A cassette ligation strategy with thioether replacement of three Gly-Gly peptide bonds: Total chemical synthesis of the 101 residue protein early pregnancy factor [psi(CH2S)(28-29,56-57,76-77)]

The 101 residue protein early pregnancy factor (EPF), also known as human chaperonin 10, was synthesized from four functionalized, but unprotected, peptide segments by a sequential thioether ligation strategy. The approach exploits the differential reactivity of a peptide-NHCH2CH2SH thiolate with XCH2CO-peptides, where X = Cl or I/Br. Initial model studies with short functionalized (but unprotected) peptides showed a significantly faster reaction of a peptide-NHCH2CH2SH thiolate with a BrCH2CO-peptide than with a CICH2CO-peptide, where thiolate displacement of the halide leads to chemoselective formation of a thioether surrogate for the Gly-Gly peptide bond. This rate difference was used as the basis of a novel sequential ligation approach to the synthesis of large polypeptide chains. Thus, ligation of a model bifunctional N-alpha-chloroacetyl, C-terminal thiolated peptide with a second N-alpha-bromoacetyl peptide demonstrated chemoselective bromide displacement by the thiol group. Further investigations showed that the relatively unreactive N-alpha-chloroacetyl peptides could be activated by halide exchange using saturated KI solutions to yield the highly reactive No-iodoacetyl peptides. These findings were used to formulate a sequential thioether ligation strategy for the synthesis of EPF, a 101 amino acid protein containing three Gly-Gly sites approximately equidistantly spaced within the peptide chain. Four peptide segments or cassettes comprising the EPF protein sequence (BrAc-[EPF 78-101] 12, ClAc-[EPF 58-75]-[NHCH2CH2SH] 13, ClAc-[EPF 30-55]-[NHCH2CH2SH] 14, and Ac-[EPF 1-27]-[NHCH2CH2SH] 15) of EPF were synthesized in high yield and purity using Boc SPPS chemistry. In the stepwise sequential ligation strategy, reaction of peptides 12 and 13 was followed by conversion of the N-terminal chloroacetyl functional group to an iodoacetyl, thus activating the product peptide for further ligation with peptide 14. The process of ligation followed by iodoacetyl activation was repeated to yield an analogue of EPF (EPF psi(CH2S)(28-29,56-57,76-77)) 19 in 19% overall yield.

Diabetes detection in Australian general practice: a comparison of diagnostic criteria

Objectives: To study the influence of different diagnostic criteria on the prevalence of diabetes mellitus and characteristics of those diagnosed. Design and setting: Retrospective analysis of data from the general-practice-based Australian Diabetes Screening Study (January 1994 to June 1995). Participants: 5911 people with no previous diagnosis of diabetes, two or more symptoms or risk factors for diabetes, a random venous plasma glucose (PG) level > 5.5 mmol/L and a subsequent oral glucose tolerance test (OGTT) result. Main outcome measure: Prevalence of undiagnosed diabetes based on each of three sets of criteria: 1997 criteria of the American Diabetes Association (ADA), 1996 two-step screening strategy of the Australian Diabetes Society (ADS) (modified according to ADA recommendations about lowered diagnostic fasting PG level), and 1999 definition of the World Health Organization (WHO). Results: Prevalence estimates for undiagnosed diabetes using the American (ADA), Australian (ADS) and WHO criteria (95% CI) were 9.4% (8.7%-10.1%), 16.0% (15.3%-16.7%) and 18.1% (17.1%-19.1%), respectively. People diagnosed with diabetes by fasting PG level (common to all sets of criteria) were more likely to be male and younger than those diagnosed only by 2 h glucose challenge PG level (Australian and WHO criteria only). The Australian (ADS) stepwise screening strategy detected 88% of those who met the WHO criteria for diabetes, including about three-quarters of those with isolated post-challenge hyperglycaemia. Conclusion: The WHO criteria (which include an OGTT result) are preferable to the American (ADA) criteria (which rely totally on fasting PG level), as the latter underestimated the prevalence of undiagnosed diabetes by almost a half. The Australian (ADS) strategy identified most of those diagnosed with diabetes by WHO criteria.

