Purification and characterisation of a lectin from the red marine alga Pterocladiella capillacea (S.G. Gmel.) Santel. & Hommers.

A lectin present in the marine red alga Pterocladiella capillacea was purified and characterised by extraction of soluble proteins (crude extract) in 20 mM Tris-HCl buffer, pH 7.5. Among the analysed erythrocytes (human blood group A, B and O and the animals ox, goat, chicken and rabbit) the lectin agglutinated specifically rabbit erythrocytes. The hemagglutinating activity assay showed that the lectin was not dependent on divalent cations and was shown to be inhibited by the glycoproteins avidin and mucin. The purification procedure was conduced by precipitation of the crude extract with 80% saturation ammonium sulfate (F0/80) followed by affinity chromatography on guar-gum column. The lectin of P. capillacea was purified 14.5 fold and had a recovery of 27.4% of the original total specific activity present in the crude extract. The absence of carbohydrate suggested that the lectin is not a glycoprotein. The molecular mass of P. capillacea lectin, determined by gel filtration, was 5.8 kDa. SDS-PAGE in the presence of ß-mercaptoethanol gave one band, indicating that the native lectin is a monomeric protein. The activation energy of denaturation process (D G') was calculated to be 106.87 kJ . mol-1 at 70 ºC.

Cylindrospermopsis raciborskii (Woloszynska) Seenayya & Subba Raju(Cyanobacteria): variação semanal e relações com fatores ambientais em um reservatório eutrófico, São Paulo, SP, Brasil

Florações de Cylindrospermopsis raciborskii têm sido cada vez mais freqüentes em reservatórios brasileiros em virtude da sua alta competitividade em ambientes tropicais eutrofizados. Esta espécie é produtora de toxinas extremamente agressivas, as quais podem causar problemas de saúde pública e danos ao meio ambiente. Nosso objetivo foi acompanhar a variação temporal da densidade desta população relacionando-a com variáveis ambientais e detectando os possíveis fatores que interferem no seu desenvolvimento. O lago estudado localiza-se na zona sul do Município de São Paulo (23º39' S e 46º37' W). É um corpo d'água eutrofizado e vem apresentando florações freqüentes de C. raciborskii. Amostras de água foram coletadas semanalmente, na parte mais profunda do lago, durante o período de setembro/97 a setembro/98. Foram analisados o perfil térmico, zona de mistura, transparência, zona eufótica, turbidez, pH, alcalinidade, condutividade, oxigênio dissolvido, nutrientes, clorofila a, densidade da população e densidade total da comunidade fitoplanctônica. A ordenação dos dados abióticos e bióticos foi feita através da análise de componentes principais (PCA) e análise de correspondência canônica (CCA). Durante os meses de novembro e dezembro/97 foram registrados os mais altos valores de densidade de C. raciborskii. Entre 10/12 e 17/12, a espécie contribuiu com 50% para a densidade total da comunidade. Nesse período foram registradas estratificações térmicas, elevados valores de temperatura da água e de turbidez e baixos valores de transparência da água. Os meses de outono e inverno de 1998 foram caracterizados pela ausência da espécie estudada, desestratificação térmica da coluna d'água, baixas temperaturas da água, altos valores de transparência (os maiores já registrados para o ambiente) e pelo aumento considerável dos bancos da macrófita aquática flutuante Eichhornia crassipes (Mart.) Solms. Tais interrelações são discutidas no presente trabalho.

