Characterisation of dystrophin in carriers of Duchenne muscular dystrophy.

Dystrophin, the protein product of the Duchenne muscular dystrophy (DMD) gene, was studied in needle biopsy samples taken from the quadriceps muscle of 15 asymptomatic carriers of DMD (13 adults and 2 young girls) and one symptomatic adult carrier. Antibodies to N- and C-terminal regions of dystrophin were used for both Western blot analysis and immunocytochemistry and a monoclonal antibody to beta-spectrin used to assess membrane integrity. All asymptomatic adult carriers showed some abnormality in dystrophin immunostaining but very few negative fibres were present. A clear mosaic of dystrophin positive and negative fibres was seen only in the adult symptomatic carrier and the two young girls. On a Western blot, all carriers studied had dystrophin of normal molecular weight, but most had reduced abundance. In adult carriers, the amount of dystrophin relative to normal controls varied, but it was unrelated to age, serum creatine kinase (CK) levels or to the degree of pathology. Carriers with normal CK showed abnormalities in dystrophin expression. The dystrophin immunoblotting profile of the 2 young girls was very similar to that of their mothers, but the mosaic pattern of immunostaining was not apparent in the older carriers. In conclusion, dystrophin immunostaining and Western blot analysis of biopsy samples from asymptomatic carriers is often abnormal and they may be useful additional aids for establishing carrier status, particularly in younger girls.

Characterisation of dystrophin in fetuses at risk for Duchenne muscular dystrophy.

Dystrophin, the product of the Duchenne muscular dystrophy (DMD) gene, was studied in muscle from 16 human fetuses at risk for the disease. Eleven high risk (greater than 95% probability) and 5 low-risk (less than 25% probability) fetuses were studied with antibodies raised to different regions of the protein. All low-risk fetuses showed a similar pattern to that of normal fetuses of a comparable age: using Western blot analysis, a protein was detected of similar size and abundance to that of normal fetuses (i.e. smaller molecular weight than that of adult muscle); immunocytochemistry showed uniform sarcolemmal staining in fetuses older than 18 weeks gestation and differential staining of myotubes at different stages of development (distinguished by size) in younger fetuses (less than 15 weeks gestation). In contrast, Western blot analysis of high-risk fetuses detected low levels of dystrophin in 4 cases; 7 fetuses had no detectable protein. Immunocytochemistry with some dystrophin antibodies showed weak staining of the sarcolemma and around central nuclei in younger fetuses; in older fetuses there was little sarcolemmal staining with any antibody other than occasional positive fibres. These results indicate that careful study of dystrophin in fetuses at risk for DMD can be used to establish the clinical phenotype and provide additional information for future family counselling.

Dystrophin analysis using a panel of anti-dystrophin antibodies in Duchenne and Becker muscular dystrophy.

Dystrophin, the protein product of the Duchenne muscular dystrophy (DMD) gene, was studied in 19 patients with Xp21 disorders and in 25 individuals with non-Xp21 muscular dystrophy. Antibodies raised to seven different regions spanning most of the protein were used for immunocytochemistry. In all patients specific dystrophin staining anomalies were detected and correlated with clinical severity and also gene deletion. In patients with Becker muscular dystrophy (BMD) the anomalies detected ranged from inter- and intra-fibre variation in labelling intensity with the same antibody or several antibodies to general reduction in staining and discontinuous staining. In vitro evidence of abnormal dystrophin breakdown was observed reanalysing the muscle of patients, with BMD and not that of non-Xp21 dystrophies, after it has been stored for several months. A number of patients with DMD showed some staining but this did not represent a diagnostic problem. Based on the data presented, it was concluded that immunocytochemistry is a powerful technique in the prognostic diagnosis of Xp21 muscular dystrophies.

Manifesting carriers of Xp21 muscular dystrophy; lack of correlation between dystrophin expression and clinical weakness.

Ten females presenting with muscle weakness and a raised serum creatine kinase revealed abnormalities in the expression of dystrophin in their muscle biopsies and were diagnosed as manifesting carriers of Xp21 Duchenne/Becker muscular dystrophy. Seven cases, aged 3-22 yr at the time of biopsy, had a variable proportion of dystrophin-deficient fibres and an abnormal expression on immunoblot. These were confidently diagnosed as manifesting carriers. Results in the remaining three cases, aged 8-10 yr, were less clear-cut. Dystrophin expression on immunoblots was slightly reduced and some unevenness and reduction of immunolabelling was seen on sections, but dystrophin-deficient fibres were not a feature of these cases. The weakness in the ten carriers ranged from minimal to severe and there was no correlation between the degree of weakness and the number of dystrophin-deficient fibres. Two minimally weak girls had a high proportion of dystrophin-deficient fibres. Our results show that analysis of dystrophin expression is useful for the differential diagnosis of carriers of Xp21 dystrophy and autosomal muscular dystrophy, but that dystrophin expression does not correlate directly with the degree of clinical weakness.

