Relating aromatic hydrocarbon-induced DNA adducts and c-H-ras mutations in mouse skin papillomas: the role of apurinic sites.

Mouse skin tumors contain activated c-H-ras oncogenes, often caused by point mutations at codons 12 and 13 in exon 1 and codons 59 and 61 in exon 2. Mutagenesis by the noncoding apurinic sites can produce G-->T and A-->T transversions by DNA misreplication with more frequent insertion of deoxyadenosine opposite the apurinic site. Papillomas were induced in mouse skin by several aromatic hydrocarbons, and mutations in the c-H-ras gene were determined to elucidate the relationship among DNA adducts, apurinic sites, and ras oncogene mutations. Dibenzo[a,l]pyrene (DB[a,l]P), DB[a,l]P-11,12-dihydrodiol, anti-DB[a,l]P-11,12-diol-13,14-epoxide, DB[a,l]P-8,9-dihydrodiol, 7,12-dimethylbenz[a]anthracene (DMBA), and 1,2,3,4-tetrahydro-DMBA consistently induced a CAA-->CTA mutation in codon 61 of the c-H-ras oncogene. Benzo[a]pyrene induced a GGC-->GTC mutation in codon 13 in 54% of tumors and a CAA-->CTA mutation in codon 61 in 15%. The pattern of mutations induced by each hydrocarbon correlated with its profile of DNA adducts. For example, both DB[a,l]P and DMBA primarily form DNA adducts at the N-3 and/or N-7 of deoxyadenosine that are lost from the DNA by depurination, generating apurinic sites. Thus, these results support the hypothesis that misreplication of unrepaired apurinic sites generated by loss of hydrocarbon-DNA adducts is responsible for transforming mutations leading to papillomas in mouse skin.

Targeted gene inactivation in petunia by PCR-based selection of transposon insertion mutants.

Establishment of loss-of-function phenotypes is often a key step in determining the biological function of a gene. We describe a procedure to obtain mutant petunia plants in which a specific gene with known sequence is inactivated by the transposable element dTph1. Leaves are collected from batches of 1000 plants with highly active dTph1 elements, pooled according to a three-dimensional matrix, and screened by PCR using a transposon- and a gene-specific primer. In this way individual plants with a dTph1 insertion can be identified by analysis of about 30 PCRs. We found insertion alleles for various genes at a frequency of about 1 in 1000 plants. The plant population can be preserved by selfing all the plants, so that it can be screened for insertions in many genes over a prolonged period.

Chromosomal insertion of foreign (adenovirus type 12, plasmid, or bacteriophage lambda) DNA is associated with enhanced methylation of cellular DNA segments.

Insertion of foreign DNA into an established mammalian genome can extensively alter the patterns of cellular DNA methylation. Adenovirus type 12 (Ad12)-transformed hamster cells, Ad12-induced hamster tumor cells, or hamster cells carrying integrated DNA of bacteriophage lambda were used as model systems. DNA methylation levels were examined by cleaving cellular DNA with Hpa II, Msp I, or Hha I, followed by Southern blot hybridization with 32P-labeled, randomly selected cellular DNA probes. For several, but not all, cellular DNA segments investigated, extensive increases in DNA methylation were found in comparison with the methylation patterns in BHK21 or primary Syrian hamster cells. In eight different Ad12-induced hamster tumors, moderate increases in DNA methylation were seen. Increased methylation of cellular genes was also documented in two hamster cell lines with integrated Ad12 DNA without the Ad12-transformed phenotype, in one cloned BHK21 cell line with integrated plasmid DNA, and in at least three cloned BHK21 cell lines with integrated lambda DNA. By fluorescent in situ hybridization, the cellular hybridization probes were located to different hamster chromosomes. The endogenous intracisternal A particle genomes showed a striking distribution on many hamster chromosomes, frequently on their short arms. When BHK21 hamster cells were abortively infected with Ad12, increases in cellular DNA methylation were not seen. Thus, Ad12 early gene products were not directly involved in increasing cellular DNA methylation. We attribute the alterations in cellular DNA methylation, at least in part, to the insertion of foreign DNA. Can alterations in the methylation profiles of hamster cellular DNA contribute to the generation of the oncogenic phenotype?