Morphology, reproduction and development of Hypoglossum hypoglossoides (Stackhouse) Collins & Hervey (Ceramiales, Rhodophyta) from the south and southeastern Brazilian coast

Hypoglossum hypoglossoides (Stackhouse) Collins & Hervey is reported for the first time from the infralittoral of São Paulo and Santa Catarina states. The species was already reported to the states of Rio de Janeiro, Espírito Santo and Bahia as Hypoglossum tenuifolium (Harvey) J. Agardh var. carolinianum Williams. A detailed description of the morphology and reproduction is given based on field-collected material. Unialgal cultures were initiated from tetraspore germination, and growth rates of gametophytes were determined under different conditions of temperature, photoperiod and irradiance. Gametophytes grew well between 15 to 30 ºC, 14L:10D and 10L:14D photoperiods and irradiance from 20 to 120 µmol photons.m-2.s-1, but presented low percentage of fertile plants in low temperature (15 ºC). Gametophytes cultured in laboratory developed only male reproductive structures. Physiological responses of H. hypoglossoides indicate that the species is well adapted to temperature and light variations which could explain its range of vertical (6-26 m depth) and latitudinal distribution (from Fernando de Noronha to Santa Catarina) as well as the absence of sexual reproduction in the southern limit of its distribution.

Restabelecimento do gênero Sampaiella J.C. Gomes (Bignoniaceae)

Bignonia trichoclada DC. foi descrita a partir de material florífero e posteriormente foi transferida para Arrabidaea trichoclada (DC.) Bureau & K. Schum. Gomes posicionou-a no gênero monotípico Sampaiella especialmente pelo indumento tomentoso com tricomas dendríticos e grãos de pólen reticulados. Sandwith sinonimizou Sampaiella em Arrabidaea, mesmo desconhecendo os frutos. A recente descoberta de material frutífero permitiu caracterizar a espécie como tendo cápsula linear-oblonga, com três costelas inconspícuas e margem com alas, bastante distinta da cápsula de Arrabidaea. Os grãos de pólen de Sampaiella apresentam escultura reticulada, diferente da escultura microrreticulada de Arrabidaea. Devido a essas características diferenciais, é proposto o restabelecimento de Sampaiella J.C. Gomes, mas ainda deixa sem resposta seu verdadeiro relacionamento, que provavelmente poderá ser resolvido por estudos moleculares.

Germinação de sementes de Drymaria cordata (L.) Willd. ex Roem & Schult.: efeito do potencial hídrico

Modelos matemáticos baseados no conceito de graus dia ("thermal-time") e Ψw dia ("hydrotime") podem ser usados para a elaboração de modelos mais gerais sobre a germinação e emergência de plântulas no campo, podendo ser uma importante ferramenta para estudos sobre a biologia de plantas daninhas e seu controle. Neste trabalho, avaliou-se a germinação de sementes de D. cordata em resposta ao potencial hídrico (Ψw), usando-se o modelo Ψw dia. Tanto a germinabilidade como a velocidade de germinação decresceram linearmente com a redução do Ψw, atingindo valores próximos a zero em -0.8 MPa. Em temperatura ótima, a taxa de queda na germinação foi maior em comparação com as temperaturas sub- e supra-ótima. O Ψw base (Ψwb) mediano foi similar entre as temperaturas sub-ótima (19 ºC) e supra-ótima (32 ºC), mas foi maior (menos negativo) à temperatura ótima (25 ºC), mostrando que sementes de D. cordata são menos sensíveis à redução do potencial hídrico à 19 ºC do que à 25 ºC. O Ψw dia foi maior para sementes germinadas à temperatura sub-ótima do que à temperatura ótima, mostrando que a velocidade de germinação num dado potencial hídrico é maior em temperatura ótima. A quantidade de Ψw dia necessária para a germinação foi maior em temperatura supra-ótima do que em temperatura ótima, e menor em temperatura supra-ótima do que em sub-ótima. Em geral, Ψw dia foi relativamente constante entre as diferentes sub-populações. O modelo de Ψw dia pode descrever bem o efeito do potencial hídrico sobre as curvas de germinação (porcentagem acumulada x tempo), especialmente às temperaturas sub-ótima e supra-ótima.

