GATA proteins identify a novel ventral interneuron subclass in the developing chick spinal cord

Members of the GATA transcription factor gene family have been implicated in a variety of developmental processes, including that of the vertebrate central nervous system. However, the role of GATA proteins in spinal cord development remains unresolved. In this study, we investigated the expression and function of two GATA proteins, GATA2 and GATA3, in the developing chick spinal cord. We show that both proteins are expressed by a distinct subpopulation of ventral interneurons that share the same dorsoventral position as CHX10-positive V2 interneurons. However, no coexpression is observed between the two GATA proteins and CHX10. By in vivo notochord grafting and cyclopamine treatment, we demonstrate that the spatially restricted pattern of GATA3 expression is regulated, at least in part, by the signaling molecule Sonic hedgehog. In addition, we further show that Sonic hedgehog induces GATA3 expression in a dose-dependent manner. Using in ovo electroporations, we also demonstrate that GATA2 is upstream of GATA3 in the same epigenetic cascade and that GATA3 is capable of inducing GATA2 expression in vivo. Furthermore, the ectopically expressed GATA proteins can repress differentiation of other ventral cell fates, but not the development of progenitor populations identified by PAX protein expression. Taken together, our findings strongly suggest an important role for GATA2 and GATA3 proteins in the establishment of a distinct ventral interneuron subpopulation in the developing chick spinal cord. (C) 2002 Elsevier Science (USA).

Patterning of the vertebrate ventral spinal cord

We review investigations that have lead to a model of how the ventral spinal cord of higher vertebrate embryos is patterned during development. Central to this model is the secreted morphogen protein, Sonic hedgehog. There is now considerable evidence that this molecule acts in a concentration-dependent manner to direct the development of the spinal cord. Recent studies have suggested that two classes of homeodomain proteins are induced by threshold concentrations of Sonic hedgehog. Reciprocal inhibition between the two classes acts to convert the continuous gradient of Sonic hedgehog into defined domains of transcription factor expression. However, a number of aspects of ventral spinal cord patterning remain to be elucidated. Some issues currently under investigation involve temporal aspects of Shh-signalling, the role of other signals in ventral patterning and the characterisation of ventral interneurons. In this review, we discuss the current state of knowledge of these issues and present some preliminary studies aimed at furthering understanding of these processes in spinal cord patterning.

In ovo electroporation of Crim1 in the developing chick spinal cord

The novel mammalian gene Crim1 encodes a transmembrane bound protein with similarity to the secreted bone morphogenetic protein (BMP) antagonists, vertebrate Chordin, and its Drosophila homologue short gastrulation. Crim1 is expressed in the neural tube in mouse in a restricted pattern, but its function in central nervous system development is largely unknown. We isolated the chicken Crim1 orthologue and analyzed its expression in the developing neural tube. Chicken CRIM1 shares strong homology to human/mouse CRIM1 and C. elegans CRIM1-like proteins. Crim1 is expressed in a similar but not identical pattern to that in the developing spinal cord of mouse, including the notochord, floor plate, motor neurons, and the roof plate. Unlike follistatin, a secreted inhibitor of BMPs, in ovo electroporation of CRIM1, as a full-length transmembrane bound or secreted ectodomain was not sufficient to disrupt early patterning of the neural tube. However, ectodomain CRIM1 overexpression leads to an approximate 50% decrease in populations of specific ventral neuronal populations, including ISL-1(+) motor neurons, CHX-10(+) V1, and EN-1(+) V2 interneurons.

The Australian paralysis may be the missing link tick in the transmission of Hendra virus from bats to horses to humans

Hendra virus is a new virus of the family Paramyxoviridae. This virus was first detected in Queensland, Australia, in 1994; although, it seems that the virus has infected fruit-eating bats (flying-foxes) for a very long time. At least 2 humans and 15 horses have been killed by this virus since it first emerged as a virus that may infect mammals other than flying-foxes. Hendra virus is thought to have moved from flying-foxes to horses, and then from horses to people. There is a reasonably strong hypothesis for horse-to-human transmission: transmission of virus via nasal discharge, saliva and/or urine. In contrast, there is no strong hypothesis for flying-fox-to-human transmission. I present evidence that the Australian paralysis tick, Ixodes holocyclus, which has apparently only recently become a parasite of flying-foxes, may transmit Hendra virus and perhaps related viruses from flying-foxes to horses and other mammals. (C) 2003 Elsevier Science Ltd. All rights reserved.

