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Resumo:
A desnutrio proteica (DP) pode ocasionar alteraes na matriz extracelular (MEC) de diferentes rgos e tecidos, inclusive o hematopotico, com comprometimento funcional. Estudos do nosso laboratrio demonstraram, em modelo murino de DP, aumento da expresso proteica de fibronectina (FN) no estroma medular sseo in vivo, principalmente na regio subendosteal (local de fixao da clula tronco progenitora hemopotica). J in vitro, no estroma medular sseo, observou-se tanto o aumento quanto a diminuio de FN e a presena de suas isoformas. Essas alteraes de FN parecem estar envolvidas com a hipoplasia da medula ssea (MO) em camundongos desnutridos. As modificaes quantitativas de FN podem ser devidas: (i) ao das metaloproteinases de matriz (MMP) responsveis pela degradao das protenas da MEC; (ii) aos inibidores de metaloproteinases (TIMP) que regulam a degradao da MEC; (iii) s alteraes transcricionais, reguladas pela via de AKT/mTOR, que controla os splicing alternativos na FN, resultando em isoformas dessa protena; (iv) a processos ps-transcricionais modulados por LC3, que aumenta a traduo do RNAm de FN. Assim, o objetivo deste estudo foi elucidar os mecanismos que alteram o turnover de FN no estroma medular sseo em modelo murino de DP. Utilizamos camundongos, C57BL/6J machos, adultos, separados em dois grupos: controle e desnutrido, alimentados, ad libitum, com rao contendo 12% e 2% de protena, respectivamente. Aps cinco semanas de induo desnutrio os camundongos foram eutanasiados, e coletado o material biolgico. Avaliamos: o estado nutricional, o hematolgico, a histologia da MO femoral bem como a determinao imunohistoquímica da FN, MMP-2 e MMP-9, determinao da expresso de FN e suas isoformas em clulas totais da MO, o estabelecimento do estroma medular sseo in vitro, por 28 e 35 dias de cultivo. A partir das culturas foram avaliadas a expresso de RNAm de FN e suas isoformas, MMP-2, MMP-9, TIMP-1, TIMP-2, AKT, mTOR e LC3α e β, quantificao de MMP-2, MMP-9, TIMP-1, TIMP-2,TNFα, TGFβ e IL-1β e determinao de LC3β e protenas da via de AKT/mTOR. No observamos alteraes na expresso do RNAm de FN e suas isoformas ex vivo e in vitro, mas um aumento da deposio de FN na MO.Tambm no observamos modificaes na imunolocalizao de MMP-2 e MMP-9 na MO e na atividade dessas protenas no sobrenadante de culturas de clulas estromais in vitro, mas houve aumento da expresso do RNAm de MMP-9 em 28 dias de cultivo. No detectamos alteraes na expresso de RNAm e na concentrao de TIMP-1 e TIMP-2 no sobrenadante das culturas. Houve reduo significativa de TNFα e TGFβ no sobrenadante das culturas de 28 dias. Observamos aumento da expresso do RNAm de mTOR em culturas de 28 dias e LC3α e LC3β em 35 dias de clulas estromais. Encontramos menor fosforilao de PI3K, AKT, PTEN, mTOR e mTOR total e aumento de LC3β em culturas de 28 dias, mas reduo de LC3β em 35 dias. Em funo dos dados inferimos que a DP conduz a alteraes da FN que no esto relacionadas ao de MMPs e TIMPs e sim a modificaes de LC3β e da via de AKT/mTOR.
