Purification and properties of an alkaline protease of Aspergillus clavatus

An extracellular alkaline serine protease has been purified from a strain of Aspergillus clavatus, to apparent homogeneity, by ammonium sulfate precipitation and chromatography on Sephadex G-75. Its molar mass, estimated by SDS-PAGE, was 35 kDa. Maximum protease activity was observed at pH 9.5 and 40 degrees C. The enzyme was active between pH 6.0 and 11.0 and was found to be unstable up to 50 degrees C. Calcium at 5 mM increased its thermal stability. The protease was strongly inhibited by PMSF and chymostatin as well as by SDS, Tween 80 and carbonate ion. Substrate specificity was observed with N-p-Tos-Gly-Pro-Arg-p-nitroanilide and N-Suc-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide being active substates. Parts of the amino acid sequence were up to 81% homologous with those of several fungal alkaline serine proteases.

Purification and characterization of the exopolygalacturonase produced by Aspergillus giganteus in submerged cultures

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Initiating structural studies of Lys49-PLA2 homologues complexed with an anionic detergent, a fatty acid and a natural lipid

Lys49-Phospholipase A(2) (Lys49-PLA(2) - EC 3.1.1.4) homologues damage membranes by a Ca2+-independent mechanism which does not involve catalytic activity. Both MjTX-II from Bothrops moojeni and BthTX-I from Bothrops jararacussu are dimeric in solution and in the crystalline states, and a model for the Ca2+-independent membrane damaging mechanism has been suggested in which flexibility at the dimer interface region pert-nits quaternary structural transitions between open and closed membrane bound dimer conformations which results in the perturbation of membrane phospholipids and disruption of the bilayer structure [1]. With the aim of gaining insights into the structural determinants involved in protein/lipid association, we report here the crystallization and preliminary X-ray analysis of the (i) MjTX-II/SDS complex at a resolution of 2.78Angstrom, (ii) MjTX-II/STE complex at a resolution of 1.8 Angstrom and (W) BthTX-I/DMPC complex at 2.72Angstrom. These complexes were crystallized by the hanging drop vapour-diffusion technique in (i) HEPES buffer (pH 7.5) 1.8M ammonium sulfate with 2% (w/v) polyethyleneglycol 400, in (ii) 0.6-0.8 M sodium citrate as the precipitant (pH 6.0-6.5) and in (iii) sodium citrate buffer (pH 5.8) and PEG 4000 and 20% isopropanol, respectively. Single crystals of these complexes have been obtained and X-ray diffraction data have been collected at room temperature using a R-AXIS IV imaging plate system and graphite monochromated Cu Kalpha X-ray radiation generated by a Rigaku RU300 rotating anode generator for (i) and (W) and using using a Synchrotron Radiation Source (Laboratorio Nacional de Luz Sincrotron, LNLS, Campinas, Brazil) for (ii).

Crystallization and preliminary X-ray crystallographic studies of Protac (R), a commercial protein C activator isolated from Agkistrodon contortrix contortrix venom

The protein C pathway plays an important role in the control and regulation of the blood coagulation cascade and prevents the propagation of the clotting process on the endothelium surface. In physiological systems, protein C activation is catalyzed by thrombin, which requires thrombomodulin as a cofactor. The protein C activator from Agkistrodon contortrix contortrix acts directly on the zymogen of protein C converting it into the active form, independently of thrombomodulin. Suitable crystals of the protein C activator from Agkistrodon contortrix contortrix were obtained from a solution containing 2 M ammonium sulfate as the precipitant and these crystals diffracted to 1.95 angstrom resolution at a synchrotron beamline. The crystalline array belongs to the monoclinic space group C2 with unit cell dimensions a=80.4, b = 63.3 and c = 48.2 angstrom, alpha = gamma = 90.0 degrees and beta = 90.8 degrees. (C) 2005 Elsevier B.V. All rights reserved.

Glucose and Fructose Fermentation by Wine Yeasts in Media Containing Structurally Complex Nitrogen Sources

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Evaluation of Brazilian ethanol production yeasts for maltose fermentation in media containing structurally complex nitrogen sources

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Sucrose Fermentation by Brazilian Ethanol Production Yeasts in Media Containing Structurally Complex Nitrogen Sources

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

O efeito da complexidade estrutural da fonte de nitrogênio no transporte de amônio em Saccharomyces cerevisiae

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Detection of Cryptosporidium parvum oocysts in calf fecal samples by direct immunofluorescence assay

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Dinâmica do nitrogênio no solo em razão da calagem e adubação nitrogenada, com palha na superfície

Em sistemas com semeadura direta, a calagem tem sido aplicada superficialmente, causando excesso de calcário nos primeiros centímetros do perfil do solo, onde também é aplicado o N em cobertura e a densidade de comprimento radicular é alta. O objetivo deste trabalho foi estudar a dinâmica do N e do pH do solo em razão da calagem em superfície e aplicação de N em cobertura, na presença de palha. Plantas de algodão (Gossypium hirsutum) foram cultivadas, por 60 dias, em vasos que receberam calagem superficial ou incorporada e aplicação de doses equivalentes a 0, 50, 100 e 150 kg ha-1 de N em cobertura, na forma de sulfato de amônio; os vasos apresentavam, na superfície, o equivalente a 4 t ha-1 de palha de milheto. A calagem aumentou a mineralização e a nitrificação do N no solo, independentemente do modo de aplicação de calcário, aumentando a sua disponibilidade à planta e também a possibilidade de lixiviação. A absorção de N pela planta, além de sua imobilização pela massa microbiana do solo, neutralizou o efeito do adubo nitrogenado amoniacal no pH do solo. O algodoeiro respondeu melhor à calagem incorporada do que à superficial, mas esta resposta não foi causada por diferenças na disponibilidade de nitrogênio.

