Expression of the sigma35 and cry2AB genes involved in Bacillus thuringiensis virulence

Muitos genes estão envolvidos nos mecanismos de esporulação da bactéria Bacillus thuringiensis. A regulação e expressão desses genes resultam em uma produção massiva da proteína Cry, responsável pela morte das larvas de muitos insetos. Neste trabalho monitorou-se a expressão de genes de Bacillus thuringiensis, ao longo de três fases de seu desenvolvimento. Foram construídos macroarrays de DNA dos genes selecionados, cujas seqüências estão disponibilizadas no GenBank. Estes genes foram hibridizados com cDNAs obtidos de B. thuringiensis kurstaki HD-1. As sondas de cDNA foram sintetizadas a partir da transcrição reversa do RNA da bactéria, extraído durante as fases de crescimento logarítmico, estacionária e esporulativa, marcadas com 33PadCTP. A expressão diferencial encontrada foi significativa para dois genes de B.thuringiensis, um relacionado aos fatores sigma (sigma35) e outro ao gene cry (cry2Ab). Detectaram-se diferenças entre as médias de expressão do fator sigma e do gene cry2Ab. Os valores máximos de expressão diferencial foram obtidos para o gene codificador do fator sigma35 na fase log e na fase esporulativa. Na análise de médias observou-se expressão do gene cry2Ab apenas na fase log; no entanto, de forma bem mais baixa quando comparado com a expressão de sigma35, nas três fases.

Methodology for fast evaluation of Bacillus thuringiensis crystal protein content

O desenvolvimento da produção e uso do Bacillus thuringiensis no Brasil em escala comercial enfrenta certas dificuldades, entre elas o estabelecimento de metodologias para a quantificação de produtos tóxicos a serem comercializados. Atualmente, a quantidade de toxinas é expressa como porcentagem do total de proteínas presentes em amostras em consideração. Tal metodologia, entretanto, não mede a quantidade real de uma determinada proteína presente em um produto qualquer, além do fato de diferentes linhagens bacterianas possuírem diferentes genes codificadores para endotoxinas e mesmo para b-toxina. Desde que os diferentes tipos de toxinas apresentam diferentes características antigências, este trabalho tem como objetivo a utilização de técnicas imunológicas para quantificar específicamente o conteúdo de proteína cristal presente em diferentes amostras. A proteína cristal produzida pela subespécie B. thuringiensis var. israelensis foi purificada por ultracentrifugação e utilizada para imunizar coelhas e produzir soros hiperimunes. Tais soros foram posteriormente usados para avaliar o nível de proteína cristal em bioinseticidas comerciais e em culturas de laboratório desta bactéria utilizando-se a técnica do imunodot. Os resultados foram obtidos por comparação de reações com concentrações conhecidas de proteína cristal permitindo assim avaliar com segurança os níveis desta proteína em várias preparações.

Identificação de genes cry de Bacillus thuringiensis no controle de Sphenophorus levis, o bicudo da cana-de-açúcar

A bactéria B. thuringiensis caracteriza-se pela produção de proteínas tóxicas a representantes de diversas ordens de insetos, as quais são codificadas por genes cry. Este trabalho foi realizado com objetivo de selecionar isolados de B. thuringiensis, por meio da caracterização morfológica e molecular, identificando as diferentes subclasses dos genes cry3 e cry35 e determinar a patogenicidade contra Sphenophorus levis, uma das mais importantes pragas da cultura da cana-de-açúcar. Foram utilizados 1163 isolados de B. thuringiensis e com a observação em microscópio com contraste de fases foram confirmadas como pertencentes à espécie de B. thuringiensis. O material genético foi purificado pela matriz de troca iônica Instagene Matrix e submetido a PCR com iniciadores gerais cry3 e cry35 identificando-se 30 isolados contendo genes com potencial para o controle de coleópteros, os quais juntamente com as linhagens-padrão de B. thuringiensis var. tenebrionis, B. thuringiensis var. morrissone e B. thuringiensis var. tolworthi foram utilizados para a realização do bioensaio. Através de análise discriminante alocaram-se os isolados em quatro grupos quanto à toxicidade de B. thuringiensis. Os grupos ficaram assim definidos: um grupo que promovem até 10% de mortalidade contendo as testemunhas e duas linhagens;um grupo que causou 39% de mortalidade contendo três linhagens padrão e dez isolados; um grupo com 52% de mortalidade contendo treze isolados e um grupo com 70% de mortalidade contendo cinco isolados, os quais devem ser considerados promissores no controle biológico de S. levis.

