Padronização de ensaio imunoenzimático para pesquisa de anticorpos das classes IgM e IgG anti-Toxoplasma gondii e comparação com a técnica de imunofluorescência indireta

A sorologia tem sido o método de escolha para o diagnóstico da toxoplasmose. Devido a isto, padronizamos um ensaio imunoenzimático (ELISA) e comparamos seus resultados com a técnica de imunofluorescência indireta (IFI). A técnica padronizada apresentou na pesquisa de IgG sensibilidade (S) de 96,7% e especificidade (E) de 75%, com valor de predição de positividade (VPP) de 83,3% e de negatividade (VPN) de 94,7%, com uma concordância ajustada (K) de 73,5%. A IFI apresentou S de 83,8%, E de 79,1% com VPP de 83,8 % e VPN de 79,1% com K de 63%. A concordância bruta entre os dois testes (ELISA/IFI) foi de 88,3% para pesquisa de IgG e de 81,5% para pesquisa de IgM, sendo o K de 70,8% para IgG e de 1,3% para IgM, sendo o índice de correlação (r) de 0,556 para IgG e de -0,023 para IgM. Podemos concluir que a ELISA-IgG padronizada é indicada nos processos de triagem sorológica, sendo a ELISA-IgM desaconselhada uma vez que apresentou baixos índices de concordância ajustada com a técnica de referência, sugerindo pouca confiabilidade dos resultados.

Inquérito sorológico para a infecção por Toxoplasma gondii em ameríndios isolados, Mato Grosso

Este estudo determinou a ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em população indígena do Mato Grosso, os Enawenê-Nawê. Estes habitam uma vasta região selvagem, com raros contatos com não-índios. Não apresentam animais domésticos, inclusive gatos. A dieta é baseada em insetos, mandioca, milho, mel e fungos e não se alimentam de carne, exceto de peixe. Com base no exposto, desenvolveu-se análise sorológica, por meio de ELISA - IgG e IFI - IgG e IgM. De 148 soros, 80,4% foram ELISA ou IFI- IgG positivos. Não foram detectados casos de IgM reagentes. Nesse grupo as taxas de soropositividade aumentaram significativamente com a idade, de 50% a 95%. Analisando-se os hábitos e costumes, aliados à alta soropositividade encontrada, sugere-se que a presença de felinos silvestres nas imediações da aldeia e coleções de água poderia ter papel importante como fonte de infecção, contaminando o solo e, conseqüentemente, os insetos e fungos consumidos pelos índios.

Soroprevalência de Toxoplasma gondii em rebanhos caprinos no Estado de São Paulo

Foi colhido um total de 442 soros em rebanhos caprinos de sete regiões do Estado de São Paulo e testados para anticorpos contra Toxoplasma gondii pela reação de imunofluorescência indireta. Em todos os rebanhos, foram encontrados caprinos reagentes, totalizando 64 (14,5%) animais com sorologia positiva em diferentes capris.

Avaliação da eficácia da azitromicina e pirimetamina em camundongos infectados por cepa cistogênica de Toxoplasma gondii

Foi avaliada a eficácia da administração prolongada de azitromicina e pirimetamina em camundongos infectados com cepa cistogênica de Toxoplasma gondii. Os animais foram inoculados intraperitonealmente com um cisto de T. gondii e, após 20 dias, divididos em quatro grupos: GI infectados não tratados, GII infectados e tratados concomitantemente com pirimetamina (12,5mg/kg/dia) e azitromicina (100mg/kg/dia), GIII infectados e tratados com a mesma dose de pirimetamina e GIV infectados e tratados da mesma forma com azitromicina. O tratamento, via oral, estendeu-se por 120 dias; após este período os animais foram sacrificados e foi feita a contagem dos cistos no cérebro. A associação de ambos os medicamentos proporcionou melhores resultados, diminuindo a contagem de cistos no cérebro dos animais tratados de forma concomitante.

