Preparo de antígenos (Leprolinas Souza-Araujo) de culturas de bacilos ácido-álcool resistentes isolados de leprosos: seu emprêgo intradérmico, comparativamente com o da Lepromina, e subcutâneo ou intravenoso como tentativa terapêutica

The A. prepared five antigens from his leprosy cultures which by analogy with ROST's product he called Leprolins. The methods of its preparation and use are given. After a few tests to prove its innocuity for man the A. in cooperation with Dr. JOSÉ MARIANO, injected all five antigens intracutaneously in 120 patients. Now the products are being tested in 17 Leper Colonies of Brazil, in Argentina by Dr. SALOMON SCHUJMAN and in two leprosaria of Colombia. As antigen for skin tests the first results obtained are more or less identical with the results with Lepromin. Its use in serology for leprosy diagnosis will be made by Dr. T. PINTO of Rio, and Prof. LUIZ PRADO BARRIENTOS, of La Paz, Bolivia. As curative means the Leprolins are being injected into resistent lesions of leprosy and also by intraven injections, whose results Dr. José Mariano will publish soon. The Leprolins Souza-Araujo are put at disposal of all leprologists interested in its use.

Culturas de bacilos ácido-álcool resistentes isolados de hematófagos infectados em leprosos: evidências de se tratar do bacilo de Hansen

The A. summarises the history of his first culture of acidfast bacillus isolated directly from leprosy lesions (Sample José) and refers about two samples recovered from guinea pig and white rat inoculated with said culture. Then the A. completes his previous descriptions of four cultures of acidfast bacilli isolated by him from ticks (Amblyomma cajaennense and Boophilus microplus, two cultures from each species) infected experimentally in lepers. The A. having found specimens of two species of Triatomidae (Triatoma infestans and Panstrongylus megistus) naturally infected with HANSEN bacillus in huts habited by lepers in the State of Minas Gerais (Dec. 1942), started a series of experiments, using larvae and nymphs of T. infestans bred in laboratory at the Instituto Oswaldo Cruz, to infect in active cases of leprosy, in the city of Rio de Janeiro, could obtain two new samples of cultures of acid-fast bacilli (Ns. 6 and 7 of his set). In this papaer the A. studies the biological properties of said cultures, proving that Penicilin has not effect upon them, like other substances. The sulphuric and acetic acids were used to purify some of the cultures, with good results, the cultures becoming more rich and growing faster. Potassium hydroxide Sodium (10% solution) was also used with success to isolate and to purify the cultures, but it seems that it affects the bacilli in some way. In flud glycerinated media the majority of such cultures produce velum suitable for the preparation of antigens for skin tests and for therapeutical use. At last the A. says that he is becoming convinced that the HANSEN bacillus is in cause, especially after thee evidences of culturing the bacillus from one patient, in different opportunities.

Resultados comparativos das reações intra-dermicas com antígenos de bacilos ácido-alcool-resistentes (Leprolinas "Souza-Araújo") e emulsão de lepromas (Lepromina): (Primeira Nota)

Em 20 portadores de Lepra, internados na Colônia de São Roque, Paraná, 13 dos quais eram da forma lepromatosa e os 7 restantes da forma nervosa pura ou tuberculoide, o autor estudou a reação intradérmica de antigenos bacilares (Leprolinas Souza-Araujo 1, 1a, 3, 5, 5a), comparativamente com as reações produzidas, ao mesmo tempo, com antígeno lepromatoso (Emulsão de lepromas, lepromina). Observou o seguinte: 1.° - Que a lepromina, comportou-se como habitualmente, isto é, negativa nos lepromatosos e ositiva nos nervosos e tuberculoides e sempre mais intensa ao fim da quarta semana. 2.° - Que as leprolinas provocam reações, que o autor não conclui serem positivas ou negativas no sentido imunológico da expressão em virtude de estar estudando-as neste sentido, nos leprotomatosos e tuberculoides, mas, sempre mais intensas entre a 1.ª e 2.ª semanas, diminuindo de intensidade na 3.ª e desaparecendo ou quase desaparecendo ao fim da quarta semana: nódulos, nódulos-eritema, ulcerações. 3.° - Que nestas reações houve destruição de tecidos, pois a presença tardia de cicatrizes, mesmo quando não houve ulceração, mostra êste fato. 4.° - Que as inoculações das lepromina, não trouxeram nenhum inconveniente a saúde dos paciente; embora um deles tenha apresentado nos primeiros dias leve reação geral; outro, intensa fusão de suas lesões nodulars de lepra e, dois outros, a chamada Reação leprótica.