A C-terminally-anchored Golgi protein is inserted into the endoplasmic reticulum and then transported to the Golgi apparatus.

Unlike conventional membrane proteins of the secretory pathway, proteins anchored to the cytoplasmic surface of membranes by hydrophobic sequences near their C termini follow a posttranslational, signal recognition particle-independent insertion pathway. Many such C-terminally-anchored proteins have restricted intracellular locations, but it is not known whether these proteins are targeted directly to the membranes in which they will ultimately reside. Here we have analyzed the intracellular sorting of the Golgi protein giantin, which consists of a rod-shaped 376-kDa cytoplasmic domain followed by a hydrophobic C-terminal anchor sequence. Unexpectedly, we find that giantin behaves like a conventional secretory protein in that it inserts into the endoplasmic reticulum (ER) and then is transported to the Golgi. A deletion mutant lacking a portion of the cytoplasmic domain adjacent to the membrane anchor still inserts into the ER but fails to reach the Golgi, even though this mutant has a stable folded structure. These findings suggest that the localization of a C-terminally-anchored Golgi protein involves at least three steps: insertion into the ER membrane, controlled incorporation into transport vesicles, and retention within the Golgi.

Atividade da própolis verde contra o fitopatógeno Pythium aphanidermatum e análise da interação do composto majoritário Artepillin C com sistemas biomiméticos de membranas

O aumento da resistência microbiana devido a fatores como uso excessivo e ineficiente de antibióticos convencionais acarreta a necessidade da busca por novos compostos bioativos que atuem por mecanismos de ação diferentes aos fármacos já conhecidos. Na agricultura, o uso intensivo de pesticidas para o combate de microrganismos que comprometem principalmente a parte alimentícia também traz diversos problemas relacionados à resistência antimicrobiana e a riscos ambientais, oriundos do acúmulo dessas substâncias no solo. Dentro deste aspecto, o pseudofungo Pythium aphanidermatum, da classe dos oomicetos, destaca-se por ser uma espécie agressiva e altamente resistente a fungicidas comuns, apodrecendo raízes e frutos de cultivos de tomate, beterraba, pepino, pimentão, etc. A própolis verde, constituída em sua grande parte por material resinoso coletado e processado pela abelha da espécie Apis mellifera tem sido utilizada na medicina tradicional devido ao seu amplo espectro de ações preventivas e tratamentos de doenças, possuindo propriedades anti-inflamatórias, antimicrobianas, anticancerígenas e antioxidantes, tornando-se um produto de grande interesse na busca de novos compostos bioativos. Dentro destes aspectos apresentados, neste trabalho investigamos a ação da própolis verde contra o fitopatógeno P. aphanidermatum e identificamos através da técnica de cromatografia e bioensaios que a Artepillin C (3,5-diprenil-4-ácido-hidroxicinâmico), majoritária na própolis verde, foi o principal composto nesta ação. Os efeitos terapêuticos desta molécula tem sido foco de muitos estudos, porém ainda não há evidência em sua interação com agregados anfifílicos que mimetizam membranas celulares. O caráter anfifílico do composto, elevado pela presença dos grupos prenilados ligados ao ácido cinâmico, favoreceram a sua inserção nas membranas modelo, principalmente em seu estado agregado. Estas conclusões puderam ser inferidas devido às alterações nas propriedades das bicamadas lipídicas na presença da Artepillin C, podendo causar, especificamente para o caso de fitopatógenos como o P. aphanidermatum, perdas funcionais das proteínas de membranas, liberação de eletrólitos intracelulares e desintegração citoplasmática dos micélios e esporos. Ainda, as diferentes composições lipídicas nas vesículas influenciam no modo de interação do composto e consequentes alterações em suas estruturas, principalmente na presença do colesterol, que auxilia na manutenção da permeabilidade da bicamada lipídica, que pode contribuir para a integridade do conteúdo citoplasmático da célula.

