Conserved modularity and potential for alternate splicing in mouse and human Slit genes

The vertebrate Slit gene family currently consists of three members;Slit1,Slit2 and Slit3. Each gene encodes a protein containing multiple epidermal growth factor and leucine rich repeat motifs, which are likely to have importance in cell-cell interactions. In this study, we sought to fully define and characterise the vertebrate Slit gene family. Using long distance PCR coupled with in silico mapping, we determined the genomic structure of all three Slit genes in mouse and man. Analysis of EST and genomic databases revealed no evidence of further Slit family members in either organism. All three Slit genes were encoded by 36 (Slit3) or 37 (Slit1 and Slit2) exons covering at least 143 kb or 183 kb of mouse or human genomic DNA respectively. Two additional potential leucine-rich repeat encoding exons were identified within intron 12 of Slit2. These could be inserted in frame, suggesting that alternate splicing may occur in Slit2 A search for STS sequences within human Slit3 anchored this gene to D5S2075 at the 5' end (exon 4) and SGC32449 within the 3' UTR, suggesting that Slit3 may cover greater than 693 kb. The genomic structure of all Slit genes demonstrated considerable modularity in the placement of exon-intron boundaries such that individual leucine-rich repeat motifs were encoded by individual 72 by exons. This further implies the potential generation of multiple Slit protein isoforms varying in their number of repeat units. cDNA library screening and EST database searching verified that such alternate splicing does occur.

Exogenous Slit2 does not affect ureteric branching or nephron formation during kidney development

In an attempt to elucidate the role of Slit2 invertebrate kidney development, the effect of adding exogenous human Slit2 protein (hSlit2) to developing murine metanephric kidney explants was examined. To confirm the activity of the recombinant Slit2 protein, neurons from 8 day old chick sympathetic nerve chain dorsal root ganglia were cultured with hSlit2 protein, which induced significant neurite branching and outgrowth. Using kidney explants as a model system, metanephric development in the presence of hSlit2 protein was examined. Addition of hSlit2 up to a final concentration of 1 mug/ml had no detectable effect on the formation of nephrons or on branching morphogenesis of the ureteric tree after 2 or 4 days in culture, as assessed via immunofluorescence for the markers WT1 and calbindin 28K respectively. Similarly, maturation of the nephrogenic mesenchyme occurred in a phenotypically normal fashion. In situ analysis of the Slit receptors, Robot and Robot, the vasculogenic markers VEGFA and Flk-1, and the stromal cell marker BF2 displayed no difference in comparison to controls.

Movement through slits: cellular migration via the Slit family

First isolated in the fly and now characterised in vertebrates, the Slit proteins have emerged as pivotal components controlling the guidance of axonal growth cones and the directional migration of neuronal precursors. As well as extensive expression during development of the central nervous system (CNS), the Slit proteins exhibit a striking array of expression sites in non-neuronal tissues, including the urogenital system, limb primordia and developing eye. Zebrafish Slit has been shown to mediate mesodermal migration during gastrulation, while Drosophila slit guides the migration of mesodermal cells during myogenesis. This suggests that the actions of these secreted molecules are not simply confined to the sphere of CNS development, but rather act in a more general fashion during development and throughout the lifetime of an organism. This review focuses on the non-neuronal activities of Slit proteins, highlighting a common role for the Slit family in cellular migration.

CRIM1 Regulates the Rate of Processing and Delivery of Bone Morphogenetic Proteins to the Cell Surface

The Crim1 gene is predicted to encode a transmembrane protein containing six von Willebrand-like cysteine-rich repeats (CRRs) similar to those in the BMP-binding antagonist Chordin (Chrd). In this study, we verify that CRIM1 is a glycosylated, Type I transmembrane protein and demonstrate that the extracellular CRR-containing domain can also be secreted, presumably via processing at the membrane. We have previously demonstrated Crim1 expression at sites consistent with an interaction with bone morphogenetic proteins (BMPs). Here we show that CRIM1 can interact with both BMP4 and BMP7 via the CRR-containing portion of the protein and in so doing acts as an antagonist in three ways. CRIM1 binding of BMP4 and -7 occurs when these proteins are co-expressed within the Golgi compartment of the cell and leads to (i) a reduction in the production and processing of preprotein to mature BMP, (ii) tethering of pre-BMP to the cell surface, and (iii) an effective reduction in the secretion of mature BMP. Functional antagonism was verified by examining the effect of coexpression of CRIM1 and BMP4 on metanephric explant culture. The presence of CRIM1 reduced the effective BMP4 concentration of the media, thereby acting as a BMP4 antagonist. Hence, CRIM1 modulates BMP activity by affecting its processing and delivery to the cell surface

