Estratégias de propagação de barueiro (Dipteryx alata Vog.) e jatobazeiro do cerrado (Hymenaea stigonocarpa MART)

Pós-graduação em Agronomia - FEIS

Uso da ampicilina sódica e cloranfenicol no controle de contaminantes na micropropagação de bananeira 'Thap maeo'

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Ácido 2,3,5-tri-iodobenzoico (TIBA) na micropropagação de abacaxizeiro 'IAC Gomo-de-Mel'

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Estudo biotecnológico, citogenético e molecular em espécies de orquídeas endêmicas da flora brasileira

Pós-graduação em Biociências - FCLAS

In vitro conservation of Dendrobium germplasm

Dendrobium is a large genus in the family Orchidaceae that exhibits vast diversity in floral characteristics, which is of considerable importance to orchid breeders, biotechnologists and collectors. Native species have high value as a result of their medicinal properties, while their hybrids are important as ornamental commodities, either as cut flowers or potted plants and are thus veritable industrial crops. Thus, preservation of Dendrobium germplasm is valuable for species conservation, breeding programs and the floriculture industry. Cryopreservation represents the only safe, efficient and cost-effective long-term storage option to facilitate the conservation of genetic resources of plant species. This review highlights 16 years of literature related to the preservation of Dendrobium germplasm and comprises the most comprehensive assessment of thorough studies performed to date, which shows reliable and reproducible results. Air-drying, encapsulation-dehydration, encapsulation-vitrification, vitrification and droplet-vitrification are the current cryopreservation methodologies that have been used to cryopreserve Dendrobium germplasm. Mature seeds, pollen, protoplasts, shoot primordia, protocorms and somatic embryos or protocorm-like bodies (PLBs) have been cryopreserved with different levels of success. Encapsulation-vitrification and encapsulation-dehydration are the most used protocol, while PLBs represent the main explant explored.

Anatomical and ultrastructural analyses of in vitro organogenesis from root explants of commercial passion fruit (Passiflora edulis Sims)

This study aimed to characterize the anatomical events and ultrastructural aspects of direct and indirect in vitro organogenesis in Passiflora edulis. Root explants were cultured on induction medium, supplemented with 4.44 mu M 6-benzyladenine. Roots at different stages of development were collected and processed for observation by light microscopy and scanning and transmission electron microscopy. Patterns of direct and indirect regeneration were observed in the explants. During direct organogenesis, the organogenic buds and nodules, formed from meristemoids, originated from the pericycle regions distant from the cut surface. Completely differentiated buds were observed after 20 days of culture. During indirect organogenesis, bud formation occurred via meristemoids at the periphery of the calli, which differentiated from the cortical region of the initial explant. Regardless of the regeneration pattern, the meristemoids had similar ultrastructural characteristics; however, differences were reported in the nuclear shape of the cells of the meristemoids formed directly and indirectly. This study provides important information for enhancing the understanding and characterization of the organogenic process in non-meristematic explants and provides information on the use of roots as explants in genetic transformation protocols for this important tropical species.

In vitro propagation of Sacha inchi

The aim of this study was to perform an in vitro evaluation of the auxin: cytokinine ratio in different segments of the epicotyl and hypocotyl of Sacha inchi (Plukenetia Volubilis Linneo) seeds germinated in vitro. The segments apical (A), median (B) and basal (C) were introduced into semi-solid MS culture medium (2.0g L-1 Phytagel), supplemented with MS vitamins, sucrose (30.0g L-1) and submitted to three doses of auxin indolebutyric acid - IBA (0; 0.1; 0.5mg L-1), associated with four doses of the cytokinine benzylaminopurine - BAP (0; 0.1; 0.5; 1.0mg L-1), totaling 36 treatments. After nine weeks of in vitro cultivation, the apical segment ( A) presented shoot formation by direct organogenesis at the concentrations of 0.5 and 1.0 of BAP associated with 0.0 and 0.1 of IBA. It is feasible to use in vitro cultivation with the apical region of seeds germinated in vitro used as explants.