Padrões de distribuição geográfica das espécies de Chamaecrista sect. Chamaecrista ser. Coriaceae (Benth.) H. S. Irwin & Barneby, Leguminosae - Caesalpinioideae

Uma análise de distribuição geográfica de Chamaecrista sect. Chamaecrista ser. Coriaceae foi realizada com base em mapas atualizados plotando as ocorrências conhecidas de 27 táxons (20 espécies) da série. Apenas uma espécie ocorre na região do Caribe, nas Bahamas, C. caribaea (Northr.) Britton, enquanto todas as demais estão presentes no principal centro de diversidade, a Cadeia do Espinhaço, exibindo dois padrões principais: 1) ocorrência contínua ou disjunta ao longo da Cadeia do Espinhaço e áreas adjacentes ou disjuntas e 2) espécies endêmicas da porção sul dessa formação montanhosa. Entre as disjunções, destacam-se três espécies, uma ocorrendo no Espinhaço e em serras do "Arco de Brasília" até Goiás (C. cardiostegia H. S. Irwin & Barneby), uma no Espinhaço e no Espírito Santo (C. mucronata (C. Sprengel) H. S. Irwin & Barneby) e outra centrada no Espinhaço e no Planalto das Guianas (C. roraimae (Benth.) Gleason). Os padrões de distribuição geográfica são discutidos com base em dados obtidos sobre outros grupos de angiospermas e uma análise realizada anteriormente com cinco espécies da série. Os resultados demonstram uma concentração de espécies restrita a regiões de altitude situadas no Domínio do Cerrado, corroborando o alto grau de endemismo já documentado em outros grupos na região. Essa análise constitui um primeiro passo para possibilitar estudos visando à compreensão dos processos responsáveis pela diversificação do grupo no cerrado, sobretudo em áreas elevadas.

Cyclic AMP increases the survival of ganglion cells in mixed retinal cell cultures in the absence of exogenous neurotrophic molecules, an effect that involves cholinergic activity

Natural cell death is a well-known degenerative phenomenon occurring during development of the nervous system. The role of trophic molecules produced by target and afferent cells as well as by glial cells has been extensively demonstrated. Literature data demonstrate that cAMP can modulate the survival of neuronal cells. Cultures of mixed retinal cells were treated with forskolin (an activator of the enzyme adenylyl cyclase) for 48 h. The results show that 50 µM forskolin induced a two-fold increase in the survival of retinal ganglion cells (RGCs) in the absence of exogenous trophic factors. This effect was dose dependent and abolished by 1 µM H89 (an inhibitor of protein kinase A), 1.25 µM chelerythrine chloride (an inhibitor of protein kinase C), 50 µM PD 98059 (an inhibitor of MEK), 25 µM Ly 294002 (an inhibitor of phosphatidylinositol-3 kinase), 30 nM brefeldin A (an inhibitor of polypeptide release), and 10 µM genistein or 1 ng/ml herbimycin (inhibitors of tyrosine kinase enzymes). The inhibition of muscarinic receptors by 10 µM atropine or 1 µM telenzepine also blocked the effect of forskolin. When we used 25 µM BAPTA, an intracellular calcium chelator, as well as 20 µM 5-fluoro-2'-deoxyuridine, an inhibitor of cell proliferation, we also abolished the effect. Our results indicate that cAMP plays an important role controlling the survival of RGCs. This effect is directly dependent on M1 receptor activation indicating that cholinergic activity mediates the increase in RGC survival. We propose a model which involves cholinergic amacrine cells and glial cells in the increase of RGC survival elicited by forskolin treatment.