The mouse secretome: functional classification of the proteins secreted into the extracellular environment

We have developed a computational strategy to identify the set of soluble proteins secreted into the extracellular environment of a cell. Within the protein sequences predominantly derived from the RIKEN representative transcript and protein set, we identified 2033 unique soluble proteins that are potentially secreted from the cell. These proteins contain a signal peptide required for entry into the secretory pathway and lack any transmembrane domains or intracellular localization signals. This class of proteins, which we have termed the mouse secretome, included >500 novel proteins and 92 proteins

Evaluation of an internet-based physical activity intervention: A preliminary investigation

The Internet has the potential for delivering innovative, interactive physical activity (PA) interventions to large numbers of people. This study was designed to test the efficacy. of ant Internet intervention that consisted of a Web site plus 12 weekly e-mail tip sheets, compared with a waiting list control group. The Internet intervention was theory based and emphasized clear, graphical presentation of PA information. Sixty-five (30 intervention and 35 control) sedentary adult employees of several large hospitals (9 men and 56 women) were randomly assigned to 1 of the 2 study arms. Of the 65 participants, 57 completed the 1-month follow-up, and 52 completed the 3-month follow-up. At both 1 and 3 months, those in the intervention group were significantly more likely to have progressed, in stage of motivational readiness for PA than participants in the control group: 1 month, chi(2)(1, N = 52) = 4.05, p

Estudo do efeito do Cidofovir na papilomatose laríngea recorrente em crianças: relato preliminar

OBJETIVO: Demonstrar o efeito do uso do Cidofovir (aplicações locais) em crianças com papilomatose laríngea recorrente (PLR), respeitando um protocolo adotado desde 2002 na Disciplina de Otorrinolaringologia Pediátrica da UNIFESP. FORMA DE ESTUDO: Preliminar/clínico-prospectivo. MATERIAL E MÉTODO: Foram incluídas inicialmente 5 crianças portadoras de PLR acompanhadas no nosso ambulatório de laringologia pediátrica. Estas já haviam sido submetidas há no mínimo 3 cirurgias prévias ao uso do Cidofovir, com confirmação anatomopatológica de papilomatose (critérios inclusão) e não apresentavam alterações renais ou hepáticas (critérios de exclusão). O protocolo consistia em exérese das lesões e aplicação de até 3ml Cidofovir (7,5mg/ml). O ciclo de tratamento consistia de, no mínimo, 3 aplicações, e a qualquer sinal de recidiva iniciava-se novo ciclo de aplicações. RESULTADOS: Observamos nas 5 crianças estudadas que as recidivas das lesões (antes do Cidofovir) ocorreram em intervalos muito curtos (1 a 3 meses) necessitando de intervenção cirúrgica. Após inclusão no protocolo ocorreu mudança na evolução da doença nas 5 crianças, pois permanecem por período de no mínimo 1 ano sem necessidade de cirurgia. Nenhuma criança apresentou nenhum tipo de alteração nos exames laboratoriais, e nenhum tipo de efeito colateral local ou sistêmico com a injeção local de Cidofovir. Os resultados deste estudo preliminar nos permitem observar que a aplicação local de cidofovir utilizado em crianças com PLR, respeitando o protocolo adotado, demonstrou um bom controle das recidivas das lesões durante o período estudado.