Early pregnancy factor treatment suppresses the inflammatory response and adhesion molecule expression in the spinal cord of SJL/J mice with experimental autoimmune encephalomyelitis and the delayed-type hypersensitivity reaction to trinitrochlorobenzene in normal BALB/c mice

Early pregnancy factor (EPF) is a secreted protein, present in serum during early pregnancy and essential for maintaining viability of the embryo. It is a homologue of chaperonin 10 (Cpn10) but, unlike Cpn10, it has an extracellular role. EPF has immunosuppressive and growth regulatory properties. Previously we have reported the preparation of recombinant EPF (rEPF) and shown that treatment with rEPF will suppress clinical signs of MBP-EAE in Lewis rats and PLP-EAE in SJL/J mice. In the present study, these findings have been extended to investigate possible mechanisms involved in the action of EPF. Following treatment of mice with rEPF from the day of inoculation, there were fewer infiltrating CD3+ and CD4+ cells in the parenchyma of the spinal cord during the onset of disease and after the initial episode, compared with mice treated with vehicle. Expression of the integrins LFA-1, VLA-4 and Mac-1 and of members of the immunoglobulin superfamily of adhesion molecules ICAM-1 and VCAM-1 was suppressed in the central nervous system (CNS) following rEPF treatment. The expression of PECAM-1 was not affected. To determine if rEPF suppressed T cell activation in the periphery, the delayed-type hypersensitivity (DTH) reaction of normal BALB/c mice to trinitrochlorobenzene (TNCB) following treatment with rEPF was studied. The results showed that treatment with rEPF suppressed the DTH reaction, demonstrating the ability of EPF to downregulate the cell-mediated immune response. These results indicate that suppression of immunological mechanisms by rEPF plays a major role in the reduction of clinical signs of disease in experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). (C) 2003 Elsevier Science B.V. All rights reserved.

Early pregnancy factor suppresses the infiltration of lymphocytes and macrophages in the spinal cord of rats during experimental autoimmune encephalomyelitis but has no effect on apoptosis

Early pregnancy factor (EPF) is a secreted protein with immunosuppressive and growth factor properties that has been shown to suppress acute experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced with myelin basic protein (MBP) in Lewis rats. EAE is associated with infiltration of the central nervous system (CNS) with inflammatory cells. Spontaneous recovery involves the loss of T lymphocytes from the CNS and the selective apoptosis of Vbeta8.2(+) cells. In the present study, T cell, macrophage (CD11b/c(+)) and B cell (CD45RA(+)) populations in spinal cord and popliteal lymph nodes (LN) of Lewis rats with EAE were quantitated and apoptosis was studied. Rats were treated with EPF or vehicle. Following treatment on day 14 after inoculation with MBP, neither 1 x 100 mug nor 2 x 100 mug doses of EPF affected the total number of cells infiltrating the spinal cord on day 15, although the higher dose caused a decrease in the number of CD5(+) and CD11b/c(+) cells. Treatment with 2 x 100 mug/day from days 10 to 14 decreased the total number of infiltrating cells, and the numbers of CD5(+), CD11b/c(+) and CD45RA(+) cells. Apoptosis was unaffected. No alteration on the number or type of inflammatory cells in the popliteal LN was observed after treatment on days 10-14. However, treatment with EPF from days 0 to 11 increased the total number of T and B cells and CD5(+) T cells found on day 12 in the LN. Similarly, there was an increase in the frequency of MBP-reactive cells in the LN as determined by limiting dilution analysis. These results suggest that EPF treatment reduces the numbers of lymphocytes and macrophages in the CNS, possibly through an effect on cell trafficking. (C) 2003 Elsevier B.V. All rights reserved.

Effects of the paralysis tick, Ixodes holocyclus, on the electrocardiogram of the Spectacled Flying Fox, Pteropus conspicillatus

Objective To evaluate cardiac electrical function in the Spectacled Flying Fox (bat) infested with Ixodes holocyclus. Design Prospective clinical investigation of bats treated for naturally occurring tick toxicity. Procedure ECGs were performed on bats with tick toxicity (n = 33), bats that recovered slowly (n = 5) and normally (n = 5) following treatment for tick toxicity, and on normal bats with no history of tick toxicity (n = 9). Results Bats with tick toxicity had significantly prolonged corrected QT intervals, bradycardia and rhythm disturbances which included sinus bradydysrhythmia, atrial standstill, ventricular premature complexes, and idioventricular bradydysrhythmia. Conclusions The QT prolongation observed on ECG traces of bats with tick toxicity reflected delayed ventricular repolarisation and predisposed to polymorphic ventricular tachycardia and sudden cardiac death in response to sympathetic stimulation. The inability to document ventricular tachycardia in bats shortly before death from tick toxicity may be explained by a lack of sympathetic responsiveness attributable to the unique parasympathetic innervation of the bat heart, or hypothermiainduced catecholamine receptor down-regulation. Bradycardia and rhythm disturbances may be attributable to hypothermia.