Antinociceptive effect on mice of the hydroalcoholic fraction and (-) epicatechin obtained from Combretum leprosum Mart & Eich

Previous studies on Combretum leprosum, a tree growing in the Northeastern states of Brazil, have shown antinociceptive effects of the ethanol extract of its leaves and bark, but studies examining its constituents are rare. The objective of this study was to evaluate the antinociceptive effect of the hydroalcoholic fraction (HF) of one of its constituents, the flavonoid (-) epicatechin (EPI), administered orally to mice (20-30 g) in models of chemical nociception, and the possible mechanisms involved. Different doses of HF (62.5 to 500 mg/kg) and EPI (12.5 to 50 mg/kg) were evaluated in models of abdominal writhing, glutamate, capsaicin, and formalin in animals pretreated with different antagonists: naloxone, ondansetron, yohimbine, ketanserin, pindolol, atropine, and caffeine in the abdominal writhing test. To determine the role of nitric oxide, the animals were pretreated with L-arginine (600 mg/kg, ip) in the glutamate test. The HF was effective (P < 0.05) in all protocols at different doses and EPI was effective in the abdominal writhing, capsaicin and glutamate tests (P < 0.05) at doses of 25 and 50 mg/kg. However, in the formalin test it was only effective in the second phase at a dose of 25 mg/kg. The antinociceptive effect of HF was inhibited when HF was associated with yohimbine (0.15 mg/kg), ketanserine (0.03 mg/kg), and L-arginine (600 mg/kg), but not with the other antagonists. HF and EPI were effective in models of chemical nociception, with the suggested participation of the adrenergic, serotonergic and nitrergic systems in the antinociceptive effect of HF.

Distribution of human immunodeficiency virus type 1 subtypes in the state of Amazonas, Brazil, and subtype C identification

Few studies have reported the molecular epidemiological characterization of HIV-1 in the Northern region of Brazil. The present study reports the molecular and epidemiological characterization of 31 HIV-1 isolates from blood donors from the State of Amazonas who donated blood between April 2006 and March 2007. Serum/plasma samples from all donors were screened for HIV antibodies by ELISA and the results confirmed by Western blot analysis. Genomic DNA was extracted from the buffy coat using the Super Quik-Gene-DNA Isolation kit. Nested PCR was performed on the env, gag, and pol regions of HIV-1 using the Gene Amp PCR System 9700. Sequencing reactions were performed using the inner PCR primers and the DYEnamic™ ET Dye Terminator Kit, and phylogenetic analysis was performed using the gag, pol, and env gene sequences. We collected samples from 31 blood donors who tested positive for HIV-1 in confirmatory experiments. The male:female ratio of blood donors was 3.4:1, and the mean age was 32.4 years (range: 19 to 61 years). Phylogenetic analysis showed that subtype B is the most prevalent among Northern Brazilian HIV-1-seropositive blood donors. One HIV-1 subtype C and one circulating recombinant form (CRF_BF) of HIV-1 were identified in the State of Amazonas. This is the first study showing the occurrence of a possible "homogenous" subtype C in this region of Brazil. This finding could contribute to a better characterization of the HIV-1 strains that circulate in the country.

TEOR DE VITAMINA C, ATIVIDADE DE ASCORBATO OXIDASE E PERFIL SENSORIAL DE MANGA (Mangífera índica L.) VAR. HADEN, DURANTE O AMADURECIMENTO

A composição química e bioquímica da manga, varia de acordo com as condições da cultura, variedade e estágio de maturação, geralmente contendo alto conteúdo de ácido ascórbico. Com o objetivo de estabelecer o papel da ascorbato oxidase &amp;#091;E.C.1.10.3.3&amp;#093;, sobre os níveis de ácido ascórbico durante o processo de amadurecimento de manga (Mangífera índica L.) var. Haden, foram analisadas amostras da fruta correspondentes aos estágios verde maturo (zero) e armazenadas por 2, 4, 6, 8, 10, 12 e 14 dias a 20 ± 2oC. As amostras foram obtidas das polpas cortadas em pequenos cubos de aproximadamente 8 cm3 de 8 mangas com textura sem diferença significativa entre elas, medidas com auxílio de um penetrômetro Magness-Taylor. Em cada amostra foi determinada atividade de ascorbato oxidase para verificar sua participação em possíveis quedas de ácido ascórbico durante o amadurecimento das frutas. Também foram determinados periodicamente o teor de ácido ascórbico e o perfil sensorial durante o período de amadurecimento. A atividade enzimática foi determinada espectrofotometricamente a 245 nm 30oC, o ácido ascórbico foi analisado de acordo com a metodologia da AOAC modificada e a análise sensorial através de análise descritiva quantitativa. Os dados da análise sensorial foram analisados através de análise de variância (ANOVA), testes de médias de Tukey, análise de componentes principais e análise discriminante por passos. Durante o amadurecimento, a atividade da ascorbato oxidase aumentou e o teor de ácido ascórbico diminuiu, havendo significativa (pCE="Symbol">£0,05) correlação linear negativa (r=-0,98). Os termos descritores para a manga foram: sabor característico, aroma característico, acidez, adstringência, coloração amarela da polpa, doçura e suculência. O perfil sensorial apresentou significativa melhora com o amadurecimento. Todos os atributos sensoriais aumentaram significativamente (pCE="Symbol">£0,05) durante o amadurecimento das mangas, exceto acidez e adstringência.