O tratamento da laringomalácia: experiência em 22 casos

A Laringomalácia é a causa mais comum de estridor na infância, com resolução espontânea até os 2 anos de idade na maioria dos casos. Cerca de 10% dos casos (laringomalácia severa) necessitam de intervenção cirúrgica. O diagnóstico é estabelecido com o exame de videonasofibroscopia, na qual se observa encurtamento da prega ariepiglótica, e/ou excesso de mucosa das aritenóides, e/ou queda da epiglote no sentido ântero-posterior. A etiologia ainda permanece desconhecida. OBJETIVO: Verificar as principais alterações clínicas e anatômicas assim como identificar os principais parâmetros clínicos no acompanhamento e na indicação cirúrgica de pacientes portadores de laringomalácia. FORMA DE ESTUDO: Estudo de coorte transversal. MATERIAL E MÉTODO: Foram incluídos neste estudo 22 crianças com diagnóstico de laringomalácia do ambulatório de otorrinolaringologia pediátrica da UNIFESP-EPM, entre janeiro de 2001 a dezembro de 2003, assistidas pelo mesmo examinador. RESULTADOS: Das 22 crianças com diagnóstico de laringomalácia, duas (9,1%) apresentavam laringomalácia severa com depressão torácica (tórax escavado). O estridor inspiratório e o encurtamento das pregas ariepiglóticas foram encontrados em todos pacientes. À polissonografia, nenhuma criança apresentou evento respiratório significativo durante o sono. As duas crianças com laringomalácia severa foram submetidas à supraglotoplastia com secção das pregas ariepiglóticas. CONCLUSÃO: O estridor respiratório e o encurtamento das pregas ariepiglóticas fazem parte preponderante do quadro clínico. A polissonografia não mostrou ser um parâmetro importante, nem para o acompanhamento clínico nem para a indicação cirúrgica, ao contrário da falta de ganho de peso e da presença de tórax escavado. A secção cirúrgica das pregas ariepiglóticas é efetiva e com baixo índice de morbidade.

Perfil psicológico de crianças submetidas a adenoidectomia e/ou amigdalectomia no pré e pós-operatório

A adenoidectomia e/ou amigdalectomia são os procedimentos cirúrgicos mais realizados na Otorrinolaringologia. Traumas psicológicos infantis podem ser decorrentes das cirurgias ou da anestesia. OBJETIVO: Avaliar a assistência pré-operatória dada aos pacientes pelo perfil psicológico das crianças e de seus responsáveis, no pré e pós-operatório. TIPO DE ESTUDO: Clínico retrospectivo. MATERIAL E MÉTODO: Realizou-se um levantamento dos prontuários dos pacientes (entre 2 e 12 anos) submetidos à adenoidectomia e/ou amigdalectomia de fevereiro a dezembro de 2003 e analisado o Protocolo de Assistência Psicológica Breve aplicado a esses pacientes e responsáveis. RESULTADO: Do total de 78 pacientes, 32 (41,0%) se encontravam na faixa etária pré-escolar e 46 (59,0%) em idade escolar. O sentimento predominante na idade pré-escolar foi o medo (59,4%), enquanto na escolar e de seus familiares foi a confiança: 63,0% e 48,72%, respectivamente. Quanto à expectativa do resultado cirúrgico tanto as crianças (73,08%) quanto seus familiares (96,15%) demonstraram otimismo. O temperamento emocional introvertido foi observado na maioria das crianças (52,56%) e dos acompanhantes (51,28%). A reação emocional delas e dos acompanhantes foi de tranqüilidade: 68,18% e 97,73%, respectivamente, no pós-operatório imediato. Todas as crianças encontraram-se, num parecer psicológico final, sem contra-indicações para a cirurgia. CONCLUSÃO: Independente do sentimento predominante ou do temperamento emocional, uma assistência pré-operatória faz-se necessária. Devemos ter um programa educacional contendo uma descrição verbal do procedimento juntamente com as sensações a serem experimentadas, associadas à interação dos pais com as crianças, visando diminuir o nível de ansiedade, a resposta ao estresse cirúrgico e possíveis seqüelas pós-operatórias.

