On-line desorption of dried blood spot: A novel approach for the direct LC/MS analysis of micro-whole blood samples.

The aim of this work is to present a new concept, called on-line desorption of dried blood spots (on-line DBS), allowing the direct analysis of a dried blood spot coupled to liquid chromatography mass spectrometry device (LC/MS). The system is based on an inox cell which can receive a blood sample (10 microL) previously spotted on a filter paper. The cell is then integrated into LC/MS system where the analytes are desorbed out of the paper towards a column switching system ensuring the purification and separation of the compounds before their detection on a single quadrupole MS coupled to atmospheric pressure chemical ionisation (APCI) source. The described procedure implies that no pretreatment is necessary in spite the analysis is based on whole blood sample. To ensure the applicability of the concept, saquinavir, imipramine, and verapamil were chosen. Despite the use of a small sampling volume and a single quadrupole detector, on-line DBS allowed the analyses of these three compounds over their therapeutic concentrations from 50 to 500 ng/mL for imipramine and verapamil and from 100 to 1000 ng/mL for saquinavir. Moreover, the method showed good repeatability with relative standard deviation (RSD) lower than 15% based on two levels of concentration (low and high). Function responses were found to be linear over the therapeutic concentration for each compound and were used to determine the concentrations of real patient samples for saquinavir. Comparison of the founded values with those of a validated method used routinely in a reference laboratory showed a good correlation between the two methods. Moreover, good selectivity was observed ensuring that no endogenous or chemical components interfered with the quantitation of the analytes. This work demonstrates the feasibility and applicability of the on-line DBS procedure for bioanalysis.

Efeito da adubação potássica na qualidade pós-colheita de maçãs 'Fuji'

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da adubação potássica na composição mineral, qualidade e armazenabilidade de maçãs da cultivar Fuji. Os frutos utilizados foram provenientes de um experimento em que, durante nove anos, aplicaram-se doses crescentes de K2O no solo. As maçãs foram coletadas na safra 1999/2000 e armazenadas em atmosfera controlada (AC) nas condições de 1 kPa O2/<0,3 kPa CO 2 ou 1 kPa O2/2,0 kPa CO 2. As avaliações qualitativas foram realizadas na colheita, após oito meses de armazenamento, aos sete dias após a colheita e aos sete dias após oito meses de armazenamento. Nesses sete dias, os frutos permaneceram em temperatura de 20ºC. O incremento no fornecimento de K às plantas aumentou o diâmetro, massa, acidez, coloração vermelha e a concentração de K nos frutos. Em contrapartida constatou-se diminuições da firmeza da polpa com aumento das doses de potássio. Houve interação entre a adubação e as condições de armazenamento somente em relação à degenerescência de polpa. Não houve diferenças entre os tratamentos quando os frutos foram armazenados em AC de 1 kPa O2/<0,3 kPa CO 2. Quando as maçãs foram armazenadas em AC de 1 kPa O2/2,0 kPa CO 2, observou-se maior degenerescência naqueles frutos com menor concentração de potássio. A perda de peso durante o armazenamento, a cor de fundo da epiderme e a ocorrência de podridões não foram afetados pelas doses de potássio.

Therapeutic applications of viscous and injectable poly(ortho esters).

Poly(ortho esters) (POE) are hydrophobic and bioerodible polymers that have been investigated for pharmaceutical use since the early 1970s. Among the four described generations of POE, the third (POE III) and fourth (POE IV) are promising viscous and injectable materials which have been investigated in numerous biomedical applications. POE III has been extensively studied for ophthalmic drug delivery, it presents an excellent biocompatibility and is currently being investigated as a vehicle for sustained drug delivery to treat diseases of the posterior segment of the eye. POE IV is distinguishable by a highly reproducible and controlled synthesis, a higher hydrophobicity, and an excellent biocompatibility. It is currently under development for a variety of applications, such as ocular delivery, periodontal disease treatment and applications in veterinary medicine. This review will also focus on new perspectives for this promising family of polymers, such as guided tissue regeneration, treatment of osteoarthritis, as well as peptide and protein delivery.

