Mixed chimaerism; detection and significance following BMT

Residual recipient haematopoietic cells may coexist with donor haemopoietic tissue following BMT. This is known as mixed chimaerism. The incidence of mixed chimaerism varies with the sensitivity of the detection system used; DNA based methodologies are the most sensitive. The influence of mixed chimaerism on leukaemia relapse and graft rejection is unclear. The lineages in which mixed chimaerism occurs may affect outcome.

Successful second unrelated donor BMT in a child with juvenile chronic myeloid leukaemia:documentation of chimaerism using the polymerase chain reaction

A 3-year old child with juvenile chronic myeloid leukaemia received a T cell-depleted BMT from a male unrelated donor. There was early graft failure associated with increasing splenomegaly and hypersplenism. Splenectomy was performed 53 days post-transplant and was followed by autologous marrow recovery with return of leukaemia. A second unrelated donor BMT was performed 9 months later using T cell-replete marrow from a similarly matched female donor. Grade 2 GVHD involving the skin and gut responded to treatment with steroids. Chimaerism was assessed using Y-specific polymerase chain reaction (PCR) and microsatellites. Samples taken at the time of splenectomy showed no donor marrow engraftment but there was significant engraftment in the spleen. Following the second transplant, donor-type haematopoiesis was documented using a panel of microsatellite probes. The patient remains well 6 months after transplant. Splenectomy should be considered prior to transplant in patients with significant splenomegaly and hypersplenism. Partial chimaerism in the spleen, but not bone marrow, post-BMT, has not previously been documented. PCR technology is a useful and highly sensitive way to assess chimaerism post-BMT and is informative in sex-matched cases, whilst the small amount of material required is advantageous in paediatric patients.

Evaluation of mixed chimerism by in vitro amplification of dinucleotide repeat sequences using the polymerase chain reaction

The influence of mixed hematopoietic chimerism (MC) after allogeneic bone marrow transplantation remains unknown. Increasingly sensitive detection methods have shown that MC occurs frequently. We report a highly sensitive novel method to assess MC based on the polymerase chain reaction (PCR). Simple dinucleotide repeat sequences called microsatellites have been found to vary in their repeat number between individuals. We use this variation to type donor-recipient pairs following allogeneic BMT. A panel of seven microsatellites was used to distinguish between donor and recipient cells of 32 transplants. Informative microsatellites were subsequently used to assess MC after BMT in this group of patients. Seventeen of the 32 transplants involved a donor of opposite sex; hence, cytogenetics and Y chromosome-specific PCR were also used as an index of chimerism in these patients. MC was detected in bone marrow aspirates and peripheral blood in 18 of 32 patients (56%) by PCR. In several cases, only stored slide material was available for analysis but PCR of microsatellites or Y chromosomal material could be used successfully to assess the origin of cells in this archival material. Cytogenetic analysis was possible in 17 patients and MC was detected in three patients. Twelve patients received T-cell-depleted marrow and showed a high incidence of MC as revealed by PCR (greater than 80%). Twenty patients received unmanipulated marrow, and while the incidence of MC was lower (44%), this was a high percentage when compared with other studies. Once MC was detected, the percentages of recipient cells tended to increase. However, in patients exhibiting MC who subsequently relapsed, this increase was relatively sudden. The overall level of recipient cells in the group of MC patients who subsequently relapsed was higher than in those who exhibited stable MC. Thus, while the occurrence of MC was not indicative of a poor prognosis per se, sudden increases in the proportions of recipient cells may be a prelude to graft rejection or relapse.

ESCMID* guideline for the diagnosis and management of Candida diseases 2012: developing European guidelines in clinical microbiology and infectious diseases.