Cultura cromogênica de um bacilo ácido-álcool resistente, isolado de mosquito (Culicínio) capturado sôbre leproso, em plena natureza, com rétrocultura obtida de rato branco

1. Cultura cromogênica de um bacilo ácido-álcool-acetona resistente isolado de mosquito Culicíno, capturado em condições naturais, sôbre um enfêrmo lepromatoso L3. 2. Retro-cultura obtida em meio de Loewenstein do pus de abscesso dum rato branco, formado em 35 dias (ponto de inoculação, axila direita). O exame microscópico revelou abundantes globias e glóbulos brancos polinucleares fagocitando massas de bacilos ácido-álcool resistentes. 3. No próximo verão prosseguiremos nossos estudos, trabalhando em diferentes leprocômios do brasil, para confirmar o presente trabalho e poder chegar ás suas conclusões definitivas.

Novos cultivos cromogênicos de bacilos ácido-alcool resistentes isolados de mosquitos (Culicini), capturados sobre leprosos: II nota

1. O autor obteve três novas culturas de bacilos ácido-alcool resisten¬tes, isolados de mosquitos (Culicini) capturados sôbre leprosos, em condições naturais, no campo livre a um quilômetro aproximadamente de distância da Colônia Santa Fe. 2. As semeaduras praticadas com mosquistos normais,, capturados sôbre um cavalo, até hoje foram negativas, para bacilos ácido-alcool resistentes. 3. Os exames microscópicos de esfregaços de diferentes tribus de mosquitos silvestres, capturados em condições naturais, sôbre enfermos lepro-matosos, nas margens do rio "Peixe", deram um total de 22% de positivos, com 111 bacilos contaveis e algumas massas de bacilos ácido-alcool resistentes na laminas observadas. (V. quadro I). 4. Os mosquitos urbanos Cutex fatigans, capturados dentro da Colônia nos Pavilhões e vivendas isoladas com lepromatosos, deram um total de 20% de positivos, com 55 bacilos contaveis e alguns grupos de bacilos e globias de bacilos ácido-alcool resistentes. (V. quadro II). 5. Em 50 laminas com esfregaços de mosquitos Culicini normais, cap¬turados sôbre cavalo, encontramos uma só lamina 4 bacilos duvidosos. No resto, as laminas foram negativas para bacilos ácido-alcool resistentes. Estes estudos estão sendo continuados no Laboratório de Leprologia do Instituto Oswaldo Cruz. Assim também temos empreendido novas experiências trabalhando com mosquitos capturados sôbre leprosos nas proximidades do Hospital-Colônia Curupaity e com mosquitos capturados nos Pavilhões do Leprosário, contando com a colaboração do Prof. Oliveira Castro, na classificação do material, determinando rigorosamente as espécies dos mosquitos.

Ensaios sôbre lepra experimental: inoculações de três amostras de bacilos ácido-álcool resistentes (amostras "Chaves II", "Emilia" e "Hecke") isoladas de leprosos, em trinta doentes da Colônia Mirueira