Evaluation of intrathecal synthesis of specific IgG antibodies against Toxoplasma gondii in the diagnosis assessment of presumptive toxoplasma encephalitis in aids patients

The diagnosis of neurotoxoplasmosis in patients with acquired immunodeficiency syndrome is mainly based on tomographic or magnetic resonance findings and on the response to specific treatment. We studied 55 patients with AIDS and neurotoxoplasmosis according to these diagnostic criteria (group 1), 37 patients with AIDS and neurological involvement of other etiology (group 2), and 16 anti-HIV-negative individuals with neurological manifestations (group 3). Serum and cerebrospinal fluid were examined for the presence of anti-T. gondii IgG, by indirect immunofluorescence. In 72 of them, the total amounts of these antibodies were determined in order to assess local production of anti-T. gondii antibodies in the central nervous system and to correlate their titers with infection activity in patients with AIDS and neurotoxoplasmosis. IgG titers > 1/64 in cerebrospinal fluid reached 100% specificity for the diagnosis of neurotoxoplasmosis in AIDS. Evidence of local synthesis of these antibodies was detected in 42.8% of patients of group 1, in 29.1% of patients of group 2 and in no patient of group 3. The test showed 70.8% specificity and therefore was not useful in our study for the differential diagnosis of neurotoxoplasmosis in patients with AIDS.

Pesquisa de anticorpos anti Toxoplasma gondii em fluidos intra-oculares (humor vítreo e humor aquoso) de pacientes com toxoplasmose ocular, na cidade de Belém, PA

Foi realizada pesquisa de anticorpos IgG, IgM e IgA anti-Toxoplasma gondii no soro e fluidos intra-oculares (humor aquoso e vítreo) de pacientes com toxoplasmose ocular. A partir dos resultados obtidos verificou-se que anticorpos IgG e IgA intraocular anti-Toxoplasma gondii podem vir a ser importantes marcadores no diagnóstico de toxoplasmose ocular.

Avidity of IgG antibodies against excreted/secreted antigens of Toxoplasma gondii: immunological marker for acute recent toxoplasmosis

Detection of anti-toxoplasma IgM antibodies has frequently been used as a serological marker for diagnosing recently acquired toxoplasmosis. However, the persistence of these antibodies in some patients has complicated the interpretation of serological results when toxoplasmosis is suspected. The purpose of the present study was to evaluate the avidity of IgG antibodies against excreted/secreted antigens of Toxoplasma gondii by means of immunoblot, to establish a profile for acute recent infection in a single serum sample and confirm the presence of residual IgM antibodies obtained in automated assays. When we evaluated the avidity of IgG antibodies against excreted/secreted antigens of Toxoplasma gondii by means of immunoblot, we observed phase-specific reactivity, i.e. cases of acute recent toxoplasmosis presented low avidity and cases of non-acute recent toxoplasmosis presented high avidity towards the 30kDa protein fraction, which probably corresponds to the SAG-1 surface antigen. Our results suggest that the avidity of IgG antibodies against excreted/secreted antigens of Toxoplasma gondii is an important immunological marker for distinguishing between recent infections and for determining the presence of residual IgM antibodies obtained from automated assays.

Evidência sorológica da infecção aguda pelo Toxoplasma gondii em gestantes de Cascavel, Paraná

Para verificar a ocorrência da toxoplasmose em Cascavel, Paraná, cidade próxima a região onde ocorreu o maior surto epidêmico descrito mundialmente, 334 amostras de soros de gestantes foram triadas pelo ensaio imunoenzimático comercial IgG no Laboratório Municipal de Cascavel, e confirmadas no Instituto de Medicina Tropical de São Paulo por imunofluorescência IgG, ensaio imunoenzimático e avidez de IgG in house. A soropositividade pelo IgG comercial foi 54,2%, pela imunofluorescência 54,8% e pelo IgG in house 53,9%, com boa concordância entre imunofluorescência/IgG comercial (Kappa=0,963781; co-positividade=97,8%; co-negatividade=98,7%) e imunofluorescência/IgG in house (Kappa=0,975857; co-positividade=97,8%; co-negatividade=100%). A evidência de infecção aguda nas gestantes foi similar tanto pela avidez de IgG (2,4% ao ano) como pela análise estatística de tendência (teste χ2) por faixa etária (2% ao ano), sugerindo que a triagem sorológica pré-natal e a vigilância epidemiológica são imprescindíveis para redução do risco da toxoplasmose na região, embora sem evidência de surto epidêmico.