The process to develop a guideline in a European setting remains a challenge. The ESCMID Fungal Infection Study Group (EFISG) successfully achieved this endeavour. After two face-to-face meetings, numerous telephone conferences, and email correspondence, an ESCMID task force (basically composed of members of the Society's Fungal Infection Study Group, EFISG) finalized the ESCMID diagnostic and management/therapeutic guideline for Candida diseases. By appreciating various patient populations at risk for Candida diseases, four subgroups were predefined, mainly ICU patients, paediatric, HIV/AIDS and patients with malignancies including haematopoietic stem cell transplantation. Besides treatment recommendations, the ESCMID guidelines provide guidance for diagnostic procedures. For the guidelines, questions were formulated to phrase the intention of a given recommendation, for example, outcome. The recommendation was the clinical intervention, which was graded by a score of A-D for the 'Strength of a recommendation'. The 'level of evidence' received a score of I-III. The author panel was approved by ESCMID, European Organisation for Research and Treatment of Cancer, European Group for Blood and Marrow Transplantation, European Society of Intensive Care Medicine and the European Confederation of Medical Mycology. The guidelines followed the framework of GRADE and Appraisal of Guidelines, Research, and Evaluation. The drafted guideline was presented at ECCMID 2011 and points of discussion occurring during that meeting were incorporated into the manuscripts. These ESCMID guidelines for the diagnosis and management of Candida diseases provide guidance for clinicians in their daily decision-making process.

Impact d’une mutation ponctuelle stratégique de la protéine HOXB4 sur son pouvoir de régulation, de prolifération et de différenciation des CSH et des progéniteurs murins

L’expansion des cellules souches hématopoïétiques ex vivo représente une option des plus intéressante afin d’améliorer les greffes de moelle osseuse. Le facteur de transcription HOXB4 semble être le candidat ayant le plus de potentiel jusqu’à présent. Cependant, la très courte demi-vie de la protéine représente un obstacle majeur dans l’élaboration de protocoles cliniques. Par contre, la substitution d’un acide aminé (3 mutations individuelles) dans la partie N-terminale de la protéine augmente de près de 3 fois la stabilité intracellulaire de HOXB4. Nous avons comparé l’activité biologique de ces mutants à celle de HOXB4 natif (« wt ») dans des essais in vitro et in vivo. Nous avons démontré que la surexpression de HOXB4 muté par infection des cellules souches hématopoïétiques n’affectait pas leur pouvoir de reconstitution hématopoïétique à long terme dans des souris transplantées. Par ailleurs, nous avons noté que dans les essais de reconstitution hématopoïétique en compétition et en non compétition, les cellules surexprimant les protéines mutées ont une expansion supérieure in vitro et reconstituent le sang et la rate avec une répartition de cellules lymphoïdes et myéloïdes plus près de souris non-transplantées comparativement aux cellules exprimant HOXB4 « wt ». De plus, les cellules surexprimant la protéine HOXB4 mutée apparaissent beaucoup plus rapidement et en plus grande proportion dans le sang comparativement aux cellules surexprimant la forme native. Une des protéines HOXB4 mutées (1426) ne permet pas l’expansion des progéniteurs myéloïdes immatures (CMP) contrairement à la protéine « wt ». Et finalement, par les études de modulation intracellulaire protéique, nous avons démontré que les comportements des protéines HOXB4 « wt » et mutées envers les cellules souches hématopoïétiques et progéniteurs n’étaient pas complètement dus à un effet de concentration protéique.

Étude du rôle des lymphocytes T chez les receveurs pédiatriques de greffe de sang de cordon ombilical

La transplantation de sang de cordon ombilical (TSCO) est utilisée pour traiter les enfants atteints de maladies hématologiques en l’absence de donneurs apparentés compatibles. Elle est associée avec des risques plus élevés d’échec de greffe et d’infections opportunistes dans les premiers mois qui suivent la transplantation en comparaison avec une greffe de moelle osseuse. Par contre, la TSCO comporte un risque plus faible de maladie du greffon contre l’hôte et une incidence comparable de rechute de leucémie. Ces quatre complications impliquent directement les lymphocytes T. Dans le but de mieux comprendre le schéma particulier des évènements qui suivent la TSCO et d’améliorer le pronostic des patients, nous avons étudié le potentiel fonctionnel, la persistance et la reconstitution antivirale des lymphocytes T au sein d’un groupe d’enfants transplantés de sang de cordon ombilical (SCO). Étant donné que le SCO contient une majorité de lymphocytes T naïfs, nous avons étudié les lymphocytes T spécifiques au HLA-A2:Melan-A26-35 A27L; seul répertoire naïf et abondant caractérisé chez l’homme. Nous avons observé que les lymphocytes T du SCO se différencient en populations effectrices, s’oligoclonalisent, produisent de l’IFN-γ et lysent spécifiquement leur cible suite à la stimulation. Néanmoins, ces cellules produisent moins d’IFN-γ et sont moins bifonctionnelles que leurs homologues issus du sang périphérique d’adultes. Chez les patients, les lymphocytes T du SCO s’épuisent après la TSCO : ils s’oligoclonalisent dramatiquement, sont principalement en différenciation terminale, et une importante fréquence exprime PD-1 (« programmed death-1 ») dans les 3 à 6 premiers mois post-greffe. Très peu de patients sont capables de développer des réponses antivirales durant cette période et la fréquence de lymphocytes T qui expriment PD-1 semble aussi avoir un impact sur le risque subséquent de faire une rechute de leucémie. La deuxième vague de lymphocytes T émergeant à 6 mois post-TSCO mène à une population fonctionnelle et diversifiée. En conclusion, la fonctionnalité des lymphocytes T présents dans les 3 à 6 premiers mois post-TSCO doit être rétablie pour améliorer les risques d’infections opportunistes et de rechute de leucémie.