New fluorescence parameters for monitoring photosynthesis in plants - 1. The effect of illumination on the fluorescence parameters of the JIP-test

Chlorophyll fluorescence measurements have a wide range of applications from basic understanding of photosynthesis functioning to plant environmental stress responses and direct assessments of plant health. The measured signal is the fluorescence intensity (expressed in relative units) and the most meaningful data are derived from the time dependent increase in fluorescence intensity achieved upon application of continuous bright light to a previously dark adapted sample. The fluorescence response changes over time and is termed the Kautsky curve or chlorophyll fluorescence transient. Recently, Strasser and Strasser (1995) formulated a group of fluorescence parameters, called the JIP-test, that quantify the stepwise flow of energy through Photosystem II, using input data from the fluorescence transient. The purpose of this study was to establish relationships between the biochemical reactions occurring in PS II and specific JIP-test parameters. This was approached using isolated systems that facilitated the addition of modifying agents, a PS II electron transport inhibitor, an electron acceptor and an uncoupler, whose effects on PS II activity are well documented in the literature. The alteration to PS II activity caused by each of these compounds could then be monitored through the JIP-test parameters and compared and contrasted with the literature. The known alteration in PS II activity of Chenopodium album atrazine resistant and sensitive biotypes was also used to gauge the effectiveness and sensitivity of the JIP-test. The information gained from the in vitro study was successfully applied to an in situ study. This is the first in a series of four papers. It shows that the trapping parameters of the JIP-test were most affected by illumination and that the reduction in trapping had a run-on effect to inhibit electron transport. When irradiance exposure proceeded to photoinhibition, the electron transport probability parameter was greatly reduced and dissipation significantly increased. These results illustrate the advantage of monitoring a number of fluorescence parameters over the use of just one, which is often the case when the F-V/F-M ratio is used.

Transdermal penetration of vasoconstrictors - Present understanding and assessment of the human epidermal flux and retention of free bases and ion-pairs

Purpose. As reductions in dermal clearance increase the residence time of solutes in the skin and underlying tissues we compared the topical penetration of potentially useful vasoconstrictors (VCs) through human epidermis as both free bases and ion-pairs with salicylic acid (SA). Methods. We determined the in vitro epidermal flux of ephedrine, naphazoline, oxymetazoline, phenylephrine, and xylometazoline applied as saturated solutions in propylene glycol: water (1: 1) and of ephedrine, naphazoline and tetrahydrozoline as 10% solutions of 1: 1 molar ratio ion-pairs with SA in liquid paraffin. Results. As free bases, ephedrine had the highest maximal flux, Jmax = 77.4 +/- 11.7 mug/cm(2)/h, being 4-fold higher than tetrahydrozoline and xylometazoline, 6-fold higher than phenylephrine, 10-fold higher than naphazoline and 100-fold higher than oxymetazoline. Stepwise regression of solute physicochemical properties identified melting point as the most significant predictor of flux. As ion-pairs with SA, ephedrine and naphazoline had similar fluxes (11.5 +/- 2.3 and 12.0 +/- 1.6 mug/cm(2)/h respectively), whereas tetrahydrozoline was approximately 3-fold slower. Corresponding fluxes of SA from the ion-pairs were 18.6 +/- 0.6, 7.8 +/- 0.8 and 1.1 +/- 0.1 respectively. Transdermal transport of VC's is discussed. Conclusions. Epidermal retention of VCs and SA did not correspond to their molar ratio on application and confirmed that following partitioning into the stratum corneum, ion-pairs separate and further penetration is governed by individual solute characteristics.

Brand equity in the Pakistani hotel industry

Brand equity is considered as the most important aspect of branding, which is a set of brands' assets and liabilities, its symbol or name that subtracts from or adds the value provided by a product or service to a firm and customers. The current research endeavor was to identify the interrelationship of customer-based brand equity dimensions (brand awareness, brand loyalty, brand image, and service quality) in Pakistani hotel industry. Data was collected from 821 consumers who experienced the services of Pakistani five star hotels from multiple locations. Mediating regression and stepwise regression analyses were applied for investigation of study hypotheses. Results pointed out positive and significant influences of service quality on all other dimensions of brand equity whereas partial mediations were endorsed among the variables. Researchers and practitioners implications are discussed.