Voice and speech characteristics and vocal hygiene in novice and professional voice broadcast journalists

Knowledge of differences in voice and speech characteristics between novice and professional broadcasters is essential for effective education of broadcast journalism students. Because newsreaders rely on optimal voice production, information pertaining to vocal hygiene is also important. The first aim of this study was to compare the voice and speech characteristics of professional newsreaders, student newsreaders and control participants. The second aim was to compare the awareness and use of vocal hygiene across these groups. Professional radio newsreaders, broadcast journalism students and two matched control groups were included in the study. Each participant recorded a news bulletin and completed a questionnaire on vocal hygiene. Data analysis of the recording included objective analysis and perceptual ratings by a panel of three judges. Significant student-professional differences were found. Compared to both the students and the control groups, the professional newsreaders had greater variation in speaking fundamental frequency, a faster rate of speech, fewer pronunciation errors and higher perceptual ratings on vocal quality, emphasis, continuity, phrasing and style of newsreading. Female professional newsreaders had a higher speaking fundamental frequency than both their control participants and the student newsreaders. Comparison of vocal hygiene awareness revealed few significant differences between any of the groups.

Estudo do comportamento vocal no ciclo menstrual: avaliação perceptivo-auditiva, acústica e auto-perceptiva

Durante o período pré-menstrual é comum a ocorrência de disfonia, e são poucas as mulheres que se dão conta dessa variação da voz dentro do ciclo menstrual (Quinteiro, 1989). OBJETIVO: Verificar se há diferença no padrão vocal de mulheres no período de ovulação em relação ao primeiro dia do ciclo menstrual, utilizando-se da análise perceptivo-auditiva, da espectrografia, dos parâmetros acústicos e quando esta diferença está presente, se é percebida pelas mulheres. FORMA DE ESTUDO: Caso-controle. MATERIAL E MÉTODO: A amostra coletada foi de 30 estudantes de Fonoaudiologia, na faixa etária de 18 a 25 anos, não-fumantes, com ciclo menstrual regular e sem o uso de contraceptivo oral. As vozes foram gravadas no primeiro dia de menstruação e no décimo-terceiro dia pós-menstruação (ovulação), para posterior comparação. RESULTADOS: Observou-se durante o período menstrual que as vozes estão rouco-soprosa de grau leve a moderado, instáveis, sem a presença de quebra de sonoridade, com pitch e loudness adequados e ressonância equilibrada. Há pior qualidade de definição dos harmônicos, maior quantidade de ruído entre eles e menor extensão dos harmônicos superiores. Encontramos uma f0 mais aguda, jitter e shimmer aumentados e PHR diminuída. CONCLUSÃO: No período menstrual há mudanças na qualidade vocal, no comportamento dos harmônicos e nos parâmetros vocais (f0,jitter, shimmer e PHR). Além disso, a maioria das estudantes de Fonoaudiologia não percebeu a variação da voz durante o ciclo menstrual.

Diferenciação histopatológica e imunoistoquímica das alterações epiteliais no nódulo vocal em relação aos pólipos e ao edema de laringe

OBJETIVO: Avaliar, por meio de técnicas histológicas e imunoistoquímicas, o epitélio nos nódulos vocais em relação aos pólipos, ao edema de laringe e às pregas vocais sem lesões macroscópicas. FORMA DE ESTUDO: Clínico retrospectivo. MATERIAL E MÉTODO: Por meio de levantamento de prontuário, foram identificados vinte e seis pacientes com lesões laríngeas inflamatórias (nódulos, pólipos e edema de laringe), que haviam sido submetidos à cirurgia. Pregas vocais sem alterações macroscópicas foram obtidas a partir de autópsia de cadáveres. Para análise do epitélio, foram realizadas colorações pela técnica da hematoxilina-eosina e do ácido periódico de Schiff e técnicas de imunoistoquímica com anticorpos dirigidos contra laminina e colágeno IV. A leitura das lâminas foi realizada por meio de microscopia óptica. RESULTADOS: Houve maior imunoexpressão de laminina e colágeno IV nos nódulos quando comparados aos pólipos (p=0,034 e p=0, 036, respectivamente), assim como quando comparados às pregas vocais sem lesões macroscópicas (p=0,019 e p=0, 021, respectivamente). Nódulos tendem a apresentar maior espessura da membrana basal, quando utilizamos coloração pela técnica do PAS, em relação aos pólipos (p=0,102). O edema de laringe não se diferenciou das demais nas técnicas utilizadas (p> 0,10). CONCLUSÕES: O Nódulo Vocal diferencia-se dos pólipos, nas três técnicas utilizadas para detecção da membrana basal (PAS, laminina, colágeno IV), e das pregas vocais sem lesões macroscópicas em duas das técnicas utilizadas (laminina e colágeno IV). Edema de laringe não se diferencia das demais lesões, nem de pregas vocais sem lesões macroscópicas, quando utilizadas as técnicas anteriormente descritas, para estudo da membrana basal.