Development of cellular and gene therapies for b[beta]-Thalassemia and sickle cell disease

Thèse numérisée par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal.

Étude des effets du phénotype de sénescence des cellules stromales de la moelle osseuse sur les fonctions hématopoïétiques

L’irradiation (IR) est utilisée dans le traitement de plusieurs cancers et désordres hématologiques, en particulier dans les protocoles de conditionnement précédents les transplantations de moelle osseuse. L’emploi de doses réduites d’IR semble favoriser le succès de la prise de greffe. Cette observation soulève un point de plus en plus discuté dans la littérature, soit l’importance de l’intégrité du microenvironnement pour la transplantation et le bon fonctionnement de l’hématopoïèse. L’IR induit la sénescence des cellules stromales de la moelle osseuse in vitro. Ce mécanisme de défense cellulaire entraînant un arrêt de prolifération permanent est également observé in vivo dans différents systèmes, mais n’a pas encore été étudié dans le contexte de la niche hématopoïétique. Les travaux présentés dans cette thèse ont pour objectif de déterminer si l’IR induit la sénescence des cellules stromales de la moelle osseuse et si une telle induction altère les fonctions hématopoïétiques. Nos résultats ont permis de démontrer pour la première fois qu’une IR corporelle totale induit effectivement la sénescence des cellules stromales de la moelle osseuse. En outre, cette altération du microenvironnement affecte la lymphopoïèse B de façon Ink4a/Arf-dépendante (1er article). De plus, les modifications systémiques qui résultent de l’IR compromettent l’homéostasie osseuse en augmentant la résorption de l’os, sans toutefois diminuer la formation de celui-ci (2e article). Ces données nous permettent de mieux comprendre les effets de la sénescence des cellules stromales de la moelle osseuse sur les fonctions hématopoïétiques. Par ailleurs, elles suggèrent que l’emploi de drogues et/ou de procédés n’induisant pas la sénescence des cellules stromales de l’os offrirait un meilleur pronostic à long terme pour les patients.