Enhanced optical properties of the GaAsN/GaAs quantum-well structure by the insertion of InAs monolayers

Microstructural and optical properties of InAs-inserted and reference single GaAsN/GaAs quantum-well (QW) structures grown by metalorganic chemical vapor deposition were investigated using cross-sectional transmission electron microscopy and photoluminescence (PL). Significant enhancement of PL intensity and a blueshift of PL emission were observed from the InAs-inserted GaAsN/GaAs QW structure, compared with the single GaAsN/GaAs QW structure. Strain compensation and In-induced reduction of N incorporation are suggested to be two major factors affecting the optical properties. (C) 2004 American Institute of Physics.

Insertion of an E-coli lacZ gene in Acetobacter xylinus for the production of cellulose in whey

A mini-Tn10:lacZ: kan was inserted into a wild-type strain of Acetobacter xylinus by random transposon mutagenesis, generating a lactose-utilising and cellulose-producing mutant strain designated ITz3. Antibiotic selection plate assays and Southern hybridisation revealed that the lacZ gene was inserted once into the chromosome of strain ITz3 and was stably maintained in non-selective medium after more than 60 generations. The modified strain had, on the average, a 28-fold increase in cellulose production and a 160-fold increase in beta-galactosidase activity when grown in lactose medium. beta-Galactosidase activity is present in either lactose or sucrose medium indicating that the gene is constitutively expressed. Cellulose and beta-galactosidase production by the modified strain was also evaluated in pure and enriched whey substrates. Utilisation of lactose in whey substrate by ITz3 reached 17 g l(-1) after 4 days incubation. (C) 2004 Federation of European Microbiological Societies. Published by Elsevier B.V. All rights reserved.

Non-curliation of Escherichia coli O78:K80 isolates associated with IS1 insertion in csgB and reduced persistence in poultry infection

The elaboration of curli fimbriae by Escherichia coli is associated with the development of a lacy colony morphology when grown on colonisation factor antigen agar at 25 degrees C. Avian colisepticaemia E. coli isolates screened for curliation by this culture technique showed lacy and smooth colonial morphologies and the genetic basis of the non-curliated smooth colonial phenotype was analysed. Two smooth E. coli O78:K80 isolates possessed about 40 copies of the IS1 element within their respective genomes of which one copy insertionally inactivated the csgB gene, the nucleator gene for curli fibril formation. One of these two isolates also possessed a defective rpoS gene which is a known regulator of curli expression. In the day-old chick model, both smooth isolates were as invasive as a known virulent O78:K80 isolate as determined by extent of liver and spleen colonisation post oral inoculation but were less persistent in terms of caecal colonisation.

Opérationnalisation de la dimension ESPE de l'insertion socio-professionnelle du modèle du "Trèfle chanceux

Comme les emplois disponibles sont, depuis une dizaine d'années, de plus en plus difficiles à "détecter" et cette tendance risque fort de se poursuivre au cours des années à venir, l'insertion professionnelle constitue sans aucun doute l'un des problèmes de l'heure de notre société. C'est un problème auquel tous les chercheurs d'emploi doivent faire face et en particulier ceux et celles qui, comme les immigrants, les individus peu scolarisés, les accidentés du travail, les femmes au foyer et les chômeurs de longue durée, etc., sont moins outillés pour se tailler une place sur le marché du travail. Dans un contexte où il est souvent urgent pour ces clientèles de se trouver du travail pour subvenir à leurs besoins de base, le professionnel d'orientation est amené à se poser la question suivante: "Par rapport à l'environnement, qu'est-ce qu'il est essentiel pour ces gens de connaître afin de faciliter leur insertion professionnelle?

Élaboration des énoncés visant à intégrer optimalement le modèle Trèfle chanceux au logiciel Copilote insertion.