Axenic cell culture of the seagrass Cymodocea nodosa from cotyledonary tissue

[EN] Plant Tissue Culture, also called “micropropagation”, is the propagation of plants from different tissues (or explants) in a shorter time than conventional propagation, making use of the ability that many plant cells have to regenerate a whole plant (totipotency).There are two alternative mechanisms by which an explant can regenerate an entire plant, namely organogenesis and somatic embryogenesis. Since the last decades, the number of higher terrestrial plants species from which these techniques have been successfully applied has continually increased. However, few attempts have been carried out in marine plants. Previous seagrasses authors have focused their studies on i) vegetative propagation of rhizome fragments as explants in Ruppia maritima, Halophila engelmannii, Cymodocea nodosa and Posidonia oceanica; ii) culture of meristems in Heterozostera tasmanica, C. nodosa or P. oceanica; and iii) culture of germinated seeds on aseptic conditions, in Thalassia testudinum, H. ovalis, P. coriacea, P. oceanica, and H. decipiens. All these studies determine the most adequate culture medium for each species (seawater, nutrients, vitamins, carbon sources, etc...), often supplemented with different plant growth regulators and the necessary conditions for the culture maintenance, such as light and temperature. On the other hand, several studies have previously established protocols for cell or protoplast isolation in the species Zostera marina, Z. muelleri, P. oceanica, and C. nodosa, using shoots collected from natural meadows as original vegetal source, but further cell growth was never accomplished. Due to the absence of somatic embryogenesis or organogenetic studies in seagrasses we wonder: IS THE SUCCESSFUL APPLICATION OF TISSUE CULTURE TECHNIQUES POSSIBLE IN SEAGRASSES?

Micropropagación de vid : protocolo para variedades

Las variedades europeas han sido micropropagadas eficientemente a partir de estacas uninodales en el medio Galzy (1964) modificado; sin embargo las "criollas" no han presentado un buen crecimiento en ellos. Se trabajó con las variedades "criollas" de vid: Cereza, Criolla Chica, Criolla Grande, Pedro Giménez y Torrontés Riojano. Los medios evaluados fueron Murashige Skoog (MS) (1962) y Galzy (1964) modificado (GM), enteros o con macro y micronutrientes diluidos a la mitad, solidificados y líquidos y se emplearon dos tipos de explantos: estacas uninodales y ápices. También se probaron dos tipos de soportes para los explantos en medios líquidos. Si bien se observaron diferencias según el genotipo, en medio sólido el porcentaje de plantas crecidas no se vio afectado por el tipo de explanto utilizado en la siembra, presentando mayor crecimiento las plantas provenientes de ápices y las cultivadas en medio MS ½. Al trabajar con medios líquidos, con esponja vegetal como soporte de los explantos, las plantas no prosperaron. Con puente de papel los mejores resultados se obtuvieron cultivando ápices en medio MS ½. Los resultados sugieren que el mejor medio para icropropagar estas variedades de vid a partir de ambos tipos de explantos es MS ½ sólido.

Propagación de Lecanophora heterophylla : especie nativa con potencial ornamental

En este trabajo se presentan estudios de germinación y propagación in vitro de L. heterophylla, nativa con potencial ornamental. Se evaluó el efecto del momento y lugar de recolección sobre la germinación. Se recolectaron semillas en plena floración y al final de la misma, en dos localidades de la provincia de Mendoza: Gualtallary y Chacras de Coria. Las pruebas de germinación se realizaron en estufa a 20 °C. Las semillas provenientes de Gualtallary germinaron en mayor proporción que las de Chacras de Coria: en ambas localidades la máxima germinación se obtuvo en la recolección de plena floración. Para establecer un protocolo de micropropagación se realizaron dos ensayos de introducción y uno de multiplicación. En la introducción se evaluó el medio de cultivo MS entero o ½ de macronutrientes, en combinación con BA y AIB. En la multiplicación se evaluaron los medios MS ½ o ¼ de macronutrientes con 20 o 40 g.L-1 de sacarosa. No se encontraron diferencias en la sobrevivencia, el BA incrementó significativamente la proliferación de brotes. El mejor medio de multiplicación fue MS ¼ adicionado de 20 g.L-1 de sacarosa.

Micropropagación de Cissus tiliacea, planta del sur del estado de México

Se micropropagó Cissus tiliacea, recurso fitogenético con potencial agronómico y farmacológico, en los medios de cultivo Murashige-Skoog (MS) y Lloyd y McCown (WPM). En ambos medios se generaron resultados similares para número de brotes, nudos, hojas y raíces adventicias, sólo existió diferencia significativa (p ≤ 0,05) en la formación de callo. Para la multiplicación in vitro se utilizó WPM adicionado con 0; 0,5; 1,0; 1,5 ó 2,0 mg L-1 de benciladenina (BA) y se emplearon tres tipos de segmentos nodales (basal, medio y apical). Las concentraciones de 0 y 0,5 mg L-1 de BA resultaron en un mayor tamaño y desarrollo del explante, además permitieron la formación de 1,2 a 1,6 raíces por explante. Las concentraciones de 1,5 y 2,0 mg L-1 de BA indujeron la formación de callo. No existió diferencia significativa en las variables evaluadas por efecto del tipo de segmento nodal establecido in vitro. En el enraizamiento, en el medio MS, se evaluaron tres tipos de auxinas: ácido naftalen-1-acético (ANA), ácido indol-3-butírico (AIB) y ácido indol- 3-acético (AIA) a 0,5 mg L-1; el mayor número de raíces secundarias y diámetro de la raíz principal fue inducido por ANA, sin embargo AIB indujo una mayor elongación de la raíz principal. Los resultados del presente trabajo sugieren que el cultivo in vitro de C. tiliacea es una alternativa para su conservación y multiplicación.