Prevalência de Anticorpos anti-Toxoplasma gondii em Grávidas da Região de Lisboa e Vale do Tejo e Estudo dos Factores de Risco

A toxoplasmose é uma antropozoonose de distribuição mundial que afecta quase um terço da população humana, bem como os animais e é causada por um protozoário intracelular obrigatório, Toxoplasma gondii. A prevalência desta parasitose na população humana varia com os hábitos alimentares, nível sócio-económico e com o clima. A transmissão ao homem está associada à ingestão de oocistos infecciosos (esporulados) provenientes das fezes dos gatos, a partir da água, de alimentos e do solo contaminados, ingestão de quistos na carne crua ou mal cozida, via congénita ou transfusional e por transplante de órgãos e/ou de tecidos de dadores infectados com o parasita e, mais raramente, através do leite não pasteurizado. A transmissão materno-fetal do parasita só ocorre quando a infecção é adquirida pela primeira vez na gravidez, podendo provocar sequelas graves para o feto, nomeadamente, atraso mental e morte fetal. O objectivo deste trabalho foi determinar a prevalência e os factores de risco associados à infecção por T. gondii em grávidas seguidas no Hospital Garcia de Orta. Este estudo teve a duração de 8 meses (Abril de 2010 a Janeiro de 2011) e foram contactadas 163 grávidas, das quais 140 (85,89 %) responderam ao questionário, tendo sido possível recolher soros de 155 (96,88%) grávidas. Os soros recolhidos foram testados para os anticorpos IgG anti-T. gondii pelo kit comercial Toxo-Screen Da e para os anticorpos IgM anti-T. gondii pelo kit comercial Toxo-ISAGA, ambos da bioMérieux®. Nas amostras seropositivas para o anticorpo IgM anti-T. gondii realizou-se a avidez dos anticorpos IgG anti-T. gondii através do kit NovaLisa - Toxoplasma gondii IgG Avidity Test da Novatec™. Foi efectuada a análise descritiva dos dados, centrada essencialmente em frequências absolutas para cada variável. Para testar a associação entre as variáveis utilizou-se o teste Qui-Quadrado de Pearson ou o teste exacto de Fisher (IC 95%, p≤0,05). A prevalência da toxoplasmose nas grávidas, neste estudo, foi de 21,94% (34), dos quais 50% (17) correspondem a grávidas seropositivas só para os anticorpos IgG (imunidade) e os outros 50% (17) correspondem a grávidas seropositivas para os anticorpos IgG/IgM. Neste último grupo, realizou-se a avidez e verificou-se que todas as grávidas eram portadoras de uma infecção antiga. Também, constatou-se que 78,06% das grávidas eram susceptíveis para a toxoplasmose, com risco de adquirirem a doença durante a gravidez. Na análise estatística entre os factores de risco e a infecção por T. gondii nas grávidas verificámos uma associação significativa (p<0,05) entre o número de partos, o conhecimento da toxoplasmose, o contacto com gatos de familiares/amigos e o consumo de carne proveniente da caça (pássaros, coelhos, javalis etc.). Estes factores parecem ser de grande importância na aquisição da infecção por T. gondii nas grávidas, deste estudo, dentre os vários factores investigados. vii Este trabalho pode constituir um alerta para que os profissionais de saúde insistam na prevenção primária, fornecendo informação (escrita e oral) sobre como evitar a infecção por T. gondii durante a gravidez e efectuar uma vigilância serológica, apenas quando esta se torna necessária, ou seja, nas grávidas não imunes à toxoplasmose.