CARACTERÍSTICAS ORGANIZACIONALES DE LA SATISFACCIÓN LABORAL EN ESPAÑA

En el presente artículo se lleva a cabo un modelo de análisis de la incidencia de las características inherentes al trabajo sobre la satisfacción laboral. El contraste empírico tiene su origen en la Encuesta de Calidad de Vida en el Trabajo del año 2010 (Ministerio de Trabajo e Inmigración de España), siendo la metodología aplicada una regresión stepwise. Las variables independientes que se han considerado en el modelo de la satisfacción laboral fueron, por orden de inclusión y explicación : motivación, actividad, organización del trabajo, salario, jornada, valoración de los superiores, estabilidad, desarrollo personal, vacaciones y permisos y posibilidad de promoción. Se han obtenido como resultado todos los coeficientes de regresión positivos y significativos, siendo la bondad del modelo aceptable en la medida en que las variables independientes se derivan únicamente de características de la organización.

Altura materna e peso da criança ao nascer

Numa população de 498 gestantes sadias matriculadas no Centro de Saúde Geraldo Paula Souza, foi estudada a relação entre a altura materna e o peso da criança ao nascer, segundo a técnica de análise de regressão múltipla, tipo "stepwise", utilizando-se o subprograma "regression", componente do sistema "Statistical Package for Social Sciences" - SPSS. Essa técnica permite isolar o efeito de cada fator ajustado para a presença dos efeitos de outros fatores. O peso da criança ao nascer mostrou-se associado à idade gestacional, peso médio da gestante no 3.° trimestre da gravidez e ao sexo do recém-nascido, a um nível de significância de 5%. Idade materna, peso médio da gestante no 2.° trimestre da gravidez, altura materna e ordem de nascimento do recém-nascido não se mostraram associados com o peso ao nascer, ao citado nível de significância.

Ordenação de populações em amplas classes de nível de saúde, segundo um indicador abrangente definido por uma função discriminante linear

Utilizando a função discriminante linear, propõe-se um indicador de nível de saúde abrangente de vários indicadores usuais, a saber: o coeficiente de mortalidade geral (CMG), indicador quantificado de Guedes (IG), esperança de vida ao nascer (EV), coeficiente de natalidade (CN), coeficiente de mortalidade infantil (CMI) e coeficiente de mortalidade por doenças transmissíveis (CMDT). Para a padronização dos dois últimos, foi proposta e utilizada uma população padrão mediana; para sua formação, cada grupo etário concorre com a mediana das percentagens de participação desse grupo na composição da população de cada um dos 44 países estudados. A análise crítica das equações de funções discriminantes obtidas com a técnica passo a 2895 2060 1000 passo ascendente (stepwise), mostrou que o valor: Z = 2895/CMI + 2060/CN + 1000/CMDTp, pode ser utilizado como indicador abrangente, permitindo a ordenação de países em amplas classes de nível de saúde.

Factores que inciden en el habito de fumar de escolares de educación basica y media del Chile