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According to the last global burden of disease published by the World Health Organization, tumors were the third leading cause of death worldwide in 2004. Among the different types of tumors, colorectal cancer ranks as the fourth most lethal. To date, tumor diagnosis is based mainly on the identification of morphological changes in tissues. Considering that these changes appears after many biochemical reactions, the development of vibrational techniques may contribute to the early detection of tumors, since they are able to detect such reactions. The present study aimed to develop a methodology based on infrared microspectroscopy to characterize colon samples, providing complementary information to the pathologist and facilitating the early diagnosis of tumors. The study groups were composed by human colon samples obtained from paraffin-embedded biopsies. The groups are divided in normal (n=20), inflammation (n=17) and tumor (n=18). Two adjacent slices were acquired from each block. The first one was subjected to chemical dewaxing and H&E staining. The infrared imaging was performed on the second slice, which was not dewaxed or stained. A computational preprocessing methodology was employed to identify the paraffin in the images and to perform spectral baseline correction. Such methodology was adapted to include two types of spectral quality control. Afterwards the preprocessing step, spectra belonging to the same image were analyzed and grouped according to their biochemical similarities. One pathologist associated each obtained group with some histological structure based on the H&E stained slice. Such analysis highlighted the biochemical differences between the three studied groups. Results showed that severe inflammation presents biochemical features similar to the tumors ones, indicating that tumors can develop from inflammatory process. A spectral database was constructed containing the biochemical information identified in the previous step. Spectra obtained from new samples were confronted with the database information, leading to their classification into one of the three groups: normal, inflammation or tumor. Internal and external validation were performed based on the classification sensitivity, specificity and accuracy. Comparison between the classification results and H&E stained sections revealed some discrepancies. Some regions histologically normal were identified as inflammation by the classification algorithm. Similarly, some regions presenting inflammatory lesions in the stained section were classified into the tumor group. Such differences were considered as misclassification, but they may actually evidence that biochemical changes are in course in the analyzed sample. In the latter case, the method developed throughout this thesis would have proved able to identify early stages of inflammatory and tumor lesions. It is necessary to perform additional experiments to elucidate this discrepancy between the classification results and the morphological features. One solution would be the use of immunohistochemistry techniques with specific markers for tumor and inflammation. Another option includes the recovering of the medical records of patients who participated in this study in order to check, in later times to the biopsy collection, whether they actually developed the lesions supposedly detected in this research.
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INTRODUO: A prevalncia de asma tem crescido e a maioria dos pacientes com asma grave no obtm o controle total dos sintomas com as terapias disponveis, fazendo-se necessria a busca por novas alternativas teraputicas. Inibidores de proteinases tm sido estudados como tratamento de processos inflamatrios, dentre eles o Enterolobium contortisiliquum Tripsin Inhibitor (EcTI) OBJETIVO: Avaliar se o inibidor de proteinase EcTI modula a hiperresponsividade brnquica metacolina, inflamao, remodelamento e estresse oxidativo nas vias areas e septos alveolares em um modelo experimental de inflamao pulmonar alrgica crnica. MTODOS: Vinte e quatro camundongos Balb/c machos, entre seis e sete semanas de vida, pesando em media 25 g foram divididos em quatro grupos: C (controle), OVA (sensibilizados