Caracterização física e química da casca e polpa de jambo vermelho (Syzygium malaccensis, (L.) Merryl &amp; Perry)

O objetivo do trabalho foi avaliar as propriedades físicas e químicas, respectivamente da polpa e da casca do jambo vermelho (Syzygium malaccensis) para possível aproveitamento na produção de novos produtos. Frutos de jambeiro maduros apresentaram rendimento médio em polpa de 75,69%, umidade de 84,57 g de água.100 g-1 de polpa e relação DL/DT de 1,24, forma levemente elíptica ou oval; conferindo boas características para industrialização. A casca corresponde a 8,05% da polpa do fruto, é rica em fibras (9,34 g.100 g-1), em vitamina C (292,59 mg.100 g-1) e em antocianinas (300,54 mg.100 g-1 de casca). O pH de 3,5 classifica-a como muito ácida, favorecendo seu uso na fabricação de geleias para acidificação e em sucos para aumentar o rendimento. A casca de jambo é uma boa fonte de fibras, carboidratos e vitamina C, fornecendo 37 e 45% da IA de fibras e de carboidratos, respectivamente, e 390% da IDR de vitamina C. O jambo apresentou características físicas adequadas para a industrialização na forma de polpa congelada, sucos, doce em massa e em compota, geleias, néctares e sorvetes e a casca, propriedades físicas e químicas que permitem seu reaproveitamento como antioxidante, corante natural em alimentos e no enriquecimento de dietas em função dos altos teores de vitamina C e anticianinas.

Extraction optimization of antioxidant polysaccharides from leaves of Gynura bicolor (Roxb. &amp; Willd.) DC

Orthogonal design was employed to study the effect of extraction time, temperature and liquid-to-solid ratio on the production of antioxidant polysaccharides from leaves of Gynura bicolor (PLG). Analysis of variance was performed on the data obtained. The most relevant variable was extraction time. A liquid-solid ratio of 30:1 (v/w), a temperature of 80 °C and an extraction time of 3 h were found to be optimal for PLG. The optimal extraction yield of 4.9% was obtained through additional verification test. Hydroxyl radical-scavenging activity, reducing power and ferrous ion chelating ability of PLG were determined. PLG possess concentration-dependent antioxidant potency and IC50 of PLG was 4.67, 0.24 and 4.31 mg/mL for hydroxyl radical-scavenging and ferric ion chelating abilities as well as reducing power, respectively. The results suggest that G. bicolor polysaccharides could be potential source of natural antioxidant and be contributor to the health benefits of G. bicolor.