Qualidade de maçãs 'Fuji' armazenadas em atmosfera controlada e influência do clima na degenerescência da polpa

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade de frutos e a relação entre condições climáticas durante o desenvolvimento dos frutos e incidência de degenerescência da polpa no armazenamento em atmosfera controlada (AC) de maçãs 'Fuji'. Foram utilizados frutos de três pomares (Vacaria, RS, e São Joaquim e Lages, SC) e de dois anos agrícolas (2006/2007 e 2007/2008). Durante o desenvolvimento dos frutos, os pomares foram monitorados diariamente, quanto a temperaturas mínimas, médias e máximas, umidade relativa e precipitação. Os frutos foram armazenados por oito meses em diferentes condições de AC, a -0,5±0,1ºC e umidade relativa de 97%. Foram estimadas as correlações de Pearson entre as variáveis relativas às condições climáticas e a incidência de degenerescência da polpa após o armazenamento sob AC. Frutos armazenados sob 1,2 kPa de O2 e 2,0 kPa de CO2 apresentaram maior acidez titulável, firmeza de polpa e textura e menores taxas respiratória e de produção de etileno; exibiram, porém, alta incidência de degenerescência da polpa, em comparação aos armazenados sob 1,2 kPa de O2 e <0,5 kPa de CO2. A incidência de degenerescência da polpa diminui com o aumento nas temperaturas médias diárias, ocorridas entre 90 e 210 dias após o pleno florescimento.

On-line desorption of dried blood spots coupled to hydrophilic interaction/reversed-phase LC/MS/MS system for the simultaneous analysis of drugs and their polar metabolites.

An assay for the simultaneous analysis of pharmaceutical compounds and their metabolites from micro-whole blood samples (i.e. 5 microL) was developed using an on-line dried blood spot (on-line DBS) device coupled with hydrophilic interaction/reversed-phase (HILIC/RP) LC/MS/MS. Filter paper is directly integrated to the LC device using a homemade inox desorption cell. Without any sample pretreatment, analytes are desorbed from the paper towards an automated system of valves linking a zwitterionic-HILIC column to an RP C18 column. In the same run, the polar fraction is separated by the zwitterionic-HILIC column while the non-polar fraction is eluted on the RP C18. Both fractions are detected by IT-MS operating in full scan mode for the survey scan and in product ion mode for the dependant scan using an ESI source. The procedure was evaluated by the simultaneous qualitative analysis of four probes and their relative phase I and II metabolites spiked in whole blood. In addition, the method was successfully applied to the in vivo monitoring of buprenorphine metabolism after the administration of an intraperitoneal injection of 30 mg/kg on adult female Wistar rat.

A need for determination of arsenic species at low levels in cereal-based food and infant cereals. Validation of a method by LC-ICPMS.

The present study arose from the need to determine inorganic arsenic (iAs) at low levels in cereal-based food. Validated methods with a low limit of detection (LOD) are required to analyse these kinds of food. An analytical method for the determination of iAs, methylarsonic acid (MA) and dimethylarsinic acid (DMA) in cereal-based food and infant cereals is reported. The method was optimised and validated to achieve low LODs. Ion chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry (LC-ICPMS) was used for arsenic speciation. The main quality parameters were established. To expand the applicability of the method, different cereal products were analysed: bread, biscuits, breakfast cereals, wheat flour, corn snacks, pasta and infant cereals. The total and inorganic arsenic content of 29 cereal-based food samples ranged between 3.7-35.6 and 3.1-26.0 microg As kg-1, respectively. The present method could be considered a valuable tool for assessing inorganic arsenic contents in cereal-based foods.

Rapid LC-MS/MS quantification of the major benzodiazepines and their metabolites on dried blood spots using a simple and cost-effective sample pretreatment.