com ovalbumina, 50 ug intraperironeal (i.p) nos dias 0 e 14 e desafiados nos dias 22, 24, 26, 28); C+EC (controle tratados com EcTI (2 mg/kg/i.p) nos dias 22 a 28); OVA+EC (sensibilizados e desafiados com ovalbumina e tambm tratados com EcTI (2 mg/kg -i.p) nos dias 22 a 28). No dia 29, foram realizadas realizadas: (i) hiperresponsividade metacolina e obtidas as respostas mximas de resistncia e elastncia do sistema respiratrio; (ii) anlise histopatolgica do pulmo para quantificao de eosinfilos, fibras colgenas e elsticas nas vias areas (VA) e nos septos alveolares (SA); e (iii) imunohistoquímica para quantificao de clulas positivas para IFN-y, IL-4, IL-5, IL-13, MMP-9, TIMP-1, TGF-beta, iNOS, NF-kB e frao de volume de isoprostano nas VA e nos SA. Uma semana aps o dia 29 foi realizada a tcnica de anafilaxia cutanea passiva(PCA) para quantificar IgE e IgG1. A significncia foi considerada quando p < 0,05. RESULTADOS: Houve aumento de todos os parmetros avaliados no grupo OVA em relao ao grupo controle (p < 0,05). Houve atenuao da resposta mxima de Rrs e Ers no grupo OVA+EC comparado as grupo OVA (p < 0,05). O tratamento com EcTI nos animais sensibilizados atenuou o nmero de eosinfilos, clulas positivas para IL-4, IL-5, IL-13,IFN-y, iNOS, MMP-9, TIMP-1, NF-kB e TGF-beta e frao de volume de isoprostano, fibras colgenas e elsticas nas vias areas e nos sptos alveolares quando comparado ao grupo OVA (p < 0,05).Houve reaao de PCA nos animais sensibilizados com ovalbumina. CONCLUSO: EcTI atenuou a hiperresponsividade brnquica, a inflamao, o remodelamento e o estresse oxidativo nesse modelo experimental de inflamao pulmonar alrgica crnica. Embora sejam necessrios mais estudos, esse inibidor pode ser considerado uma futura ferramenta farmacolgica para o tratamento de asma
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INTRODUO: o cncer a doena que mais mata pessoas com idade abaixo de 85 anos e um problema de sade pblica. Os tumores podem expressar em determinada fase de seu desenvolvimento protenas anmalas que podem ser alvo de mtodos diagnsticos e de intervenes teraputicas. A expresso de NY-ESO-1 detectada em 20 a 40% dos melanomas. H evidncias que esta expresso mais freqente em tumores de estgios mais avanados e est associada a um pior prognstico. OBJETIVOS: determinar a frequncia de expresso da protena NY-ESO-1 no melanoma cutneo e tentar correlacion-la com o ndice de Breslow, aspectos histopatolgicos do melanoma, incluindo o infiltrado linfoctico tumoral, e a morbi-mortalidade dos pacientes. MTODOS: o presente estudo longitudinal de coorte retrospectiva e foi realizado de agosto de 2009 a outubro de 2015. Foram selecionados 89 melanomas de 87 pacientes do Ambulatrio de Tumores do Departamento de Dermatologia da FMUSP, divididos em 3 grupos, sendo: grupo 1: 34 melanomas com ndice de Breslow <= 1,0 mm; grupo 2: 29 melanomas com ndice de Breslow entre 1,1 - 4,0 mm e grupo 3: 26 melanomas com ndice de Breslow >= 4,0 mm. As lminas dos exames antomo-patolgicos destes pacientes foram revisadas quanto ao diagnstico de melanoma, seu ndice de Breslow e a presena de infiltrado linfoctico tumoral. A seguir, realizou-se exame de imunohistoquímica para a determinao da presena do antgeno NY-ESO-1 em todos os 89 tumores coletados e em mais 20 nevos (11 displsicos e 9 intradrmicos) escolhidos ao acaso. Atravs da reviso dos dados do pronturio, foram obtidos os dados clnicos de: idade, sexo, raa, fototipo da pele, local de aparecimento do melanoma, status do linfonodo sentinela quando realizado, desenvolvimento de metstases e sobrevida dos pacientes. Os dados antomo-patolgicos do tumor analisados foram: tipo histolgico, presena de ulcerao, e tipo de infiltrado linfoctico tumoral. Nos melanomas que apresentavam infiltrado linfoctico tumoral, foram realizados testes imunohistoqumicos para pesquisa de clulas CD3+, CD8+, FoxP3+ e CD8+FoxP3+ (duplamente positivas). RESULTADOS: O antgeno NY-ESO-1 esteve presente em 19% dos melanomas cutneos primrios e no foi detectado em nenhum dos 20 nevos pesquisados. A expresso do antgeno NY-ESO-1 esteve estatisticamente relacionada a tumores com espessuras maiores. Apresentou tambm uma associao inversa com o tipo extensivo superficial em relao aos outros tipos histolgicos. O infiltrado linfoctico