Occurrence and risk factors associated with infection by Toxoplasma gondii in goats in the State of Alagoas, Brazil

INTRODUCTION: Goats are considered very susceptible to infection by Toxoplasma gondii and when this occurs during pregnancy, it may cause fetal death with subsequent fetal resorption, abortion, mummification, stillborn or the birth of weak goats. The objective of this work was to determine the occurrence of and identify risk factors for T. gondii infection in goats in different mesoregions in the State of Alagoas. METHODS: The research was conducted on 24 goat breeding farms in 10 municipalities. A total of 454 blood samples were examined for anti-T. gondii antibodies by indirect immunofluorescence antibody test. To evaluate the risk factors of toxoplasmosis in goats, questionnaires were applied analyzing the farm's production system and nutritional, reproductive and sanitary management. RESULTS: Disease occurrence was 39% with 95.8% of farms presenting seropositive animals. Significant associations were observed for mesoregion (OR = 0.23; 95%CI = 0.09 - 0.57), age (OR = 0.36; 95%CI = 0.20 - 0.64), semi-intensive herd management (OR = 8.70; 95%CI = 1.87 - 40.43), access of cats to water provided for goats (OR = 3.38; 95%CI = 1.89-6.02) and cats feeding on placental remnants (OR = 2.73; 95%CI = 1.38 - 5.40). CONCLUSIONS: Toxoplasma gondii infection is disseminated in the State of Alagoas and the adoption of a program that monitors infection foci is required to reduce the risk factors identified in the present study.

In vitro action of antiparasitic drugs, especially artesunate, against Toxoplasma gondii

INTRODUCTION: Toxoplasmosis is usually a benign infection, except in the event of ocular, central nervous system (CNS), or congenital disease and particularly when the patient is immunocompromised. Treatment consists of drugs that frequently cause adverse effects; thus, newer, more effective drugs are needed. In this study, the possible activity of artesunate, a drug successfully being used for the treatment of malaria, on Toxoplasma gondii growth in cell culture is evaluated and compared with the action of drugs that are already being used against this parasite. METHODS: LLC-MK2 cells were cultivated in RPMI medium, kept in disposable plastic bottles, and incubated at 36ºC with 5% CO2. Tachyzoites of the RH strain were used. The following drugs were tested: artesunate, cotrimoxazole, pentamidine, pyrimethamine, quinine, and trimethoprim. The effects of these drugs on tachyzoites and LLC-MK2 cells were analyzed using nonlinear regression analysis with Prism 3.0 software. RESULTS: Artesunate showed a mean tachyzoite inhibitory concentration (IC50) of 0.075µM and an LLC MK2 toxicity of 2.003µM. Pyrimethamine was effective at an IC50 of 0.482µM and a toxicity of 11.178µM. Trimethoprim alone was effective against the in vitro parasite. Cotrimoxazole also was effective against the parasite but at higher concentrations than those observed for artesunate and pyrimethamine. Pentamidine and quinine had no inhibitory effect over tachyzoites. CONCLUSIONS: Artesunate is proven in vitro to be a useful alternative for the treatment of toxoplasmosis, implying a subsequent in vivo effect and suggesting the mechanism of this drug against the parasite.

Prevalence and risk factors for Toxoplasma gondii infection among pregnant and postpartum women attended at public healthcare facilities in the City of Niterói, State of Rio de Janeiro, Brazil