Caracterização morfológica e germinação de sementes de Curitiba prismatica (D. Legrand) Salywon &amp; Landrum

Este trabalho objetivou caracterizar morfologicamente as sementes e o desenvolvimento da plântula de Curitiba prismatica e verificar as melhores temperaturas, substratos e condição de luz para a germinação das sementes. A semente caracteriza-se como exalbuminosa e possui forma elíptica espiralada com tegumento coriáceo, de coloração castanho-escura. O embrião é descrito como cotiledonar pimentóide, axial, carnoso e cilíndrico, curvado em forma de "C" e de coloração branca. O desenvolvimento da plântula se inicia com a abertura do opérculo e uma pequena expansão do hipocótilo nesta região. Após esta expansão, ocorre o desenvolvimento de pêlos na base do hipocótilo, e a emissão da radícula por volta do 18o dia, sendo que aos 45 dias já se tem a plântula propriamente dita, caracterizada pelo surgimento dos eofilos. Os melhores valores para a porcentagem, tempo médio e velocidade de germinação das sementes de C. prismatica foram obtidos com a temperatura 25 ºC, nos substratos papel toalha e areia. A espécie pode ser classificada como fotoblástica positiva preferencial.

Régulation de protéine C-réactive vasculaire dans le diabète de type 2

Les maladies cardiovasculaires sont la principale cause de mortalité dans les pays occidentaux et représentent une complication majeure du syndrome métabolique. Il est maintenant largement admis que l’athérosclérose est une maladie inflammatoire chronique et que l’inflammation joue un rôle pathogénique majeur dans l’initiation et la progression de la maladie athéromateuse. Il a été démontré qu’une augmentation des niveaux sériques de la protéine c-réactive (CRP), une protéine de la phase aigüe et un important constituant de la réponse immunitaire de type inné, est associée à un risque cardiovasculaire accru. Ainsi, il a été documenté qu’une augmentation de CRP, tant chez les sujets sains que chez les sujets diabétiques, était associée à une augmentation du risque de morbidité et de mortalité cardiovasculaires. De multiples évidences suggèrent que la CRP puisse non seulement constituer un marqueur de risque des maladies cardiovasculaires mais aussi représenter un facteur pro-athérogénique direct. La dysfonction endothéliale représente un des stades les plus précoces du processus athérosclérotique et un rôle de la CRP dans la pathogenèse de la dysfonction endothéliale est postulé. Outre son origine systémique, la CRP est produite dans la lésion athérosclérotique et par diverses cellules vasculaires, dont les cellules endothéliales. Afin d’élucider le rôle de la CRP vasculaire dans l’altération de la fonction endothéliale associée au syndrome métabolique, nous avons étudié la régulation de l’expression endothéliale de la CRP par les acides gras libres (AGL) et le rôle de la CRP endothéliale dans l’inhibition de la synthèse d’oxyde nitrique (NO) par les AGL. Nos résultats démontrent que :1) l’acide palmitique (PA) induit l’expression génique de CRP au niveau de cellules endothéliales aortiques humaines (HAECs) en culture et, augmente, de manière dose-dépendante, l’expression protéique de la CRP; 2) La pré-incubation des HAECs avec des antioxydants et des inhibiteurs de la i) protéine kinase C (PKC), ii) du facteur nucléaire-kappa B, iii) des Janus kinases et des protéines de transduction et de régulation de la transcription et iv) des protéines kinases activées par les mitogènes prévient l’effet stimulant du PA sur l’expression protéique et génique de la CRP; 3) Le traitement des HAECs par le PA induit une augmentation de la production des espèces réactives oxygénées, un effet prévenu par les inhibiteurs de la PKC et par l’AICAR(5-amino-4-imidazole carboxamide 1-β-D-ribofuranoside), un activateur de la protéine kinase activée par l’AMP; 4) L’incubation des HAECs en présence de PA résulte enfin en une diminution de la production basale endothéliale de NO, un effet abrogé par la préincubation de ces cellules avec un anticorps anti-CRP. Dans l’ensemble, ces données démontrent un effet stimulant du PA sur l’expression de la CRP endothéliale via l’activation de kinases et de facteurs de transcription sensibles au stress oxydatif. Ils suggèrent en outre un rôle de la CRP dans la dysfonction endothéliale induite par les AGL.