Muscular weakness in the mdx mouse.

mdx mice are believed to be virtually free from neuromuscular symptoms, despite the presence of a degenerative/regenerative process that involves all skeletal muscles. We analyzed both the spontaneous motility and treadmill motor activity of mdx mice aged 15 days to 6 months. Our results indicate that there is an early period, between the end of the second and up to the fifth week of life, when mdx mice experience extreme weakness. After this critical period, both spontaneous motility and endurance of mdx mice, although lower than those of controls, do not show statistically significant differences up to 6 months of age. We also carried out a detailed histological analysis of proximal and distal muscle groups in mdx mice during this early critical motility period. The occurrence of extensive necrosis followed by regeneration and involving proximal muscles before distal ones was documented in mice as young as 16-17 days of age and reached a peak at day 18. We conclude that dystrophin deficiency induces muscle degeneration and significant weakness in mdx mice, but only in an early period. Later on, during development, mdx mice adapt to the lack of this protein and do not show detectable in vivo functional muscle impairment up to 6 months of age.

Transcriptional regulation differs in affected facioscapulohumeral muscular dystrophy patients compared to asymptomatic related carriers

Facioscapulohumeral muscular dystrophy (FSHD) is a progressive muscle disorder that has been associated with a contraction of 3.3-kb repeats on chromosome 4q35. FSHD is characterized by a wide clinical inter- and intrafamilial variability, ranging from wheelchair-bound patients to asymptomatic carriers. Our study is unique in comparing the gene expression profiles from related affected, asymptomatic carrier, and control individuals. Our results suggest that the expression of genes on chromosome 4q is altered in affected and asymptomatic individuals. Remarkably, the changes seen in asymptomatic samples are largely in products of genes encoding several chemokines, whereas the changes seen in affected samples are largely in genes governing the synthesis of GPI-linked proteins and histone acetylation. Besides this, the affected patient and related asymptomatic carrier share the 4qA161 haplotype. Thus, these polymorphisms by themselves do not explain the pathogenicity of the contracted allele. Interestingly, our results also suggest that the miRNAs might mediate the regulatory network in FSHD. Together, our results support the previous evidence that FSHD may be caused by transcriptional dysregulation of multiple genes, in cis and in trans, and suggest some factors potentially important for FSHD pathogenesis. The study of the gene expression profiles from asymptomatic carriers and related affected patients is a unique approach to try to enhance our understanding of the missing link between the contraction in D4Z4 repeats and muscle disease, while minimizing the effects of differences resulting from genetic background.

Diagnosis of limb-girdle muscular dystrophy 2A by immunohistochemical techniques

The Western blot technique is currently the standard detection method for suspected limb girdle muscular dystrophy (LGMD) 2A (calpainopathy). This is the first report in the English literature of the successful application of immunohistochemical techniques to support a diagnosis of LGMD 2A. This approach is straightforward and appears to be reasonably specific. We propose that immunohistochemical methods should be re-evaluated for the screening of undiagnosed patients with suspected LGMD 2A.

Inovações na linguagem tipográfica: a tensão entre o visual e o verbal na letra fantasia

Dissertação apresentada para obtenção do título de mestre do Programa de Pós-Graduação em Comunicação da Universidade Municipal de São Caetano do Sul

Solubilizacao e interacao de pigmentos com solventes organicos e agentes tenso-ativos