tumoral dos melanomas NY-ESO-1 positivos continha menor nmero de clulas CD3+, que se encontravam isoladas ou arranjadas em pequenos grupos de at 5 clulas, o que contrastava significantemente com os tumores NY-ESO-1 negativos, com maior densidade de clulas CD3+, dispostas em grandes grupos, com 6 ou mais clulas. A expresso da protena NY-ESO-1 no esteve associada idade, ao sexo, ao fototipo, ao stio primrio do tumor, presena de ulcerao, ao status do linfonodo sentinela, ao desenvolvimento de metstases ou sobrevida. CONCLUSES: H expresso de NY-ESO-1 em uma porcentagem considervel dos melanomas, principalmente nos mais espessos. O menor nmero de clulas CD3+ no infiltrado linfoctico tumoral, acrescido ao fato destas clulas estarem isoladas ou em pequenos grupos, sugere que embora imunognico, a expresso do antgeno NY-ESO-1 no resulta num estmulo eficaz do sistema imune no combate ao tumor. O desenvolvimento de uma vacina para estes pacientes poder, no futuro, aumentar as possibilidades teraputicas do melanoma
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Introduo: Demonstramos previamente que em modelo experimental de enfisema pulmonar induzido por instilao de elastase, o inibidor de serinoprotease rBmTI-A promoveu a melhora da destruio tecidual em camundongos. Considerando que o tabagismo o principal fator de risco para o desenvolvimento da Doena Pulmonar Obstrutiva Crnica (DPOC) e que o modelo de exposio fumaa de cigarro considerado o que melhor mimetiza esta doena em humanos, este estudo teve por objetivo verificar a ao do inibidor para serinoproteases rBmTI-A sobre os processos fisiopatolgicos envolvidos no desenvolvimento do enfisema pulmonar, em modelo de exposio ao tabaco. Mtodos: Para a induo do enfisema pulmonar, os animais foram expostos fumaa de cigarro (duas vezes ao dia/ 30 minutos/ 5 dias por semana/ durante 12 semanas), e os animais controle permaneceram expostos ao ar ambiente. Dois protocolos de tratamento com o inibidor rBmTI-A foram realizados. No primeiro, os animais receberam duas administraes do inibidor rBmTI-A ou de seu veculo (Soluo Salina 0,9%) por via intranasal, sendo a primeira aps 24h do trmino das exposies ao cigarro e outra, 7 dias aps primeira instilao do inibidor. No segundo protocolo, os animais receberam 3 administraes do inibidor rBmTI-A, durante o tempo de exposio (1 dose: 24h antes do incio da exposio fumaa de cigarro; 2 dose: um ms aps o incio da exposio; 3 dose: dois meses aps o incio). Aps o trmino dos protocolos de exposio e tratamento, os animais foram submetidos aos procedimentos para coleta dos dados de mecnica respiratria e avaliao do Intercepto Linear Mdio (Lm). Para o segundo protocolo, realizamos tambm as medidas para quantificao de fibras de colgeno e elstica, da densidade de clulas positivas para MAC-2, MMP-12 e 9, TIMP-1, Gp91phox e TNFalfa; no parnquima atravs de imunohistoquímica, contagem de clulas polimorfonucleares alm da expresso gnica de MMP-12 e 9 no pulmo atravs de RT-qPCR. Resultados e Discusso: O tratamento com o inibidor para serinoprotease rBmTI-A atenuou o desenvolvimento do enfisema pulmonar apenas no segundo protocolo, quando foi administrado durante a exposio fumaa de cigarro. Embora os grupos Fumo-rBmTIA e Fumo-VE apresentem aumento de Lm comparados aos grupos controles, houve uma reduo deste ndice no grupo Fumo-rBmTIA comparado ao grupo Fumo-VE. O mesmo comportamento foi observado para as anlises de proporo em volume de fibras de elstica e colgeno no parnquima. Alm disto, observamos aumento de macrfagos, MMP-12, MMP-9 e TNFalfa; nos grupos expostos fumaa de cigarro, mas o tratamento com o inibidor rBmTI-A diminuiu apenas a quantidade de clulas positivas para MMP-12. Na avaliao da expresso gnica para MMP-12 e 9, no observamos diferena entre os grupos experimentais e o mesmo comportamento foi observado para a quantidade de clulas polimorfonucleares no parnquima. Alm disso, observamos aumento de GP91phox e TIMP-1 nos grupos tratados com rBmTIA. Concluses: Tais resultados sugerem que o inibidor rBmTI-A no foi efetivo como tratamento da leso aps a doena instalada. Entretanto, atenuou o desenvolvimento da doena quando administrado durante a induo do enfisema, possivelmente atravs do aumento de GP91phox e TIMP-1, acompanhados pela diminuio de MMP-12.
