmen konnte ein unspezifischesReduktionspotential nachgewiesen werden, ohne daß jedochVomilenin reduziert wurde. Die Testung der 1.2Dihydrovomilenin Reduktase Klone mußte wegen Substratmangelentfallen.Die weitere Charakterisierung der pflanzlichen Enzymeerbrachte eine enorm hohe Substratspezifität mit einer sichauf Rauvolfia beschränkenden taxonomischen Verbreitung.Die Molekulargewichtsbestimmung für die Vomilenin Reduktaseergab nach Größenausschluß-chromatographie an Superdex 75ein Gewicht von etwa 43 kDa. Das ebenfalls über Superdex 75ermittelte Molekulargewicht für die 1.2 DihydrovomileninReduktase lag bei ca. 49.8 kDa. Weiterhin wurde eine Metallionenabhängigkeit für dieVomilenin Reduktase aufgezeigt und die Cofaktorspezifitätsowie die pH und Temperatur Optima für beide Reduktasenbestimmt.

Einzug der Röm. Kays. wie auch der zu Hungarn vnd Böheimb Königl. May. In dero deß H. Reichsstatt Augspurg : den 20. May Anno 1653 ; Was sich von dato, biß auff dero abraiß, wider nach Regenspurg, denckwürdiges begeben vnd sich verloffen

... offeriert vnd dediciert Von Martin Zimmerman, Burger vnd Kunstführer in Augspurg. [Mutmaßl. Stecher: Melchior Küsel]

Aspicis Iliacam, (Qvid Enim Discriminis?) Arcem : Nonne, Vides? Laxat Clavstra Virosqve Sinon ...

Einnahme des Kastells zu Breda, 14. März 1590; mit Textzitaten von H. Grotius

Contrafetische Abbildung Etlicher Alten, Berühmtesten, und Hochgelehrten Herren, die vor- in- und nach der Reformation, mit den Ansehnlichsten Vorgesezten Römischer Kirchen, so wol Schrift- als Mundtlich, vil und grosse Disputationen und Gespräche gehalten, und endtlich durch Gottes Gnad, das Liecht des heiligen Evangelii an tag gegeben haben

42 Reformatoren und Wegbereiter, mit Kürzestviten

Clematis Hendersoni - Waldrebe

AR

[Trillium nivale - Waldlilie]

AR

Orobanche caryophyllacea (auf Galium)

R. Anheisser

[Eryngium alpinum - Alpendistel]

R. Anheisser

[Nymphaea caerulea gigantea - Seerose]

R. Anheisser

[Dictamnus albus (Rutaceae)]

R. Anheisser