INTRODUCCIÓN: Considerando la indiscutible evidencia de los efectos adversos del tabaco, para la salud, millones de personas continúan fumando. La situación es de mayor gravedad, ya que muchos de estos fumadores y la mayoría de los nuevos fumadores, tanto en Chile, como en otros países, son adolescentes. Los objetivos de este estudio fueron determinar la prevalencia de tabaquismo en escolares chilenos y cuantificar el impacto relativo que ejercen factores socioeconómicos, socioculturales, familiares, de exposición a medios de comunicación de masas, demográficos, educacionales y psicosociales, sobre la prevalencia de tabaquismo. MATERIAL E MÉTODO: Se seleccionó una muestra aleatoria, representativa de 2.967 escolares de educación básica y media de la Región Metropolitana de Chile, proporcional de acuerdo al curso(IV, VI, y VIII año básico y I y IV año medio), sexo, tipo de colegio y área geográfica. La prevalencia de tabaquismo se determinó mediante un cuestionario autoadministrado. El nivel socioeconómico(NSE) se midió por medio del método de Graffar modificado, midiéndose además, las condiciones familiares, la exposición a medios de comunicación de masas y factores psicosociales. El rendimiento escolar se determinó mediante un test de castellano y matemáticas, al mismo tiempo que se registraron otras variables educacionales. El análisis estadístico incluyó análisis de varianza, test de la t de Student y test de Scheffe para comparación de medias, correlación, regresión múltiple stepwise, chi-cuadrado y la metodología del enfoque de riesgo de OPS/OMS, para el cálculo del riesgo relativo simple (RR). RESULTADOS: La prevalencia de tabaquismo (10,6%) aumentó significativamente con la edad, de 1,3% en los escolares menores de 13 años, a 15,4% y 36,9%, en los adolescentes entre 13-15 años y ³ 16 años, respectivamente (p< 0,001), a la vez que fue mayor en los escolares de sexo femenino. El grado de placer(r=0,499 p<0,001), el grado de rebeldía(r=0,124 p<0,0001), el grado de recreación familiar (r=-0,131 p<0,0001) y el porcentaje de asistencia al colegio(r=-0,118 p< 0,0001), fueron las variables independientes con el mayor poder explicatorio en la varianza del tabaquismo (r²= 0,2860), pero el grado de placer fue la variable con el mayor poder explicatorio en la varianza explicada (89,2%) y con el mayor RR (34,3). El impacto relativo de las variables independientes sobre el tabaquismo experimentó diferencias de acuerdo a la edad, sexo y NSE. CONCLUSIONES: Nuestros resultados han demonstrado que el grado de placer, el grado de rebeldía, el grado de recreación familiar y el porcentaje de asistencia al colegio, fueron las variables independientes que mayormente contribuyeron a explicar el tabaquismo. Estos hallazgos podrían ser de utilidad para las políticas educacionales y de salud focalizadas a la población escolar, con el objeto de prevenir este importante factor de riesgo para la salud de la población.

Cólera e condições de vida da população

INTRODUÇÃO: Fatores relacionados às condições de vida da população e condições ambientais precárias são freqüentemente citados como os maiores obstáculos para o controle de surtos e epidemias por cólera. Nesse sentido, realizou-se estudo com o objetivo de avaliar o peso de fatores referentes às condições de vida da população, relacionando questões ambientais com a instalação e o impacto da cólera. MÉTODO: Através de uma regressão linear múltipla, pelo método "backward stepwise", com influência do investigador, foram correlacionados os indicadores socioeconômicos com as taxas de incidência por cólera observadas nos municípios do Estado de Pernambuco, no ano de 1992. RESULTADOS/CONCLUSÕES: O modelo ajustado indica que a proporção de domicílios que utilizam água não proveniente de uma rede geral é a variável que tem maior peso na flutuação positiva das taxas de incidência de cólera. As variáveis "proporção de domicílios não ligados à rede geral de esgotos" e "proporção de chefes de família com renda igual ou menor do que um salário-mínimo mensal" também se associam positivamente, com coeficientes de regressão estatisticamente significativos, às taxas de incidência de cólera. A proporção de domicílios sem nenhuma instalação sanitária, por outro lado, se associa negativamente às taxas de incidência de cólera, sugerindo que instalações sanitárias, sem existência de rede de esgoto, aumentam o risco de contaminação ambiental. Os resultados apontam que a maior prioridade em saneamento é a oferta de água de boa qualidade.