On parle de plus en plus d'insertion professionnelle difficile. Les taux de chômage augmentent et cela implique une grande demande d'aide de la part des chercheurs d'emploi. Les ressources humaines pour répondre à leurs besoins sont débordées et doivent donner des services efficaces dans un court laps de temps. Le problème qui se pose alors, c'est de savoir comment faire une évaluation, un diagnostic ajusté de la situation du chercheur d'emploi, qui répond à la fois à ses besoins et à ses difficultés d'insertion, qui respecte son environnement, ses choix et qui s'adapte au contexte de notre société? Ce qui nous préoccupe donc ici, c'est de savoir comment mesurer l'employabilité d'un individu. Dans le premier chapitre nous définirons ce qu'est l'employabilité. Et nous ferons le point sur les réalités du marché du travail. Nous ferons aussi une analyse de certains instruments de mesure d'employabilité déjà existants et nous présenterons un modèle théorique d'intervention en employabilité nouveau et à jour pouvant répondre au besoin d'un instrument de mesure, le Trèfle chanceux de Limoges. Dans le deuxième chapitre, nous verrons l'instrument de mesure de l'employabilité que nous jugeons le plus avancé; "Copilote insertion" de Clavier. Dans un souci de répondre au besoin de posséder un instrument de mesure d'employabilité, nous allons utiliser Copilote insertion afin de vérifier la taxonomie du Trèfle chanceux. Dans le troisième chapitre, nous vous proposons un jeu bâti sur le modèle du Trèfle Chanceux; L'emploi à la Carte, que nous comparerons, par la suite, à Copilote insertion pour en faire ressortir les différences et similarités. C'est dans le quatrième et dernier chapitre que vous pourrez retrouver des recommandations afin d'amorcer la construction d'un instrument intégrant Copilote insertion et le Trèfle chanceux, tout en respectant les priorités des deux auteurs.

Utilisation du logiciel Copilote Insertion pour l'évaluation des gains en employabilité de sujets ayant participé à un Service d'Intégration Socioprofessionnelle.

La situation du marché de l'emploi a subi ces dernières années, des changements de structure en profondeur. Le résultat est qu'au Québec, le taux réel d'inactivité révèle que près d'un adulte sur quatre est sans emploi. Parmi les personnes les plus touchées par ces changements on retrouve celles qui sont sans formation spécifique, sans diplôme ou bien sans expérience de travail. Pour rendre apte au travail cette mam d'oeuvre inactive, le Ministère de l'éducation a mis sur pied au milieu des années 90, une mesure d'aide à l'insertion appelée Services d'Intégration Socioprofessionnelle ou S.I.S. Dans le présent essai, nous avons cherché à évaluer le développement de l'employabilité de participants aux S.I.S. Selon les objectifs visés par le Service, on suppose que chaque personne aura acquis certaines attitudes et aptitudes au travail, susceptible de l'aider à retrouver du travail et de le conserver. Nous avons utilisé la structure de recherche test-retest sur le même échantillon. En effet, chaque participant s'est vu administrer le même questionnaire, au début et à la fin des S.I.S. Nous avons ainsi pu suivre l'évolution des facteurs en causes dans une insertion professionnelle. À cela s'ajoutent des données recueillies dans un journal de bord par l'évaluateur/animateur. Celles-ci sont reprises pour donner un sens dans l'analyse des résultats. La mesure utilisée est le questionnaire informatisé Copilote Insertion version 2.20. Celui-ci fut administré une première fois, à seize personnes présentes en amorce des S.LS. Pour la mesure post, nous avions plus que 8 personnes toujours disponibles et respectant le devis de recherche. Pour ces sujets, nous avons comparé chacun des vingt facteurs de Copilote, ainsi que l'évolution des stratégies d'insertion. Pour chacun d'eux, nous avons pu déterminer lesquels des facteurs d'employabilité évalué par le logiciel, démontraient une progression. Il a été démontré que l'ensemble des participants s'accordait beaucoup de difficulté à surmonter l'image de dépendance et d'incapacité, intériorisé avec l'expérience du chômage. Comme quoi, cette clientèle a à faire face à un certain nombre de deuil non résolu. À ce niveau, la structure des S.I.S semble permettre ce nécessaire recadrage de l'expérience chômage. Nous avons aussi observé que la composition du groupe n'a pas été réalisée en respectant le développement de l'employabilité de chacun des participants. Par conséquent, les plus enthousiasmes ont eu à subir l'inconfort de devoir faire face aux discours démotivant des personnes non-prêtes à s'insérer en emploi. La difficulté de sélectionner des personnes dont les besoins en matière de développement de l'employabilité ne seraient pas homogènes pourrait être surmontée si des activités individuelles personnalisées, sont présentées en alternance avec le travail de groupe. Autre constat réalisé est que malgré le temps passé à l'intérieur des SIS, des participants s'accordent plus de difficultés à la fin qu'au début, pour des facteurs d'employabilités. C'est le cas des facteurs du thème Communication de Copilote. La difficulté de mettre en branle une campagne visant la mise en marché de son potentiel de travail, cela vient confirmer que le participant, bien qu'il ait réalisé un bout du trajet le séparant du monde du travail, qu'il n'est pas parvenu à destination.