BACKGROUND: Dried blood spots (DBS) sampling has gained popularity in the bioanalytical community as an alternative to conventional plasma sampling, as it provides numerous benefits in terms of sample collection and logistics. The aim of this work was to show that these advantages can be coupled with a simple and cost-effective sample pretreatment, with subsequent rapid LC-MS/MS analysis for quantitation of 15 benzodiazepines, six metabolites and three Z-drugs. For this purpose, a simplified offline procedure was developed that consisted of letting a 5-µl DBS infuse directly into 100 µl of MeOH, in a conventional LC vial. RESULTS: The parameters related to the DBS pretreatment, such as extraction time or internal standard addition, were investigated and optimized, demonstrating that passive infusion in a regular LC vial was sufficient to quantitatively extract the analytes of interest. The method was validated according to international criteria in the therapeutic concentration ranges of the selected compounds. CONCLUSION: The presented strategy proved to be efficient for the rapid analysis of the selected drugs. Indeed, the offline sample preparation was reduced to a minimum, using a small amount of organic solvent and consumables, without affecting the accuracy of the method. Thus, this approach enables simple and rapid DBS analysis, even when using a non-DBS-dedicated autosampler, while lowering the costs and environmental impact.

A new poly(ortho ester)-based drug delivery system as an adjunct treatment in filtering surgery.

PURPOSE: Pharmacologic modulation of wound healing after glaucoma filtering surgery remains a major clinical challenge in ophthalmology. Poly(ortho ester) (POE) is a bioerodible and biocompatible viscous polymer potentially useful as a sustained drug delivery system that allows the frequency of intraocular injections to be reduced. The purpose of this study was to determine the efficacy of POE containing a precise amount of 5-fluorouracil (5-FU) in an experimental model of filtering surgery in the rabbit. METHODS: Trabeculectomy was performed in pigmented rabbit eyes. An ointmentlike formulation of POE containing 1% wt/wt 5-FU was injected subconjunctivally at the site of surgery, during the procedure. Intraocular pressure (IOP), bleb persistence, and ocular inflammatory reaction were monitored until postoperative day 30. Quantitative analysis of 5-FU was performed in the anterior chamber. Histologic analysis was used to assess the appearance of the filtering fistula and the polymer's biocompatibility. RESULTS: The decrease in IOP from baseline and the persistence of the filtering bleb were significantly more marked in the 5-FU-treated eyes during postoperative days 9 through 28. Corneal toxicity triggered by 5-FU was significantly lower in the group that received 5-FU in POE compared with a 5-FU tamponade. Histopathologic evaluation showed that POE was well tolerated, and no fibrosis occurred in eyes treated with POE containing 5-FU. CONCLUSIONS: In this rabbit model of trabeculectomy, the formulation based on POE and containing a precise amount of 5-FU reduced IOP and prolonged bleb persistence in a way similar to the conventional method of a 5-FU tamponade, while significantly reducing 5-FU toxicity.

Composição mineral de maçãs 'Gala' e 'Fuji' produzidas no Sul do Brasil

O objetivo deste trabalho foi avaliar a composição mineral de maçãs 'Gala' e 'Fuji', em pomares de diferentes regiões do Sul do Brasil. Foram avaliados pomares em vários municípios de Santa Catarina e do Rio Grande do Sul, agrupados em macrorregiões denominadas de Fraiburgo, Vacaria e São Joaquim, durante o período de 1991 a 2007. Os teores médios (em matéria fresca) de Ca, K, Mg, N e P nos frutos foram, respectivamente, 47, 1.027, 52, 419 e 116 mg kg‑1, para 'Gala', e de 41, 1.043, 46, 373 e 116 mg kg‑1, para 'Fuji'. Os valores médios das relações (K+Mg)/Ca e N/Ca foram respectivamente de 24 e 9,6, para 'Gala', e de 28 e 9,7, para 'Fuji'. Maçãs 'Gala' e 'Fuji' apresentaram teores médios de Ca e P acima dos níveis críticos mínimos (40 e 100 mg kg‑1, respectivamente), e relações médias de (K+Mg)/Ca e N/Ca acima dos níveis críticos máximos (30 e 14), considerados adequados para maior conservação da qualidade pós‑colheita (QPC). Maçãs de pomares de São Joaquim apresentaram maiores teores de Ca e P, menores teores de N e menores relações (K+Mg)/Ca e N/Ca, independentemente da cultivar. O percentual de amostras, com alto risco de perdas em QPC, foi maior para 'Fuji' do que para 'Gala', quanto aos teores de Ca e P e às relações (K+Mg)/Ca e N/Ca.