A Mg e Mn-Ftalocianina (Mg e Mn-Pc) foram solubilizados à 25°C em dimetilsulfóxido (DMSO); N, N-dimetilacetamida (DMA); N,N-dimetilformamida (DMF); N-metil-formamida, formamida, piridina, o-diclorobenzeno, monoclorobenzeno, tolueno, metanol, etanol, propanol-1, propanol-2, butanol-1 e octanol-1. Alguns valores representativos obtidos para o logarítimo da absortividade molar (E) da Mn-Pc, são os seguintes: o-diclorobenzeno (E = 4,94); DMSO (E = 4,39); octanol-1 (E = 3,90). Valores correspondentes para Mg-Pc são: o-diclarobenzeno (E = 4,93); DMSO (E = 5,22) e Octanol-1 ( E = 5,06). Em função de interação com solventes, pode-se classificar a Mg-Pc como um indicador básico e a Mn-Pc como indicador ácido. Os pigmentos Mg e Mn-Pc foram também solubillzados em soluções aquosas contendo vários surfatantes à 25°C. A Mg-Pc apresentou solubilidade significativa em água contendo brometo de cetiltrimetilamônio (CTAB), Brij-35, cloreto de cetilpiridinio (CPC1), brometo de cetilpiridínio (CPBr,) Triton X-100, cloreto de metildodecilbenziltrimetilamônio, brometo de cetildimetiletilamõnio e brometo de laurilisoquinolínio. A Mn-Pc foi solúvel em soluções aquosas de Brij-35 e Triton X-100. Em função de sua interação com surfatantes a Mg-Pc é classificada como corante catiônico e a Mn-Pc como corante aniônico. O corante comercial quinóide Oil Blue A [1,4-di(isopropilarnina)-antraquinona - 9,10 foi solubilizado à 25°C em DMF, DMSO, DMA, monoclorobenzeno, benzeno, tolueno, piridina, metanol, etanol, propanol-1, propanol-2, butanol-1 e octanol-1. Foi também solubilizado em soluções aquosas de surfatantes, tais como sódio lauril-sulfato (NaLS), cloreto de cetiltrimetilamônio (CTAB), brometo de cetildimetiletilamônio, Triton X-100, cloreto de cetilpiridínio (CPCl), Brij-35, cloreto de rnetildodecilbenziltrimetilamônio e brometo de laurilisoquinolínio. Em função de suas interações com os solventes o corante é um indicador ácido-básico pouco sensível e em função de sua interação com surfatantes é um corante catiônico. 0s resultados experimentais apresentam importância teórica e prática considerando sistemas que envolvem armazenamento e transferência de energia, compostos porfirínicos, fotossíntese, fotocondutores, coletores solares, semi-condutores e processos de embelezamento e proteção de superficies de vários materiais.

Um modelo elasto-viscoplástico para análise de peças de concreto estrutural, submetidas a estados planos de tensão, através do método dos elementos finitos

O objetivo deste trabalho é desenvolver um modelo computacional, baseado no método dos elementos finitos, para o estudo de peças de concreto armado e protendido submetidas a estados planos de tensão. O estudo abrange situações de carga de curta e longa duração, onde consideram-se fluência e retração do concreto e relaxação do aço. São utilizados modelos constitutivos elasto-viscoplásticos para descrever o comportamento dos materiais. Implementou-se um modelo de camadas superpostas para melhor representar o comportamento do concreto, onde o material é composto de diversas camadas que sofrem a mesma deformação. Cada camada possui diferentes características materiais e a tensão total é obtida pela soma das diferentes contribuições de cada camada. Para a fissuração da concreto, utilizou-se um modelo de fissuras distribuídas, que leva em conta a contribuição do concreto entre fissuras. Tanto a amadura passiva como a de pratensão são introduzidas no modelo como uma linha de material mais rígido dentro do elemento de concreto. Os deslocamentos ao longo da armadura são referenciados aos deslocamentos nodais do elemento de concreto. Deste modo, obtém-se uma matriz de rigidez para a armadura com as mesmas dimensões que a matriz de rigidez do elemento de concreto, A matriz de rigidez do elemento concreto-aço é a soma das duas matrizes. Considera-se aderência perfeita entre o concreto e o aço. Os resultados obtidos com esse programa computacionai são comparados com valores experimentais disponíveis.

O efeito do treinamento e destreinamento na força muscular de meninos pré-púberes