Identification des habiletés professionnelles requises des jeunes en insertion professionnelle pour des professions non spécialisées du secteur manufacturier

La question de l'intégration des jeunes au monde du travail est considérée de plus en plus importante dans notre société. En effet, de nombreuses recherches se sont attardées au problème de l'emploi chez les jeunes et plus précisément de leur transition entre le monde scolaire et le marché du travail. Plusieurs raisons sont à l'origine de cette difficulté d'insertion professionnelle des jeunes; mentionnons entre autres leur faible niveau de scolarité et leur manque d'habiletés professionnelles pour faire face au marché du travail qui est très mouvant. Certains disent qu'un investissement personnel dans l'éducation peut faciliter l'intégration au marché du travail. Mais qu'en est-il pour ceux qui ne peuvent capitaliser dans ce type d'investissement parce qu'ils éprouvent des difficultés d'adaptation et d'apprentissage les empêchant d'accéder à l'obtention du Diplôme d'Études Secondaires (D.E.S.), du Diplôme d'Études Professionnelles (D.E.P.) ou du Certificat d'Études Professionnelles (C.E.P.)? Nous constatons que parmi le nombre de jeunes qui désirent accéder à un emploi, certains d'entre eux n'y arrivent pas car ils ne possèdent pas les habiletés professionnelles requises même pour occuper des emplois non spécialisés. Nous voulons par cette recherche identifier et cerner les habiletés professionnelles nécessaires à l'exercice d'emplois et d'occupations non spécialisés afin de mieux préparer au travail les jeunes en difficulté d'adaptation et d'apprentissage et de leur assurer ainsi une plus grande réussite de leur insertion professionnelle. Dans la première partie de cette recherche, nous présentons la situation des jeunes sur le marché du travail, plus particulièrement ceux qui éprouvent des difficultés d'adaptation et d'apprentissage. Nous tenterons de montrer l'importance de la relation entre les habiletés professionnelles et le développement de carrière du jeune pour une insertion professionnelle dite réussie et par la suite, nous analyserons le programme des cheminements particuliers de formation des jeunes de 16 à 18 ans en insertion sociale et professionnelle afin d'apporter éventuellement des recommandations et de suggérer des outils pédagogiques susceptibles d'augmenter l'employabilité et l'adaptabilité de ces jeunes sur le marché du travail. Nous conclurons cette partie en précisant la pertinence de cette étude ainsi que les objectifs de recherche que nous désirons atteindre. Dans la deuxième partie, nous présentons la méthodologie que nous avons adoptée pour atteindre et réaliser nos objectifs de recherche. Nous mentionnerons entre autres l'échantillon choisi, l'instrument de recherche et le déroulement de l'expérience. Et pour terminer, les données obtenues seront présentées dans la troisième partie de cette recherche.

La première année d'insertion professionnelle des nouveaux enseignants du secondaire: comment se poursuit la construction de l'identité enseignante?