Efeito de extratos aquosos de plantas na oviposição da traça-das-crucíferas, em couve

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Detecção, transmissão e efeito de Xanthomonas campestris pv. campestris na qualidade fisiológica de sementes de brócolis

A detecção, a transmissão e o efeito de Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) na qualidade fisiológica de sementes de brócolis (Brassica oleracea var. italica) foram avaliados, a partir de sementes obtidas de plantas (Baron, Flórida, Hana Midori Sakata, Precoce Piracicaba de Verão, Ramoso Santana e Sabre) inoculadas com a bactéria, em condições de campo. Para a detecção do patógeno nas sementes foram utilizados os meios de cultura semi-seletivos: SX ágar, NSCAA e BSCAA; a taxa de transmissão da bactéria pelas sementes às plântulas foi avaliada usando semeadura em areia e meio de cultura contido em tubo de ensaio. Para a avaliação da qualidade fisiológica de sementes foram realizados o teste padrão de germinação e os testes de vigor: envelhecimento acelerado, índice de velocidade de emergência, crescimento de plântulas e massa seca. de acordo com os resultados, o meio de cultura semi-seletivo NSCAA foi mais eficaz para detectar Xcc em sementes de brócolis; não houve diferença significativa entre os genótipos na taxa de transmissão da bactéria pelas sementes e Xcc não afetou a germinação e o vigor das sementes.

Efeito da aplicação de extratos aquosos em couve na alimentação de largatas de Ascia monuste orseis

Os efeitos de extratos aquosos de amêndoas de Azadirachta indica e frutos de Sapindus saponaria, aplicados em discos de folhas de couve (Brassica oleracea var. acephala) nas concentrações de 0,0117% e 1,0342% (p/v), respectivamente, foram estudados sobre a alimentação das lagartas de Ascia monuste orseis. Avaliou-se a atratividade e o consumo de área foliar de lagartas de primeiro e terceiro ínstar durante 24 horas, em condições de laboratório (T = 25 ± 2ºC, UR = 60 ± 10% e fotofase = 12 horas). Nos testes com e sem chance de escolha, para lagartas de primeiro ínstar e teste sem chance de escolha para lagartas de terceiro ínstar, não houve diferença quanto à atratividade das lagartas. No teste com chance de escolha para lagartas de terceiro ínstar, houve menor atratividade das lagartas pelos discos de folhas tratadas com S. saponaria, diferindo da testemunha. No decorrer de 24 horas de avaliações, pode-se observar 58,3% de lagartas atraídas na testemunha, não diferindo de A. indica e diferindo de S. saponaria, com 39,3% e 2,4% das lagartas atraídas, respectivamente. Quanto ao consumo de área foliar, o extrato de S. saponaria diminuiu o consumo de lagartas, em todos os testes realizados. Quando não tinham opção de escolha para se alimentar de folhas sem os extratos, as lagartas consumiram as folhas tratadas nas concentrações testadas, porém em menor quantidade. Os extratos testados neste experimento demonstram ter efeitos sobre a alimentação das lagartas de A. monuste orseis, possivelmente com propriedades deterrentes e/ou supressoras de alimentação.

Densidade populacional e época de plantio no crescimento e produtividade da couve-flor cv. verona 284

To study plant growth and yield of cauliflower, two field trials were carried out: the first spring-summer (Oct. 07, 2006 to Jan. 28, 2007) and the second autumn-winter (Apr. 04, 2007 to Jul. 09, 2007). The experimental design was randomized complete blocks in 4 x 4 factorial design with three replications. The following factors: line spacing (0.6, 0.8, 1.0 and 1.2 m) and plant spacing (0.4, 0.5, 0.6 and 0.7 m). The used cultivar was cv. Verona 284. The characteristics, number of leaves by plant, diameter of stem, diameter of inflorescence, inflorescence mass and yield were evaluated. With the reduction in spacing, were observed lower numbers of leaves, stem diameter, diameter and mass of the inflorescence, but there was an increase in yield. The maximum yield (23 t ha(-1)) was obtained with 0.6 x 0.4 m, ie, in higher plant population (41,667, plants ha(-1)).