A treinabilidade de força em crianças tem sido bastante explorada, mas ainda existem alguns questionamentos: O quanto a força decresce quando a criança interrompe o treinamento? O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento da força muscular dinâmica isotônica (1-RM), pico de torque isocinético e pico de torque isométrico, na extensão de joelho (EJ) e na flexão de cotovelo (FC) de meninos durante 24 semanas, sendo 12 semanas de treinamento e 12 de destreinamento de força. Um grupo experimental (EX) de 7 meninos (9,4±1,6 anos) pré-púberes treinou de forma dinâmica, três vezes por semana, durante 12 semanas, com intensidade entre 60 e 85% do teste de 1-RM, obtendo um aumento de 78% e 67% na força de 1-RM da EJ e da FC respectivamente. No grupo controle (CO) participaram 7 meninos pré-púberes, pareados ao EX pela idade (9,7±1,7 anos). Eles não alteraram significativamente a força nas primeiras 12 semanas, mas, ao final das 24 semanas, aumentaram a força de 1-RM em 41% e 53% na EJ e FC, respectivamente. Após 12 semanas de destreinamento, a força absoluta de 1-RM da EJ e da FC do grupo EX apresentou uma queda estatisticamente não significativa de 33% e 21%, respectivamente. Quando corrigida pelo peso corporal e massa corporal magra (MCM), a força do grupo EX de 1-RM da EJ diminuiu 41% e 36% (p<0,05) respectivamente. Na FC, a força não apresentou redução significativa Os grupos EX e CO, não apresentaram alterações estatisticamente significativas (p>0,05) durantes as 24 semanas de estudo nos picos de torque isocinético e isométrico, os resultados foram os seguintes: no grupo EX a força isocinética de EJ em 60° e 90° foram 66,0±25,7 Nm para 79,8±26,1 Nm e 62,0±29,2 para 76,8±30,6 Nm respectivamente; e na FC em 60° e 90°, 16,0±8,9 para 13,3±8,2 Nm e 16,1±10,5 para 15,7±6,2 Nm respectivamente. Na força isométrica do grupo EX na EJ em 60° e 45° os resultados foram os seguintes: 96,9±35,6 para 108,3±61,9 Nm e 87,0±41,7 para 96,3±60,3 Nm respectivamente. Na FC em 60° e 90° de 20,3±7,1 para 22,5±8,2 Nm e de 21,7±6,7 para 21,5±9,1 Nm respectivamente. O grupo CO apresentou os seguintes resultados na força isocinética de EJ nos ângulos de 60° e 90°, de 55,1±14,4 para 76,6±15,4 Nm e 56,4±10,2 para 73,1±13,3 respectivamente. Na FC, de 13,1±3,9 para 13,9±3,6 Nm e 11,4±4,4 para 10,9±4,1 Nm em 60° e 90° respectivamente. Na força isométrica de EJ em 60° e 45° os resultados foram: 89,4±13,2 para 101,9±17,4 Nm e 73,7±10,5 para 84,1±10,8 respectivamente; e na FC em 60° e 90° foram de 16,1±4,8 para 17,7±4,7 e de 17,1±3,1 para 20,7±4,5 Nm respectivamente. Os resultados deste estudo mostram que, após 12 semanas de destreinamento, a queda de força de 1-RM, foi significativa quando expressada em valores corrigidos pelo peso corporal e MCM, apenas nos membrosinferiores. O processo de crescimento e maturação pode contribuir para tornar menos evidente a redução da força durante o destreinamento.

Efeitos hidrostáticos e da posição do indivíduo na tensão arterial e freqüência cardíaca

O objetivo deste estudo foi investigar as alterações de freqüência cardíaca ( FC) e tensão arterial ( TA) em terra(TER) e na água, com a face emersa (AFE) e submersa (AFS), em diferentes posições. Participaram deste estudo dez homens (idade média de 22,6 anos; d.p. = 2,67) e dez mulheres, com média de idade de 21,1 anos (d.p. = 1,97). A TA foi medida por auscultação com um esfigmomanômetro adaptado e a FC por auscultação, com contagem dos batimentos num período de 30s. As medidas em terra foram realizadas nas posições supina (SUP), sentada (SENT) e ortostática (ORTOS) com dois minutos de intervalo entre as posições, sendo o mesmo procedimento repetido com os sujeitos na AFE AFS. O nível de significância em todos os casos foi de 5%. Em terra, comparando-se a FC nas diferentes posições constatou-se uma diminuição significativa da posição ORTO para SENT e da ORTO para SUP em ambos sexos, e também da SENT para SUP para as mulheres. Na AFE, comparando-se a FC em diferentes posições, constatou-se uma diminuição significativa da ORTO para a SUP em ambos os sexos e da SENT para SUP para as mulheres. Na AFS, constatou-se uma diminuição significativa da ORTO para SENT e ORTO para SUP para os homens e da SENT para SUP entre mulheres. Comparando-se a FC mantendo-se a posição e variando-se o meio constatou-se o seguinte. Na posição ORTO houve diminuição significativa da TER para AFE e AFS, para ambos os sexos e de AFE para AFS nos homens Na posição SENT, houve diminuição da TER para AFE e AFS, somente para as mulheres. Na SUP, houve diminuição da TER para AFE e desta para AFS, somente para as mulheres. Na TAM, mantendo-se a posição ORTO e variando-se o meio houve uma diminuição significativa da TER para AFE e AFS em ambos os sexos. Mantendo-se a posição SENT e a SUP, houve diminuição significativa entre TER e AFE, AFS apenas para os homens. Nos resultados a TAM, mantendo-se o meio e variando-se as posições não houve diferença significativa.