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A apoptose constitui um processo fisiolgico de morte celular, caracterizado por alteraes morfolgicas distintas e mecanismos bioqumicos e moleculares bem definidos. O seu papel de destaque em numerosos eventos biolgicos e importantes processos patolgicos conduziu a um crescente interesse na investigao dos mecanismos celulares que regulam o processo apopttico. A aplicao de metodologias capazes de identificar clulas apoptticas despoletou um enorme desenvolvimento de tcnicas. No entanto, as propriedades demonstradas por estes ensaios nem sempre se aplicam ao estudo de amostras tecidulares, pelo que a escolha dos diferentes mtodos dever ser criteriosamente avaliada, tendo em conta a aplicao pretendida e as alteraes morfolgicas que se pretendem detetar. Das vrias tcnicas disponveis para deteo da apoptose em tecidos, muitos investigadores recomendam o mtodo TUNEL, o qual se baseia na marcao de produtos endonucleossmicos resultantes da fragmentao do DNA. Outros mtodos histoqumicos tambm disponveis incluem a deteo do citocromo c, libertado da mitocndria ou a deteo das protenas pr e anti-apoptticas, Bax, Bidm e Bcl-2, envolvidas nos mecanismos intrnsecos da apoptose. Mais recentemente, a marcao de produtos especficos resultantes da clivagem de protenas alvo pelas caspases, tem vindo a ser considerada uma abordagem promissora. Como principal objectivo deste trabalho pretendeu-se avaliar a tcnica imunohistoquímica como mtodo de deteo da apoptose a nvel celular, em tecidos animais, tendo por base o mtodo TUNEL, o qual permite a deteo de fragmentos de DNA. Os resultados obtidos permitiram concluir que, apesar do mtodo TUNEL possuir as suas limitaes ao nvel da sensibilidade e especificidade, o mesmo constitui um mecanismo imunohistoqumico til na deteo de clulas apoptticas. Contudo, segundo opinio de vrios autores, adverte-se para a necessidade da aplicao de pelo menos dois mtodos imunohistoqumicos como forma de validar a ocorrncia do processo apopttico, razo pela qual se optou pela deteo do citocromo c citoslico como mtodo complementar, uma vez que a sua libertao para o espao citoslico se encontra implicada na ativao da apoptose.
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Este estudo visa analisar as interferencias do Banco Mundial na Educacao Brasileira a partir do estudo de seis teses (aqui identificadas pelas iniciais A,B,C, D, E e F) de doutorado relativas ao tema, defendidas na Universidade Estadual de Campinas (Unicamp), sendo quatro delas (A, B, C, e D) voltadas a area de educacao e duas (E e F) a area de Ciencias Sociais e Economia. O estudo das teses parte dos objetivos de cada uma, que podem ser resumidos da seguinte forma: a Tese A - A Mundializacao da Educacao: o Projeto Neoliberal de Sociedade e de Educacao no Brasil e na Venezuela. (MELO, 2003) -, sob a orientacao do Prof. Dr. Nilson Joseph Demange, teve como objetivo investigar o processo de mundializacao da educacao como elemento de uma nova fase de internacionalizacao e acumulacao capitalista, conduzida hegemonicamente pelos sujeitos politicos coletivos que assumem o projeto neoliberal de sociabilidade, especialmente o Fundo Monetario Internacional e o Banco Mundial, que buscam ser condutores das reformas estruturais para a America Latina e Caribe; a Tese B . O Capital Financeiro e a Educacao no Brasil. (DEITOS, 2005) -, sob a orientacao da Profa. Dra. Maria Elizabete Sampaio Prado Xavier, teve como objetivo definir quais as consequencias da consolidacao do projeto, para a redefinicao das politicas educacionais na America Latina e Caribe; a Tese C . Globalizacao e Descentralizacao: o Processo de Desconstrucao do Sistema Educacional Brasileiro pela Via da Municipalizacao. (ROSAR, 1995) -, sob a orientacao do Prof. Dr. Demerval Saviani, teve como objetivo analisar as reformas educacionais empreendidas no Brasil, no periodo de 1995-2002, particularmente a politica educacional nacional para o ensino medio e profissional, com