Paralisia unilateral de prega vocal: associação e correlação entre tempos máximos de fonação, posição e ângulo de afastamento

A paralisia de prega vocal (PPV) decorre da lesão do nervo vago ou de seus ramos, podendo levar a alterações das funções que requerem o fechamento glótico. O tempo máximo de fonação (TMF) é um teste aplicado rotineiramente em pacientes disfônicospara avaliar a eficiência glótica e freqüentemente utilizado em casos de PPV, cujos valores encontram-se diminuídos. A classificação clínica clássica da posição da prega vocal paralisada em mediana, para-mediana, intermediária e em abdução ou cadavérica tem sido objeto de controvérsias. OBJETIVO: Verificar a associação e correlação entre os TMF e posição da prega vocal paralisada (PVP), TMF e ângulo de afastamento da PVP, medir o ângulo de afastamento da linha média das diferentes posições da PVP e correlacioná-lo com a sua classificação clínica FORMA DE ESTUDO: Clínico retrospectivo. MATERIAL E MÉTODO: Foram revisados os prontuários e analisados os exames videoendoscópicos de 86 indivíduos com paralisia de prega vocal unilateral e medido o ângulo de afastamento da PVP por meio de um programa computadorizado. RESULTADOS: A associação e correlação entre os TMF em cada posição assumida pela PVP têm significância estatística somente para /z/ na posição mediana. A associação e correlação entre TMF com ângulo de afastamento da PVP guardam relação para /i/, /u/. Ao associar e correlacionar medidas de ângulo com posição observa-se significância estatística em posição de abdução. CONCLUSÕES: Neste estudo não foi possível determinar as posições assumidas pela PVP por meio dos TMF nem correlacioná-las com medidas do ângulo.

Células de Langerhans no epitélio da prega vocal humana: estudo imunoistoquímico

Células de Langerhans (CL) são um tipo de células dendríticas que têm funções que envolvem apresentação de antígeno e a estimulação de resposta T dependente. Elas representam aproximadamente 4% das células do epitélio laríngeo. OBJETIVO: Identificar a presença de CL no epitélio das pregas vocais, comparar suas subpopulações, bem com comparar a capacidade de quatro marcadores imunoistoquímicos. FORMA DE ESTUDO: Experimental. CASUÍSTICA E MÉTODO: Seis cadáveres, 3 homens e 3 mulheres foram estudados. Foram analisadas amostras de pele e das pregas vocais coradas e imunomarcadas para vimentina, proteína S-100, CD-68 e fascina. Após análise histológica, foi realizado o teste t de Student e análise de variância no estudo estatístico. RESULTADOS E CONCLUSÕES: Foi possível identificar a presença de CL no epitélio das pregas vocais de humanos não fumantes de ambos os sexos. A fascina, a vimentina o CD-68 mostraram-se bons marcadores das CL, enquanto a proteína S-100 teve estatisticamente menor poder de marcação tanto na prega vocal (p=0,01) como na pele (p=0,02). Foi possível identificar três diferentes subpopulações de CL presentes tanto na prega vocal como na pele destes indivíduos, contudo apenas na pele observarmos maior quantidade estatisticamente significante na camada basal do epitélio.

Análise comparativa entre avaliação fonoaudiológica perceptivo-auditiva, análise acústica e laringoscopias indiretas para avaliação vocal em população com queixa vocal

Com a evolução e o desenvolvimento tecnológico, houve mudanças nos métodos de avaliação da voz, tanto na prática médica como fonoaudiológica. OBJETIVO: Relacionar os resultados da avaliação perceptivo-auditiva vocal, análise acústica e avaliações médicas no diagnóstico de alterações vocais e/ou laríngeas em indivíduos com queixa vocal. FORMA DE ESTUDO: Clínico prospectivo. MATERIAL E MÉTODO: Foram avaliados 29 indivíduos que participaram de uma ação de proteção de saúde. Os sujeitos foram submetidos à avaliação fonoaudiológica peceptivo-auditiva (AFPA), análise acústica (AA), laringoscopia indireta (LI) e telelaringoscopia (TL). RESULTADOS: Foram estabelecidas as relações entre os métodos de avaliação médica e fonoaudiológica, verificando possíveis significâncias estatísticas a partir da aplicação do Teste Exato de Fischer. Houve significância estatística na relação entre AFPA e LI, AFPA e TL, LI e TL. CONCLUSÃO: Esta pesquisa realizada numa ação de proteção de saúde vocal mostrou concordância entre a avaliação fonoaudiológica perceptivo-auditiva e as avaliações médicas, bem como os exames médicos entre si no diagnóstico de alterações vocais e/ou laríngeas.