Autoinducer-2 plays a crucial role in gut colonization and probiotic functionality of Bifidobacterium breve UCC2003

In the present study we show that luxS of Bifidobacterium breve UCC2003 is involved in the production of the interspecies signaling molecule autoinducer-2 (AI-2), and that this gene is essential for gastrointestinal colonization of a murine host, while it is also involved in providing protection against Salmonella infection in Caenorhabditis elegans. We demonstrate that a B. breve luxS-insertion mutant is significantly more susceptible to iron chelators than the WT strain and that this sensitivity can be partially reverted in the presence of the AI-2 precursor DPD. Furthermore, we show that several genes of an iron starvation-induced gene cluster, which are downregulated in the luxS-insertion mutant and which encodes a presumed iron-uptake system, are transcriptionally upregulated under in vivo conditions. Mutation of two genes of this cluster in B. breve UCC2003 renders the derived mutant strains sensitive to iron chelators while deficient in their ability to confer gut pathogen protection to Salmonella-infected nematodes. Since a functional luxS gene is present in all tested members of the genus Bifidobacterium, we conclude that bifidobacteria operate a LuxS-mediated system for gut colonization and pathogen protection that is correlated with iron acquisition.

Développement d’outils moléculaires pour la tomographie d’émission par positrons

Résumé : L’imagerie TEP est une modalité puissante qui permet de suivre d’infimes concentrations de traceurs marqués pour la détection de cancers et d’autres pathologies. Il y a actuellement un intérêt croissant pour le développement de peptides comme outils diagnostiques et de traitement en oncologie. Cet intérêt se justifie entre autres par le fait que les peptides sont tolérants à la présence de chélateurs bifonctionnels ou de groupements prosthétiques pour le marquage avec divers radiométaux (64Cu, T1/2 = 12,7 h, 68Ga, T1/2 = 68 min, etc.) ou le 18F (T1/2 = 109,8 min) sans perte de leur activité biologique. L’objectif des travaux rapportés dans ce document était de développer des outils moléculaires innovateurs et efficaces qui facilitent le marquage de peptides pour l’imagerie TEP. Il s’agit spécifiquement d’un chélateur bifonctionnel et d’une méthode de conjugaison rapide et sélective de groupe prosthétique. Sur un volet, un chélateur bifonctionnel analogue de la lysine avec des ligands méthylhydroxamates a été synthétisé en solution par double bisalkylation. Les résultats préliminaires indiquent une faible chélation avec le Cu(II), mais sont à poursuivre avec les 68Ga et 89Zr. Pour le second volet de radiomarquage au 18F, les procédures synthétiques ont été optimisées en deux étapes, soient le marquage du groupe prothétique et sa conjugaison au peptide. Tout d’abord, des conditions de marquage par une réaction de SNAr en présence de 18F- ont été développées pour donner le groupe prosthétique 18F-thioester nécessaire à la conjugaison. Par la suite, sa conjugaison au peptide par la réaction de ligation chémosélective, ce qui implique trois étapes 1) une transthioestérification favorisée entre les groupements thioester et thiol des segments de peptides; 2) un réarrangement irréversible de l’intermédiaire thioester en N-(oxyalkyl)amide, suivi; 3) du clivage de l’auxiliaire. Par les présents travaux, il a été prouvé que la nouvelle méthodologie en un seul pot réactionnel accélère la réaction et permet le marquage au 18F de peptides non protégés, limitant ainsi les réactions secondaires et le nombre d’étapes après le marquage des peptides. La conjugaison du groupe prothétique à un composé et un peptide modèle se produit en 26-55 min comparativement aux 48 h des conditions originales rapportées. La méthode proposée permet également le marquage de peptides non protégés. Dans le futur, le chélateur bifonctionnel et le groupe prothétique seront conjugués à différents dérivés peptidiques ciblant des récepteurs impliqués dans le cancer et des tests de compétition, de saturation, de biodistribution et d’imagerie µTEP seront effectués.