Desempenho de macieiras 'Imperial Gala' e 'Mishima Fuji' em diferentes porta-enxertos

Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de diferentes porta-enxertos no desempenho das cultivares de macieira (Malus domestica) Imperial Gala e Mishima Fuji. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, com quatro repetições. Utilizaram-se os porta-enxertos CG.969, CG.874, CG.210, CG.56, CG.008, JM.2 e JM.7, além da combinação de Marubakaido com interenxerto de M.9 (Marubakaido/M.9). Avaliaram-se as variáveis: produção por planta, produtividade, número de frutos por planta, massa de fruto, área da seção transversal do tronco, sólidos solúveis, firmeza do fruto e índice iodo-amido. A produtividade de ambas as cultivares foi maior com os porta-enxertos Marubakaido/M.9, JM.2, CG.008, CG.874, CG.210 e CG.56. Além disso, os porta-enxertos CG.008, CG.874, CG.210 e CG.56 reduzem o vigor da cultivar-copa, mas sem reduzir a produtividade. O teor de sólidos solúveis dos frutos é maior quando se utilizam porta-enxertos menos vigorosos.

RETARDAMENTO DA MATURAÇÃO DE MAÇÃS 'FUJI' PELO TRATAMENTO COM 1-MCP E MANEJO DA TEMPERATURA

Maçãs cv. Fuji foram tratadas com 42 mimol·m-3 de 1-metilciclopropeno (1-MCP) por 24 h a 20°C, um dia após a colheita, e então armazenadas a 0; 10 ou 20ºC por 70 dias. Tratamento com 1-MCP efetivamente retardou a maturação de maçãs 'Fuji'. 1-MCP reduziu a taxa respiratória dos frutos mantidos a 10 e 20ºC e inibiu a produção de etileno dos frutos mantidos nas três temperaturas de armazenagem. Frutos tratados com 1-MCP e armazenados a 20ºC exibiram taxas respiratórias similares ou inferiores àquelas de frutos-controle armazenados a 10ºC. Quando armazenados a 10 ou 20ºC, frutos tratados com 1-MCP preservaram mais a firmeza da polpa e a acidez titulável e exibiram menor amarelecimento da epiderme que frutos-controle. Entretanto, não houve benefícios significativos do tratamento 1-MCP sobre a conservação da qualidade dos frutos armazenados a 0ºC no período de 70 dias após a colheita. Os resultados indicam que o tratamento com 1-MCP pode ser uma estratégia para o aumento da conservação de maçãs cv. Fuji durante o transporte e a distribuição sob 10 ou 20ºC. O prolongamento da armazenagem a 20ºC por período superior a 40 dias pode ser limitado pelo murchamento dos frutos e desenvolvimento de podridões.

ARMAZENAMENTO DE MAÇÃ 'FUJI' COM INCIDÊNCIA DE PINGO-DE-MEL

Foram realizados dois experimentos com o objetivo de avaliar o efeito da temperatura e da concentração de O2, durante o armazenamento em atmosfera controlada (AC) sobre a conservação da maçã 'Fuji' afetada com pingo-de-mel. No experimento 1, utilizaram-se pressões parciais de 0,8; 1,1 e 1,6kPa de O2 combinado com <0,5kPa de CO2, na temperatura de 0,5ºC. No experimento 2, combinaram-se armazenamento refrigerado (AR) e AC (1,1kPa de O2 e <0,5kPa de CO2) com as temperaturas de -0,5ºC e 0,5ºC. A UR, em ambos os experimentos, foi de 96%. Após sete meses de armazenamento e mais sete dias a 20ºC, no experimento 1, a redução da pressão parcial de O2 diminuiu a degradação dos ácidos, incidência de degenerescência senescente e manteve a cor verde da epiderme. Por outro lado, a incidência de podridão, na saída da câmara, aumentou com a redução da pressão parcial de O2. No experimento 2, o uso de AC manteve a firmeza de polpa, a acidez titulável mais elevada e a cor da epiderme mais verde dos frutos, na saída da câmara. A incidência de degenerescência senescente e podridões foram menores em AC, e a temperatura de -0,5ºC também reduziu a incidência de degenerescência senescente em relação a 0,5ºC. A incidência de degenerescência com cortiça foi mais elevada em AC.