Avaliação da pressão inspiratória em crianças com aumento do volume de tonsilas

Crianças com aumento do volume de tonsilas palatina e faríngea freqüentemente apresentam anormalidades respiratórias tais como ronco, respiração oral e apnéia do sono. Sabe-se que a obstrução de vias aéreas superiores e conseqüentemente a respiração oral podem resultar em problemas pulmonares. OBJETIVO: Avaliar a pressão inspiratória em crianças com obstrução de vias aéreas superiores devido ao aumento do volume de tonsilas. FORMA DE ESTUDO: clínico com coorte transversal. MATERIAL E MÉTODO: Nós avaliamos 37 crianças (4-13 anos, ambos os sexos) com aumento do volume de tonsilas que seriam submetidas à cirurgia de Adenoamigdalectomia na Divisão de Otorrinolaringologia da Universidade de São Paulo no mesmo período. O grupo controle foi composto de 28 crianças sem aumento de volume tonsilar que foram submetidas aos mesmos testes. A pressão Inspiratória foi obtida pelo uso do manovacuômetro. RESULTADOS: Observamos uma menor pressão inspiratória no grupo com aumento do volume de tonsilas. A média do grupo com aumento do volume das tonsilas foi 14,607 cm/H2O e do grupo normal foi de 27,580 cm/H2O (P< 0,001). CONCLUSÃO: O aumento de volume de tonsilas palatina e faríngea foi associado a uma menor pressão inspiratória, resultando em um aumento do esforço respiratório e do trabalho dos músculos envolvidos.

Aleitamento e hábitos orais deletérios em respiradores orais e nasais

OBJETIVO: A amamentação promove vários benefícios na criança, entre eles o favorecimento da respiração nasal. Neste estudo verificou-se a relação do padrão respiratório com o histórico de aleitamento e hábitos orais deletérios. FORMA DE ESTUDO: clínico com coorte transversal. MATERIAL E MÉTODO: A população foi constituída por 62 crianças, de 3 anos e 3 meses a 6 anos e 11 meses, as quais foram submetidas à avaliação otorrinolaringológica, para definição dos grupos respiradores nasais e orais e entrevista fonoaudiológica. A avaliação otorrinolaringológica constituiu-se dos seguintes exames: rinoscopia anterior, oroscopia e exame radiológico. Os pais das crianças foram questionados em relação à forma (natural e/ou artificial), e ao período de aleitamento, além da presença de hábitos orais deletérios (sucção e mordida). O teste Exato de Fisher foi utilizado para comparar os grupos em relação à presença ou ausência de hábitos e diferentes períodos de aleitamento. RESULTADOS: O período de aleitamento materno foi maior nos respiradores nasais concentrando-se no período de 3 a 6 meses de idade. Quanto ao uso de mamadeira, os resultados mostraram que a maioria das crianças de ambos os grupos utilizou-se deste tipo de aleitamento nos primeiros anos de vida, não apresentando diferença estatística entre os grupos (p=0.58). A presença de hábitos orais deletérios ocorreu de maneira marcante nos respiradores orais, evidenciando diferença estatisticamente significativa, entre os grupos, para os hábitos de sucção (p=0.004) e hábitos de mordida (p=0.0002). CONCLUSÃO: As crianças respiradoras orais apresentaram um menor período de aleitamento materno e um histórico de hábitos orais presentes comparadas às crianças respiradoras nasais.

Pesquisa do vírus herpes simples na saliva de pacientes com paralisia facial periférica de Bell

Os primeiros herpes-vírus a serem descritos foram os tipos 1 e 2, cuja denominação é herpes simplex 1 e 2 ou HSV-1 e HSV-2. Estes vírus possuem características biológicas particulares, tais como a capacidade de causar diferentes tipos de doenças, assim como estabelecer infecções latentes ou persistentes por toda a vida dos hospedeiros e de serem reativados causando lesões que podem se localizar no sítio da infecção primária inicial ou próxima a ele. Postula-se que a reativação deste vírus no gânglio geniculado esteja relacionada com a paralisia de Bell. Nesta situação, os vírus, que estariam latentes neste gânglio, sofreriam reativação e replicação difundindo-se pelo nervo facial e seus ramos, dentre eles o nervo corda do tímpano, que ao estimular a secreção salivar possibilitaria a identificação do DNA viral na saliva dos pacientes. Até recentemente, um grande número de pacientes eram diagnosticados como portadores de uma forma desta paralisia, chamada de idiopática ou de paralisia de Bell. Com o advento da técnica de estudo do DNA viral pelo método da reação da polimerase em cadeia (PCR), diversos autores encontraram DNA do vírus herpes simplex tipo I no líquido cefalorraquidiano, na secreção lacrimal, na saliva e nos gânglios geniculados de pacientes com paralisia de Bell. OBJETIVO: observar a prevalência do vírus herpes simplex tipo I pela técnica de PCR, na saliva de pacientes com PFP de Bell, relacionando-a com a evolução clínica destes casos. METODOLOGIA: Avaliamos 38 pacientes portadores de Paralisia Facial Periférica de Bell, que foram submetidos a anamnese, exame médico geral e otorrinolaringológico e coleta de saliva para detecção do DNA viral pela técnica de PCR. O grupo controle correspondeu a 10 adultos normais. RESULTADOS: Obtivemos positividade para o DNA viral em 11 casos dos 38 avaliados, o que corresponde a 29% da amostra. Este resultado foi estatisticamente significante se comparado ao grupo controle, no qual não foi obtido nenhum caso de positividade. CONCLUSÃO: Concluiu-se que a presença do HSV-1 na saliva de pacientes portadores de PFP de Bell indica que a reativação viral pode ser a etiologia desta doença. A detecção do vírus na saliva destes pacientes não influencia o prognóstico da doença.