Com o fim de produzir o fenômeno de KOCH, os A. A. inocularam em 30 leprosos da Colônia Mirueira (Recife), de várias idades e formas clínicas, emulsões vivas de três culturas de bacilos ácido-álcool resistentes isolados de leprosos pro um dêles (S.A.). As doses inoculadas foram de 0,2 cc., por via intradérmica, em cada doente, das amostras "CII", "E" e "H" e mais da Leprolina S.A. (antígeno morto). No 10º dia da inoculação verificou-se que 24 dos 30 pacientes tiveram reação geral intensa; 2, reação moderada e 4, nenhuma reação geral. 16 dos 30 tiveram reação leprótica, sendo 10 em casos ativos (lepromatosos) e 6 em inativos, e 17 dos 30 tiveram adenopatias inguinais. O inóculo "CII" produziu escaras de 1 x 1 e 2 x 2 cm. de diâmetro, com destruição total da pele, nos 30 pacientes (o total dêles); o inóculo "E" produziu escaras de igual intensidade em 29, o inóculo "H", escaras muitos mais benignas em 23, e a Leprolina em 10, naturalmente por ação concomitante de um dos outros três inóculos. No 10º dia foram semeadas em meio de LOEWENSTEIN secreções das escaras de sete dos 30 doentes, num total de 20 tubos, dos quais 19 produziram retroculuras, a amioria contaminada por fungos ou por bactérias cianófilas. De um doente foi obtido retrocultura cromogênica da escara produzida na intradérmoreação pela "Leprolina S. A.", macro e microscòpricamente indiferencável das amostras "CII" e "E". Aliás, pela extensiva experimentação feita com estas duas amostras, estamos nos inclinando por considerá-las como idênticas. No 18º dia da inoculação foram feitos 30 esfregaços de secreções de lesões experimentais de 13 doentes, com 15 resultados positivos (50%), apesar do exame tardio. As morfologias macro e microscópica das retroculturas obtidas em Recife confirmam os caracteres descritos nas culturas originais. Dêste rápido ensaio se conclui que a maioria dos pacientes apresentou o fenômeno de KOCH parcial ou integral, com as clássicas reações gerais, focais e locais. A falta de recursos de laboratório na Colônia não permitiu melhor aproveitamento de tão precioso material experimental, e por isso êste trabalho apresenta várias lacunas.

Isolamento e estudo experimental de duas novas culturas de bacilos ácido-alcool resistentes de muco nasal de leprosos

The A. described on December 14, 1951, his first culture of acid-fast bacillus isolated from nasal mucus of a leprous girl. in this paper the A. describes two new strains of acid-fast bacilli gotten also from nasal mucus of other two leprous girls, L3 cases. The first patient (layse S) had her mucus treated by petroff's method on December 16, 1952 and sown onto three tubes of loewenstein medium and in glycerin broth. After two weeks incubation at 37°C all three tubes of Loewenstein showed many punctiforme and pin-head yellowish colonies, whose microscopic examination proved to be of a pure acid-fast bacillus culture. This sample inoculated in rats and mice produced, after 55 days incubation, small tumors from which the culture was easily recovered. On April, 9, 1953 a new sample of nasal mucus of the same patient was sown in three tubes of Loewenstein. After two weeks incubation at 37°C all 3 tubes showed germination of small yellowish colonies of acid-fast bacilli. Within four months being gotten two samples of identical cultures in all smeared tubes of Loewenstein medium sown, proved that such cultures were not an ordinary ambient contamination. Second patient: - Maria N. After various sowing of different kinds of material from her, february 26, 1953 her nasal mucus treated by soda and sown onto Loewenstein medium, after 25 days incubation showed in only one tube, one small round colony, at first white, becoming creamy after three months. Transplants in various media grew at first slowly and after 2 or 3 generations grew faster. The "Layse" strain produced pellicle in glycerin broth and Dubos medium; the "Maria N." strain did not produce as yet. Both strains (Layse I and II, and Maria N.) gave weak positive Dubos test in half-an-hour and negative after 24 hours reading. Both were strongly positive when stained by Gram, Ziehl-Neelsen and Fontes methods. Both strains gave also positive fluoroscopy. These cultures are being studied. The A. concludes that, according to his experience, the slower growing cultures of acid-fast bacilli isolated from leprosy material, are the more suitable for experimental work. Aknowledgement. The A. thanks to Miss MARIA DE LOURDES SANTANA for her valuable collaboration in the studies of the described cultures.