financiamento externo do Banco Internacional para Reforma e Desenvolvimento (BIRD); a Tese D . As Politicas Educacionais para o Desenvolvimento e o Trabalho Docente. (SOUZA, 1999) ., sob a orientacao da Profa. Dra. Liliana Rolisen Petrilli Segnini, trata da politica educacional para o ensino de 1 grau, tracada segundo a visao de seu autor no ambito de projetos federais, com o objetivo de induzir a municipalizacao do ensino, transferindo encargos para o municipio, sem a realizacao de investimentos financeiros satisfatorios nessa instancia; a Tese E . Economia, poder e influencias externa: O Grupo Banco Mundial e as Politicas de Ajustes Estruturais na America Latina, nas Decadas de Oitenta e Noventa. (COELHO, 2002) ., sob a orientacao do Prof. Dr. Sebastiao Carlos Velasco e Cruz, teve como objetivo analisar as relacoes entre o projeto educacional implementado pelo governo estadual, no periodo entre 1995 e 1998 e suas concepcoes de politicas educacionais; a Tese F - A Questao Social e os Limites do Projeto Liberal no Brasil. (GIMENES, 2007) ., sob a orientacao do Prof. Dr. Carlos Alonso Barbosa de Oliveira, teve como objetivo analisar a relacao entre a economia, o poder politico e a influencia externa, focalizando o Grupo Banco Mundial e os programas de ajustamento estrutural na America Latina. Por fim este estudo mescla teses brasileiras advindas da area da Educacao e da Economia; foca o banco mundial e sua influencia no Brasil, oferecendo uma visao das conexoes logicas existentes entre elas. Como conclusao deste trabalho, apresentaremos as consideracoes finais de cada uma das teses, bem como as limitacoes e sugestoes para
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This research aims to make a reflective analysis about the academic production originated in the stricto sensu post graduation programs in the country, produced in the period of 1990 to 2010, in the field of History of Mathematics, especifically on works about the History of Mathematics in Mathematics education and that present pedagogical proposals that make use of the History of Mathematics in order to teach Mathematics. Defending the thesis that the researches on mathematics education with goals turned to the use of didactic proposals related to the history of mathematic that take in consideration the coherency between epistemological aspects inherent to mathematics history and anthological elements materialized on the conceptions of mathematics and mathematics history and of apprenticeship (implicitly or explicitly exposed) may originate significant contribution to the field of history of mathematics on education. Among these, nine were Masters Degree dissertations and five PHDs theses. The reflective analysis was accomplished from two matrixes; one from theoretical nature and the other, ontologic nature, elaborated from the pretexts of Sanches Gamboa, about the epistemological analysis from academic production in the field of Mathematics Education and the following theoretical perspectives in the field of History of Mathematics Education, that are: linear evolutionary theory, structural construtivist operative, evolutionary discontinuous, historical and socialcultural investigation and the use of activities estimulating the usage of verbal and nonverbal expressions. These perspectives were based on the works of Miguel and Miorim, Mendes and Radford. As results, we have detected some established dissonances between the categories related to theoretical and ontologic levels and the pedagogical proposal presented in these researches. On the other hand, we have discovered works that are able to establish consonances between the theoretical and ontological elements and the presented pedagogical proposal. These works carry significative contributions to the field of History of Mathematics applied to Mathematics pedagogical practice, inclusively presenting significative theoretical elements to the production of knowledge recognized as scientific in the Mathematics field