Aplicação de enxofre em cobertura no feijoeiro em sistema de plantio direto

Em lavouras de feijão, principalmente em cultivos com alta tecnologia, não tem sido dada a devida atenção ao fornecimento adequado de enxofre (S), utilizando doses subestimadas ou não aplicando o elemento via adubação, o que pode estar sendo um fator limitante ao incremento de produtividade. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da aplicação de S em cobertura na nutrição, nos componentes da produção e na produtividade de grãos do feijoeiro, em sistema de plantio direto (SPD). O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, com cinco repetições. Os tratamentos foram constituídos por cinco doses de S (0, 20, 40, 60 e 80 kg ha-1) aplicados em cobertura no estádio V4, tendo como fonte o sulfato de amônio. Aplicação de S em cobertura aumentou o teor do elemento nas folhas, a produção de matéria seca da parte aérea, o número vagens por planta e a produtividade de grãos do feijoeiro em SPD. em lavouras com alto nível tecnológico, a produtividade de grãos de feijão pode estar sendo limitado pela utilização de doses insuficientes de enxofre.

Produção e qualidade fisiológica de sementes de feijão-vagem em função de fontes e doses de nitrogênio

Estudaram-se os efeitos da aplicação de cinco doses e três fontes de nitrogênio sobre a produção e a qualidade fisiológica de sementes de feijão-vagem, cv. Macarrão Trepador - Hortivale, no período de setembro/2000 a fevereiro/2001, no Centro de Ciências Agrárias da Universidade Federal da Paraíba, em Areia. O delineamento experimental utilizado foi em blocos casualizados, com os tratamentos distribuídos em esquema fatorial (3 x 5) + 1, correspondendo às fontes (nitrato de cálcio, sulfato de amônio e uréia) e doses (0, 25, 50, 75 e 100kg.ha-1) de nitrogênio, e um tratamento adicional sem adubação (testemunha), com quatro repetições. As fontes nitrato de cálcio e sulfato de amônio, na dose de 100kg.ha-1, e uréia, na dose de 55kg.ha-1 de N, proporcionaram as produções de sementes no feijão-vagem de 2.571, 3.219 e 2.221kg.ha-1, respectivamente. O nitrogênio, em todas as fontes, influenciou positivamente a germinação e o vigor (índice de velocidade de germinação e emergência em campo) da semente do feijão-vagem. As doses de 68,8 e 49kg.ha-1 de N, fontes nitrato de cálcio e uréia foram responsáveis pelos valores máximos para a porcentagem de germinação, 72 e 75%, respectivamente. Para a fonte sulfato de amônio ocorreu aumento linear da porcentagem de germinação, à medida que se elevaram as doses de nitrogênio, sendo que na dose de 100kg.ha-1 obteve-se um porcentual de 84%. O índice de velocidade de germinação apresentou valores mais elevados, 6,0; 7,7 e 6,9 nas doses de 49; 71 e 53kg.ha-1 de N, fontes nitrato de cálcio, uréia e sulfato de amônio, respectivamente. A emergência em campo aumentou linearmente com elevação das doses de N (fonte nitrato de cálcio), sendo a emergência máxima (70%) obtida na dose de 100 kg ha-1 de N em cada fonte. O sulfato de amônio deve ser recomendado como fonte de N, em programas de produção de sementes de feijão-vagem.

Desempenho de híbridos de couve-flor de verão em Jaboticabal

Instalou-se um experimento, em campo aberto, com o objetivo de comparar o desempenho de oito híbridos de couve-flor de verão. Adotou-se o delineamento em blocos casualizados, com oito tratamentos e quatro repetições. A parcela experimental de 14 m² constou de 28 plantas distribuídas no espaçamento de 1,0 m entre linhas e 0,5 m entre plantas. Foram avaliados os híbridos de couve-flor: TPX00123, TPC00218, Sarah AF-1169, Sharon, Snow-Flake, First-Snow, Veneza e Verona. As adubações de cobertura foram realizadas com 10,5 kg de sulfato de amônio e 2,8 kg de cloreto de potássio, aplicados aos 15, 30, 45 e 60 dias após o transplante das mudas. A colheita das cabeças foi realizada quando começaram a atingir o ponto ideal de colheita com cabeças compactas e botões florais ainda unidos. Os híbridos TPC00218 e TPX00123 mostraram-se promissores, com produtividades comerciais de 23,8 e 23,2 t ha-1, respectivamente. O híbrido First-Snow possui baixo desenvolvimento de plantas e boa produtividade, podendo ser cultivado mais adensado. O híbrido Snow-Flake foi o que obteve menor produtividade, não sendo recomendado para plantio na região de Jaboticabal. Todos os híbridos testados apresentaram produção classificada na categoria extra e na classe 8 (maiores que 230 mm).

Lucratividade do milho em razão das fontes, doses e épocas de aplicação de nitrogênio

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Fontes e doses de nitrogênio para mamoneira de porte baixo no sistema plantio direto

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