IntroductionTo determine the prevalence of immunoglobulin G (IgG) and immunoglobulin M (IgM) anti-Toxoplasma gondii antibodies among pregnant and postpartum women attended within the public healthcare system in Niterói, State of Rio de Janeiro, and to detect possible exposure factors associated with T. gondii infection in this population.MethodsIgM and IgG anti-T. gondii antibodies were investigated in 276 pregnant and 124 postpartum women by using the indirect immunofluorescence (IFAT) and immunoenzymatic assay (ELISA) techniques. The participants were selected by convenience sampling. All these 400 patients filled out a free and informed consent statement, answered an epidemiological questionnaire and were informed about the disease.ResultsAmong the 400 samples analyzed, 234 (58.5%) were reactive to IgG anti-T. gondii antibodies, according to the IFAT and/or ELISA assay. One pregnant woman was found to be reactive to IgM anti-T. gondii antibodies, with an intermediate IgG avidity test. Risk factor analysis showed that seropositivity was significantly associated (p<0.05) with age, contact with cats and presence of rodents at home. Through a logistic regression model, these associations were confirmed for age and contact with cats, while education at least of the high school level was found to be a protective factor.ConclusionsThe prevalence rate of IgG anti-T. gondii antibodies in the City of Niterói was high and the risk factors for infection detected after multivariate analysis were: age over 30 years, contact with cats and education levels lower than university graduate level.

Serological cross-reactivity of Trypanosoma cruzi, Ehrlichia canis, Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Babesia canis to Leishmania infantum chagasi tests in dogs

Introduction: The aim of this study was to evaluate the serological cross-reactivity between Leishmania sp. and other canine pathogens. Methods: Positive serum samples for Ehrlichia canis, Babesia canis, Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Trypanosoma cruzi were tested using three serological methods enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and Kalazar Detect™, for canine visceral leishmaniasis. Results: Of the 57 dog samples tested, 24 (42.1%) tested positive using one of the three serological methods: 10/57 (17.5%) for ELISA, 11/57 (19.3%) for IFAT and 3/57 (5.3%) for Kalazar Detect™. Conclusions: Our results demonstrated that the presence of other infectious agents may lead to cross-reactivity on leishmaniasis serological tests.

Coinfection by Toxoplasma gondii and Leishmania spp. in domestic cats (Felis catus) in State of Mato Grosso do Sul

Introduction Leishmaniasis and toxoplasmosis are important to public health. Methods Antibodies for Toxoplasma gondii and Leishmania spp. were evaluated in cats from Campo Grande, State of Mato Grosso do Sul, Brazil, a region endemic for canine visceral leishmaniasis. Serum samples from 50 asymptomatic cats were titrated for T. gondii by the immunofluorescence antibody test and modified agglutination test and for Leishmania spp. by the immunofluorescence antibody test. Results These two agents coinfected two (4%) of the 50 tested animals. Conclusions These findings demonstrate the concomitant presence of two important zoonoses in cats from Brazilian endemic regions for canine visceral leishmaniasis.

Toxoplasma gondii infection: seroprevalence and associated risk factors among primary schoolchildren in Lagos City, Southern Nigeria

INTRODUCTION: Toxoplasma gondii infection has been described as the most widespread zoonotic infection of humans and other animals. Information concerning T. gondii infection among schoolchildren is unavailable in Lagos City, Nigeria. METHODS: This cross-sectional study investigated the seroprevalence and risk factors associated with T. gondii infection among primary schoolchildren (PSC) from a community located in the center of Lagos, southern Nigeria, from November 2013 to March 2014. A total of 382 PSC were screened for the presence of sera anti-T. gondii antibodies using a latex agglutination test (TOXO Test-MT, Tokyo, Japan). A cutoff titer of ≥ 1:32 was considered positive, while titers ≥ 1:1,024 indicated high responders. Questionnaires were also used to obtain data on possible risk factors from parents/guardians. RESULTS: The overall seroprevalence was 24% (91/382), and 83.5% (76/91) of seropositive PSC were classified as high responders. Among the risk factors tested, including contact with cats and soil, consumption of raw meat and vegetables, and drinking unboiled water, none showed statistical significance after multivariate adjustment. No associations were observed among age, gender, body mass index (BMI), and parents' occupation/educational level. CONCLUSIONS: The findings in this study show evidence of active infection, and hence, there is need for urgent preventive measures in this city. Further investigation is required to clarify the transmission routes. Policy makers also need to initiate prevention and control programs to protect pregnant women and immunocompromised patients in particular because they are more severely affected by T. gondii infection.