Des recherches récentes (Boies, 2012; Chong et Low, 2011; Riopel, 2006; Vallerand, 2008) ont démontré que les difficultés vécues par les enseignants lors de l’insertion professionnelle sont liées à la fragilité de leur identité professionnelle. Toutefois, peu de recherches ont étudié la construction identitaire des enseignants novices au cours de la première année d’insertion, ce que cette recherche exploratoire entend faire. Afin d’appréhender le processus dans son instantanéité, six enseignants novices du secondaire, cinq femmes et un homme, ont été suivis tout au long de leur première année d’insertion. Des données qualitatives ont été recueillies à l’aide de journaux de moments (Hess, 2006) tenus régulièrement ainsi qu'une entrevue semi-dirigée en début de première année. Nos résultats décrivent l’interaction entre les différentes sous-identités des novices (Day et Kington, 2008) constitutives de leur construction identitaire en proposant trois constats, c'est-à-dire l'unicité, la nécessité et la dualité des trois sous-identités au sein de l'articulation identitaire. Cette recherche contribue à une meilleure compréhension de l’expérience de la première année d’insertion et permet de proposer des améliorations à la formation initiale ainsi qu’aux mesures de soutien à l’insertion.

Complementation of the embryo-lethal T-DNA insertion mutant of AUXIN-BINDING-PROTEIN 1 (ABP1) with abp1 point mutated versions reveals crosstalk of ABP1 and phytochromes

The function of the extracytoplasmic AUXIN-BINDING-PROTEIN1 (ABP1) is largely enigmatic. We complemented a homozygous T-DNA insertion null mutant of ABP1 in Arabidopsis thaliana Wassilewskia with three mutated and one wild-type (wt) ABP1 cDNA, all tagged C-terminally with a strepII-FLAG tag upstream the KDEL signal. Based on in silico modelling, the abp1 mutants were predicted to have altered geometries of the auxin binding pocket and calculated auxin binding energies lower than the wt. Phenotypes linked to auxin transport were compromised in these three complemented abp1 mutants. Red light effects, such as elongation of hypocotyls in constant red (R) and far-red (FR) light, in white light supplemented by FR light simulating shade, and inhibition of gravitropism by R or FR, were all compromised in the complemented lines. Using auxin-or light-induced expression of marker genes, we showed that auxininduced expression was delayed already after 10 min, and light-induced expression within 60 min, even though TIR1/AFB or phyB are thought to act as receptors relevant for gene expression regulation. The expression of marker genes in seedlings responding to both auxin and shade showed that for both stimuli regulation of marker gene expression was altered after 10-20 min in the wild type and phyB mutant. The rapidity of expression responses provides a framework for the mechanics of functional interaction of ABP1 and phyB to trigger interwoven signalling pathways.

Synonymous co-variation across the E1/E2 gene junction of hepatitis C virus defines virion fitness

Hepatitis C virus is a positive-sense single-stranded RNA virus. The gene junction partitioning the viral glycoproteins E1 and E2 displays concurrent sequence evolution with the 3′-end of E1 highly conserved and the 5′-end of E2 highly heterogeneous. This gene junction is also believed to contain structured RNA elements, with a growing body of evidence suggesting that such structures can act as an additional level of viral replication and transcriptional control. We have previously used ultradeep pyrosequencing to analyze an amplicon library spanning the E1/E2 gene junction from a treatment naïve patient where samples were collected over 10 years of chronic HCV infection. During this timeframe maintenance of an in-frame insertion, recombination and humoral immune targeting of discrete virus sub-populations was reported. In the current study, we present evidence of epistatic evolution across the E1/E2 gene junction and observe the development of co-varying networks of codons set against a background of a complex virome with periodic shifts in population dominance. Overtime, the number of codons actively mutating decreases for all virus groupings. We identify strong synonymous co-variation between codon sites in a group of sequences harbouring a 3 bp in-frame insertion and propose that synonymous mutation acts to stabilize the RNA structural backbone.