Mechanism of Inducible Costimulator (ICOS)-mediated calcium signaling

Le Costimulateur Inductible (ICOS) est un récepteur exprimé à la surface des cellules T CD4 auxiliaires et T CD8 cytotoxiques. Il fut démontré à l’aide de modèles murins de transplantation de moelle osseuse que ICOS joue un rôle important dans l’induction de la maladie du greffon contre l’hôte aigüe (GVHD). ICOS potentialise deux signaux médiés par le récepteur de cellules T (TCR) : l’activation de la phosphoinositide 3-kinase (PI3K) ainsi que la mobilisation interne de calcium. En conditions in vitro, dans les cellules CD4 et CD8, ICOS réussi à potentialiser le flux de calcium médié par le TCR indépendamment de PI3K. La voie de signalisation de ICOS impliquée dans la GVHD demeure inconnue. Cependant, en utilisant une lignée de souris ‘knock-in’ nommée ICOS-Y181F, dans laquelle le cellules T ont sélectivement perdu la capacité d’activer PI3K par l’entremise d’ICOS, nous avons démontré que les cellules T peuvent utiliser un mécanisme ICOS indépendant de PI3K afin d’induire la GVHD. La mobilisation interne du Ca2+ mène à l’activation de NFAT, un facteur de transcription clé régulant des gènes comme IFN-γ, qui exprime une des cytokines clés impliquées dans la GVHD. Nous émettons comme hypothèse que la capacité pathogénique intacte des cellules T ICOSY181F à induire la GVHD, repose sur la signalisation du Ca2+ indépendante de PI3K. Le but de mon projet est d’identifier les résidus responsables de cette signalisation de Ca2+ médiée par ICOS ainsi que le mécanisme par lequel ce récepteur fonctionne. À l’aide de la mutagénèse dirigée, j’ai généré des mutants d’ICOS et j’ai analysé par cytométrie en flux leur capacité à activer le flux de Ca2+. J’ai ainsi identifié un groupe de lysine sur la queue cytoplasmique d’ICOS situé à proximité de la membrane comme étant essentiel à la fonction de potentialisation du flux de Ca2+. Je fournis également des preuves de l’implication de la kinase Lck, membre de la famille de kinases Src, dans la voie de signalisation de ICOS médiant la potentialisation du flux de Ca2+. Ainsi, ICOS s’associe à Lck et mène à une augmentation de l’activation de PLCγ1, la protéine effectrice clé causant la sortie de Ca2+ de la réserve intracellulaire. En conclusion, notre étude permet de comprendre davantage une des voies de signalisation d’ICOS. L’influx de Ca2+ dans les cellules T implique la voie ICOS-Lck-PLCγ1. Une compréhension plus approfondie de cette voie de signalisation pourrait s’avérer bénéfique afin d’élaborer de nouvelles stratégies menant à la prévention de maladies reliées à ICOS, comme la GVHD.

La experiencia de los receptores en el trasplante de órganos y tejidos

El trasplante de órganos y/o tejidos es considerado como una opción terapéutica viable para el tratamiento tanto de enfermedades crónicas o en estadios terminales, como de afectaciones no vitales, pero que generen una disminución en la calidad de vida percibida por el paciente. Este procedimiento, de carácter multidimensional, está compuesto por 3 actores principales: el donante, el órgano/tejido, y el receptor. Si bien un porcentaje significativo de investigaciones y planes de intervención han girado en torno a la dimensión biológica del trasplante, y a la promoción de la donación; el interés por la experiencia psicosocial y la calidad de vida de los receptores en este proceso ha aumentado durante la última década. En relación con esto, la presente monografía se plantea como objetivo general la exploración de la experiencia y los significados construidos por los pacientes trasplantados, a través de una revisión sistemática de la literatura sobre esta temática. Para ello, se plantearon unos objetivos específicos derivados del general, se seleccionaron términos o palabras claves por cada uno de estos, y se realizó una búsqueda en 5 bases de datos para revistas indexadas: Ebsco Host (Academic Search; y Psychology and Behavioral Sciences Collection); Proquest; Pubmed; y Science Direct. A partir de los resultados, se establece que si bien la vivencia de los receptores ha comenzado a ser investigada, aún es necesaria una mayor exploración sobre la experiencia de estos pacientes; exploración que carecería de objetivo si no se hiciera a través de las narrativas o testimonios de los mismos receptores

Simvastatin therapy in cyclosporine A-induced alveolar bone loss in rats

Background and Objective: Cyclosporine A treatment is important in the therapy of a number of medical conditions; however, alveolar bone loss is an important negative side-effect of this drug. As such, we evaluated whether concomitant administration of simvastatin would minimize cyclosporine A-associated alveolar bone loss in rats subjected, or not, to experimental periodontal disease. Material and Methods: Groups of 10 rats each were treated with cyclosporine A (10 mg/kg/day), simvastatin (20 mg/kg/day), cyclosporine A and simvastatin concurrently (cyclosporine A/simvastatin) or vehicle for 30 days. Four other groups of 10 rats each received a cotton ligature around the lower first molar and were treated similarly with cyclosporine A, simvastatin, cyclosporine A/simvastatin or vehicle. Calcium (Ca(2+)), phosphorus and alkaline phosphatase levels were evaluated in serum. Expression levels of interleukin-1 beta, prostaglandin E(2) and inducible nitric oxide synthase were evaluated in the gingivomucosal tissues. Bone volume and numbers of osteoblasts and osteoclasts were also analyzed. Results: Treatment with cyclosporine A in rats, with or without ligature, was associated with bone loss, represented by a lower bone volume and an increase in the number of osteoclasts. Treatment with cyclosporine A was associated with bone resorption, whereas simvastatin treatment improved cyclosporine A-associated alveolar bone loss in all parameters studied. In addition, simvastatin, in the presence of inflammation, can act as an anti-inflammatory agent. Conclusion: This study shows that simvastatin therapy leads to a reversal of the cyclosporine A-induced bone loss, which may be mediated by downregulation of interleukin-1 beta and prostaglandin E(2) production.