Escores de consumo alimentar e níveis lipêmicos em população de São Paulo, Brasil

OBJETIVO: Analisar o padrão de consumo alimentar avaliado por meio de escores de consumo e relacionar esses escores com os níveis de colesterol total e de lipoproteínas de baixa e alta densidades em população da área metropolitana de São Paulo. MÉTODOS: Estudo transversal realizado no município de Cotia, São Paulo, em amostra representativa de 1.045 adultos, foram determinados níveis de lipídeos séricos e a ingestão de alimentos por meio da freqüência de consumo alimentar. Foram utilizados escores de padrão de consumo, estabelecendo um peso para cada categoria de consumo baseado na freqüência anual, obtendo-se, assim, a distribuição quintilar do escore I (alimentos considerados de risco para doenças cardiovasculares) e escore II (alimentos protetores). Foram comparados os valores médios das lipoproteínas para cada um dos quintis pela análise de variância, e foram verificadas possíveis relações entre os escores de consumo e as frações de lipídeos séricos, mediante modelos de regressão linear múltipla (stepwise forward). RESULTADOS: Observou-se aumento significativo dos níveis médios de lipídeos, segundo quintis de consumo do escore I para colesterol total e para lipoproteína de baixa densidade-colesterol, e constatou-se um comportamento inverso e significativo dos níveis desses lipídeos séricos em relação ao escore II. O escore I correlacionou-se positivamente e significativamente a esses lipídeos, e o escore II apresentou correlação inversa e significativa com esses constituintes sangüíneos. CONCLUSÕES: Em estudos populacionais, a análise da freqüência de consumo de alimentos por meio de escores pode ser um método de escolha para avaliar qualidade de dieta e de seu potencial efeito nos níveis séricos de colesterol total e de lipoproteínas de baixa densidade.

Crescimento e trabalho de estudantes de ensino fundamental e médio em São Paulo, Brasil

OBJETIVO: Verificar alguns fatores de risco para a baixa estatura em adolescentes escolares e trabalhadores. MÉTODOS: A amostra foi estratificada, constituída por 50% dos escolares da quinta série ao terceiro colegial das duas maiores escolas dos municípios de Monteiro Lobato e de Santo Antonio do Pinhal, em 1999, uma de zona urbana e outra de zona rural, com um total de 756 indivíduos. A desnutrição foi definida pelo indicador altura/idade, segundo o padrão do National Center for Health Statistics (1977). Foram feitas a distribuição da altura/idade na população amostrada e uma análise multivariada, utilizando o método "stepwise", em que a baixa estatura foi a variável dependente. RESULTADOS: Constatou-se que 12,7% (96) dos adolescentes estavam abaixo do P5 do padrão, 24,4% (184) entre os centis 5 e 15 e 47,1% ( 356) entre 15 e 50. A chance de baixa estatura foi associada à idade: tomando-se como base a faixa etária entre 10 e 13 anos, para os indivíduos entre 14 e 17 anos, encontrou-se mais do que o dobro de chance de baixa altura (ORaj=2,49) e, para aqueles de 17 a 19, o triplo (ORaj=3,37). Estar desempregado aumenta o risco de baixa estatura (ORaj=2,86) em relação aos que trabalham. Também são maiores as chances de baixa estatura entre os que trabalham em tempo parcial (ORaj=1,81). CONCLUSÕES: Constataram-se determinantes econômicos no risco de desnutrição crônica entre os adolescentes, na medida em que o trabalho é parte imprescindível da estratégia de sobrevivência desse grupo. Ressalta-se que a aplicação da legislação referente ao trabalho do menor deve ser acompanhada de políticas públicas compensatórias.

Lead, hemoglobin, zinc protoporphyrin and ferritin concentrations in children

OBJECTIVE: To assess the relationship of blood lead and hemoglobin, zinc protoporphyrin, and ferritin concentrations in children. METHODS: A cross-sectional study was carried out in 136 anemic and non-anemic children from two rural villages near a lead smelter in Adrianópolis, Southern Brazil, from July to September 2001. Hemoglobin electrophoresis was performed to exclude children with hemoglobin variants and thalassemia syndromes associated with anemia. Lead was determined by atomic absorption spectrophotometry; hemoglobin by automated cell counting; zinc protoporphyrin by hematofluorometry; ferritin by chemiluminescence. Student's t-test, Mann-Whitney test, and the c² test were used to assess the significance of the differences between the variables investigated in anemic and non-anemic children. Stepwise multivariate linear regression analysis was performed using two models for anemic and non-anemic children respectively. RESULTS: Lead was negatively associated to hemoglobin (p<0.017) in the first model, and in the second model lead was positively associated to zinc protoporphyrin (p<0.004) after controlling for ferritin, age, sex, and per capita income. There was an inverse association between hemoglobin and blood lead in anemic children. It was not possible to confirm if anemic children had iron deficiency anemia or subclinical infection, considering that the majority (90.4%) had normal ferritin. CONCLUSIONS: The study detected a relationship between anemia and elevated blood lead concentrations. Further epidemiological studies are necessary to investigate the impact of iron nutritional interventions as an attempt to decrease blood lead in children.