Achados polissonográficos em crianças portadoras de laringopatias

O exame diagnóstico padrão-ouro para SAOS na infância é a polissonografia. Quando pode ser efetuado, a polissonografia separa com clareza portadores de ronco primário de pacientes com apnéia (obstrutiva, central e mista) do sono. A causa mais freqüente da SAOS na infância é a hipertrofia adenoamigdaliana. Laringomalácia é a causa mais comum de estridor na infância, porém sua fisiopatologia permanece desconhecida. Entre as teorias mais aceitas estão a imaturidade do arcabouço cartilaginoso da laringe e/ou a imaturidade neuromuscular. OBJETIVO: Nossa proposta foi descrever os achados polissonográficos de crianças portadoras de laringomalácia e outras alterações laríngeas isoladas, ou seja, sem alterações nas vias aéreas superiores. MÉTODOS: Foram selecionadas 29 crianças portadoras de alterações laríngeas exclusivas. Todas foram submetidas a exame otorrinolaringológico, nasofibrolaringoscopia e polissonografia. Foram tabulados dados relativos à idade, nasofibrolaringoscopia e polissonografia. Para análise, as crianças foram separadas em 2 grupos: portadores de laringomalácia e portadores de outras doenças laríngeas. RESULTADOS: Dentre as 18 crianças com diagnóstico de laringomalácia, 18 apresentaram eventos respiratórios do tipo central, sendo a maioria dos episódios associados à dessaturação de oxigênio e alguns à bradicardia. Nesse mesmo grupo, 3 crianças apresentaram apnéia do tipo obstrutivo. Por outro lado, as 11 crianças portadoras de outras alterações laríngeas não apresentaram predominância entre um tipo ou outro de apnéia, 4 apresentaram eventos respiratórios do tipo central, 2 do tipo obstrutivo. CONCLUSÃO: A maioria dos pacientes acometidos por laringomalácia apresentou eventos respiratórios do tipo central quando avaliados pela polissonografia. Já os pacientes com outras doenças laríngeas não apresentaram predominância entre um tipo ou outro de apnéia.

Refluxo gastroesofágico em pacientes portadores de papilomatose recorrente de laringe

A cada ano aumentam as evidências de que o refluxo gastroesofágico seja um fator que contribui para as desordens de vias aéreas, principalmente na população pediátrica, podendo gerar sintomas respiratórios como estridor, tosse crônica, pneumonias de repetição e bronquite crônica. Estudos recentes têm sugerido que a associação entre papilomatose laríngea recorrente e refluxo gastroesofágico possa ser um fator determinante na recorrência e crescimento dos papilomas. OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi verificar a freqüência e a intensidade do refluxo gastroesofágico em crianças portadoras de Papilomatose Laríngea Recorrente (PLR). MATERIAL E MÉTODOS: Foram selecionadas 10 crianças portadoras de papilomatose laríngea recorrente, de ambos os sexos, com idade entre 3 e 12 anos. Todas foram submetidas a pH-metria de 24 horas com duplo canal para avaliação da presença e intensidade de refluxo gastroesofágico. RESULTADOS: Cinqüenta por cento dos pacientes apresentaram evidências de refluxo gastroesofágico patológico em nível do esfíncter distal, e 90% apresentou refluxo proximal patológico. CONCLUSÃO: A freqüência da associação entre refluxo gastroesofágico proximal em pacientes portadores de papilomatose recorrente de laringe é extremamente alta.