Effects of Low-Level Laser Therapy on Collagen Expression and Neutrophil Infiltrate in 5-Fluorouracil-Induced Oral Mucositis in Hamsters

Background and Objectives: Several studies have suggested that low-level laser therapy (LLLT) can ameliorate oral mucositis, however, the mechanisms involved are not well understood. The aim of this study was to investigate the mechanisms of action of LLLT on chemotherapy-induced oral mucositis, as related to effects on collagen expression and inflammation Materials and Methods: A hamster cheek pouch model of oral mucositis was used with all animals receiving intraperitoneal 5-fluorouracil, followed by surface irritation. Animals were randomly allocated into three groups, and treated with an InGaAIP diode laser at a wavelength of 660 nm and output power of 35 or 100 mW laser, or no laser Clinical severity of mucositis was assessed at four time-points by a blinded examiner Buccal pouch tissue was harvested from a subgroup of animals in each group at four time-points. Collagen was qualitatively and quantitatively evaluated after picrosinus staining. The density of the neutrophil infiltrate was also scored Results: Peak clinical severity of mucositis was reduced in the 35 mW laser group as compared to the 100 mW and control groups The reduced peak clinical severity of mucositis in the 35 mW laser group was accompanied by a decrease in the number of neutrophils and an increase in the proportion of mature collagen as compared to the other two groups. The total quantity of collagen was significantly higher in the control (no laser) group at the day 11 time-point, as compared to the 35 mW laser group, consistent with a more prolonged inflammatory response in the control group. Conclusion: This study supports two mechanisms of action for LLLT in reducing mucositis severity. The increase in collagen organization in response to the 35 mW laser indicates that LLLT promotes wound healing In addition, LLLT also appears to have an anti-inflammatory effect, as evidenced by the reduction in neutrophil infiltrate Lasers Surg Med 42 546-552, 2010. (C) 2010 Wiley-Liss, Inc.

Cyclooxygenase-2 and vascular endothelial growth factor expression in 5-fluorouracil-induced oral mucositis in hamsters: evaluation of two low-intensity laser protocols

The aim of this study was to investigate the mechanisms whereby low-intensity laser therapy may affect the severity of oral mucositis. A hamster cheek pouch model of oral mucositis was used with all animals receiving intraperitoneal 5-fluorouracil followed by surface irritation. Animals were randomly allocated into three groups and treated with a 35 mW laser, 100 mW laser, or no laser. Clinical severity of mucositis was assessed at four time-points by a blinded examiner. Buccal pouch tissue was harvested from a subgroup of animals in each group at four time-points. This tissue was used for immunohistochemistry for cyclooxygenase-2 (COX-2), vascular endothelial growth factor (VEGF), and factor VIII (marker of microvessel density) and the resulting staining was quantified. Peak severity of mucositis was reduced in the 35 mW laser group as compared to the 100 mW laser and control groups. This reduced peak clinical severity of mucositis in the 35 mW laser group was accompanied by a significantly lower level of COX-2 staining. The 100 mW laser did not have an effect on the severity of clinical mucositis, but was associated with a decrease in VEGF levels at the later time-points, as compared to the other groups. There was no clear relationship of VEGF levels or microvessel density to clinical mucositis severity. The tissue response to laser therapy appears to vary by dose. Low-intensity laser therapy appears to reduce the severity of mucositis, at least in part, by reducing COX-2 levels and associated inhibition of the inflammatory response.

Regression analysis of mean quality-adjusted survival time based on pseudo-observations

Regression models for the mean quality-adjusted survival time are specified from hazard functions of transitions between two states and the mean quality-adjusted survival time may be a complex function of covariates. We discuss a regression model for the mean quality-adjusted survival (QAS) time based on pseudo-observations, which has the advantage of directly modeling the effect of covariates in the QAS time. Both Monte Carlo Simulations and a real data set are studied. Copyright (C) 2009 John Wiley & Sons, Ltd.