Micropropagación de la enredadera nativa Mutisia subspinosa Cav.

La especie nativa Mutisia subspinosa es una enredadera perenne, resistente a heladas, con hermosas flores anaranjadas que presenta gran interés como ornamental. En trabajos previos de propagación a través de semillas o estacas se obtuvieron escasos resultados, lo que justificó el uso de la micropropagación. Para el establecimiento in vitro se utilizó el medio de Murashige Skoog (MS) diluido a la mitad. Se evaluó la adición de 6-bencilaminopurina (BAP) sola o en combinación con thidiazurón (TDZ) y un testigo sin hormonas. En la etapa de multiplicación se utilizó el mismo medio basal y se probaron dos auxinas: los ácidos indol butírico (AIB) y naftalén acético (ANA), además del uso de carbón activado. La composición del medio de cultivo más adecuada para el establecimiento fue la del testigo, mientras que para la multiplicación los mejores resultados se obtuvieron con la adición de 4 μmoles.L-1 de ANA. El agregado de 1 g.L-1 de carbón activado al medio de cultivo con 2,7 μmoles.L-1 mejoró la tasa de multiplicación y el enraizamiento.

In vitro propagation of Glandularia peruviana (L.) Small, an ornamental native plant from South America

The flower market is characterized by being both eager for novelties and highly competitive. The exploration of native species with ornamental potential represents a remarkable area of research, since it entails the introduction and development of novel promising ornamental crops. The genus Glandularia, widely distributed in Argentina, holds an enormous ornamental potential, due to the variety of colors of its inflorescences (red, violet, white, rose and lily), and extended flowering period. There is little information on tissue culture of Glandularia, thus highlighting the relevance of this research. In this work, the conditions for in vitro multiplication of G. peruviana were optimized. It was concluded that WPM supplemented with TDZ, in concentrations ranging from 1.1 to 9.0 μM, was the most adequate treatment, rendering a multiplication rate of approximately 10 de novo shoots per explant. This paper presents a protocol for the in vitro propagation of this species and introduces interesting prospects in the application of biotechnological tools to breed Glandularia.

Regeneración de plantas de té (Camellia sinensis) por cultivo in vitro de meristemas, yemas axilares y segmentos uninodales

Tres tipos de explantes de dos clones ( C H 1 4 I N TA y C H 3 1 8 I N TA ) d e t é (Camellia sinensis (L.) O. Kuntze) fueron evaluados para su regeneración in vitro, bajo la influencia de dos citocininas (BAP y CIN) y una giberelina (AG3). Previa desinfección, con etanol 70% (1 minuto) e hipoclorito de sodio 1,5% (20 minutos) y tres enjuagues con agua destilada estéril, los explantes fueron aislados y cultivados en los distintos medios de cultivo. Las mejores respuestas en formación de vástagos se registraron con los segmentos uninodales de ambos clones cultivados en el medio ½ MS + 1 mg/L de BAP o con el cultivo de yemas axilares del clon CH 14 INTA en el medio ½ MS + 1 mg/L de BAP o del clon CH 318 INTA en el medio ½ MS + 1 mg/L BAP + 1 mg/L AG3. Los mejores resultados con el empleo de meristemas caulinares se obtuvieron en el medio ½ MS + 1 mg/L de CIN y 1 mg/L de AG3. Los vástagos obtenidos fueron enraizados mediante su cultivo en ¼ MS + 6 mg/L de IBA.

Sustrato y dosis de fertirriego en la aclimatización de vitroplantas de Agave americana var. oaxacencis

Con la finalidad de asegurar la adaptación en invernadero de plantas de Agave americana var. oaxacensis obtenidas in vitro, se evaluó el efecto de sustratos y dosis de fertirriego en la aclimatización y crecimiento de 180 plantas. Este trabajo se realizó en un invernadero del Instituto Tecnológico del Valle de Oaxaca, México, a principios de 2012. Se utilizaron plantas recién salidas del laboratorio. El experimento se estableció según el diseño completamente al azar con arreglo factorial 2 (sustratos: arena y perlita) x 5 (fertilización: 1, 25, 50, 75 y 100%). La unidad experimental fue una planta en un recipiente de plástico de 150 cm3 con 18 repeticiones. La fertilización se basó en la solución universal de Steiner y diariamente cada planta recibió a nivel de sustrato 10 mL durante 12 semanas. Se evaluó el crecimiento en hojas, tallo y raíz, realizando análisis de varianza y prueba de medias (Tukey, α = 0,05). Todas las plantas se adaptaron, pero aquellas plantas establecidas en perlita lograron los mejores crecimientos en área foliar, volumen de raíz, peso fresco total, materia seca de raíz y total de planta. El tamaño de las plantas al término de su aclimatación estuvo en relación con la cantidad de nutrimentos de la solución nutritiva.