Determinants of salivary cotinine level: a population-based study in Brazil

OBJECTIVE: A cross-sectional population-based study was conducted to assess, in active smokers, the relationship of number of cigarettes smoked and other characteristics to salivary cotinine concentrations. METHODS: A random sample of active smokers aged 15 years or older was selected using a stepwise cluster sample strategy, in the year 2000 in Rio de Janeiro, Brazil. The study included 401 subjects. Salivary cotinine concentration was determined using gas chromatography with nitrogen-phosphorus detection. A standard questionnaire was used to collect demographic and smoking behavioral data. The relation between the number of cigarettes smoked in the last 24h and cotinine level was examined by means of a nonparametric fitting technique of robust locally weighted regression. RESULTS: Significantly (p<0.05) higher adjusted mean cotinine levels were found in subjects smoking their first cigarette within five minutes after waking up, and in those smoking 1-20 cigarettes in the last 24h who reported inhaling more than ½ the time. In those smoking 1-20 cigarettes, the slope was significantly higher for those subjects waiting for more than five minutes before smoking their first cigarette after waking up, and those smoking "light" cigarettes when compared with their counterparts. These heterogeneities became negligible and non-significant when subjects with cotinine >40 ng/mL per cigarette were excluded. CONCLUSIONS: There was found a positive association between self-reporting smoking five minutes after waking up, and inhaling more than ½ the time are consistent and higher cotinine levels. These can be markers of dependence and higher nicotine intake. Salivary cotinine proved to be a useful biomarker of recent smoking and can be used in epidemiological studies and smoking cessation programs.

Síndrome de Burnout: estudo de base populacional com servidores do setor público

OBJETIVO: Identificar preditores da síndrome de Burnout em trabalhadores do setor público. MÉTODOS: Estudo transversal com amostra representativa de 879 servidores públicos municipais de uma cidade da região metropolitana de Porto Alegre, RS. Utilizou-se um questionário elaborado para a coleta de variáveis demográficas e relacionadas às características do trabalho. A percepção sobre o ambiente laboral foi analisada a partir da Work Atmosphere Scale; para avaliar a síndrome de Burnout, utilizou-se o Maslach Burnout Inventory. Foram realizadas três análises de regressão linear múltipla pelo método stepwise em que cada dimensão da síndrome foi considerada como desfecho, enquanto as demais variáveis foram estimadas como preditoras e controladas por sexo e idade. RESULTADOS: As variáveis relacionadas à percepção do ambiente de trabalho foram as que mais contribuíram para a ocorrência de burnout. A percepção do trabalho como estressante e a presença de pessoas que atrapalham o ambiente laboral participaram do modelo explicativo das três dimensões. Nove variáveis compuseram o modelo preditor, que explicou 43% da ocorrência da Exaustão Emocional. "Perceber o trabalho como estressante" apresentou maior poder explicativo. Na Despersonalização, oito variáveis compuseram o modelo em 25%; "perceber o trabalho como estressante" foi, mais uma vez, a variável de maior poder explicativo. A Baixa Realização Profissional mostrou um conjunto de variáveis com poder explicativo de 20%; ambiente de trabalho considerado bom apresentou maior peso, associando-se inversamente. CONCLUSÕES: A percepção dos servidores públicos sobre seu ambiente de trabalho tem importante papel como preditor da síndrome de Burnout. Avaliar o trabalho como estressante e presença de pessoas que atrapalham o ambiente mostraram-se como elementos de maior relevância.