Crescimento e acúmulo de nutrientes em couve-flor Verona

This work consisted in an experiment installed at Unesp, Campus of Jaboticabal, from January to May 2006 and the objective was to evaluate dry matter accumulated and nutrients by cauliflower, hybrid Verona, during the cycle. The experimental design was randomized blocks, in plots subdivided on the time, with three replications. The plants were sampled at 30, 45, 60, 75, 90, 105 and 120 days after sowing (DAS), and were evaluated: number of leaves, stem length, stem and curd diameter, leaf area, stem, leaves and curd dry matter and accumulate of nutrients. The cauliflower growth had four different phases. In the first one, from 0 to 30 DAS, was correspondent of the period from sowing to transplant. In the second phase, from 30 to 75 DAS, the dry matter accumulated in leaves and stem were small in comparison with the total. The third growth phase, from 75 to 97 DAS, was characterized with great dry matter accumulated, increase in the number of leaves and leaf area. This phase ended with visualization of the curd, and was the beginning to the fourth phase, from 97 to 120 DAS. In the culture estimated in 25,000 plants/ha and productivity of 25.2 t ha(-1) the accumulated quantities with of N, P, K, Ca, Mg and S were, corresponding to, 224.5; 54; 156; 136; 21.75; 63.5 kg ha(-1) and 714.8; 270; 236.7 and 33.3 g ha(-1), corresponding to Fe, Mn, Zn and Cu.

Curva de crescimento e acúmulo de matéria seca em couve-flor cultivada em substrato

Aiming to evaluate the curve of growth and dry matter accumulation in cauliflower cv. Verona in commercial substrate for vegetables Plantmax (R), an experiment was conducted in a greenhouse at UNESP, Jaboticabal, SP. The experimental design was randomized blocks with six treatments, five replicates, each plot had a plan. The treatments consisted of sampling times (20, 30, 40, 50, 60 and 70 days after transplantation). Evaluations of plant height, leaf number, stem diameter, leaf area, dry matter of shoot, root and whole plant, and fresh weight of the inflorescence. Furthermore, calculated the relative growth rate (RGR) of leaves, stems, roots, flowers and whole plant, presented in g day(-1) plant(-1). The hybrid of cauliflower 'Verona' shows initial slow growth, stepping up from 30 days after transplantation. The maximum accumulation of dry matter per plant was 87g at 70 DAT, with the participation of sheets of 53.8%, stem 9.9%, 30.7% of inflorescence and root 6.5%. The cultivation cauliflower Verona in substrate showed high accumulation of dry Inflorescence.

Vegetative propagation of bauhinia x blakeana, an ornamental sterile tree

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Composto orgânico na produção e qualidade de sementes de brócolis

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Composto orgânico no potencial fisiológico de sementes de brócolis após o armazenamento

The study was carried out with the objective to evaluate the broccoli seeds (cultivar Ramoso Santana) germination and vigor from plants cultivated with different organic compost levels and after storage in dry chamber. At seed production stage, the experiment was conducted in randomized complete blocks design, with five treatments (0; 30; 60; 90 and 120 t ha(-1) of Biomix (R) organic compost) and four replications. Soon after harvesting and after 12 and 24 months of conservation in dry chamber room (20 degrees C and 40% relative humidity) it was evaluated germination, following seed analisys rules, and vigor (first count of germination and germination speed index - IVG). There were no differences in germination and vigor in seeds as soon as they were harvested and after 12 month of storage. After 24 months of storage, the lesser the organic compost rates, the lesser seed germination and IVG, with respective values, without compost, of 69% and 12,3. For another hand, the highest values for germination and IVG, 82% and 16,1, respectively, were obtained with the highest rate of organic compost (120 t ha(-1)).

Produtividade da couve-flor em função da idade de transplantio das mudas e tamanhos de células na bandeja

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Produção de couve-brócolo em função do tipo de bandeja e idade das mudas

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Produção e qualidade de couve-flor cultivar Teresópolis Gigante em função de doses de nitrogênio

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)