Perfil de secreção de citocinas e de ativação de células endoteliais após interação com cepas selvagens e mutantes de Aspergillus fumigatus

Apesar do desenvolvimento de novas drogas antifúngicas e da sua utilização como terapia profilática visando à prevenção de infecções fúngicas invasivas, estas ainda constituem-se num problema emergente, com elevadas taxas de mortalidade. Neste contexto, destaca-se a aspergilose invasiva, uma infecção fúngica oportunista que acomete pacientes com neutropenia profunda e prolongada, principalmente os pacientes com leucemia aguda ou submetidos a transplante de medula óssea. Aspergillus fumigatus, um fungo filamentoso, é o principal agente etiológico da aspergilose invasiva, sendo um patógeno angioinvasivo. As hifas deste fungo são capazes de causar injúria e ativação endotelial, induzindo o endotélio a um fenótipo pró-trombótico, que por sua vez, é mediado pela secreção de citocinas pró-inflamatórias, em especial, o TNF-α. O presente trabalho teve como objetivo estudar a capacidade de cepas mutantes de A. fumigatus em ativar células endoteliais, avaliando o perfil de secreção de citocinas em meio condicionado e a expressão de fator tecidual. Resumidamente, monocamadas confluentes de células endoteliais isoladas da veia umbilical humana foram incubadas com conídios e tubos germinativos de cepas selvagens (Af293 e Ku80) e mutantes (Δugm1, ΔcalA, ΔcrzA, ΔprtT) de A. fumigatus. A taxa de adesão e endocitose destas cepas às monocamadas de HUVEC foi avaliada a partir de um ensaio quantitativo de imunofluorescência diferencial. O perfil cinético de secreção de citocinas foi determinado em meio condicionado das HUVECs, por ensaio de multiplex para IL-6, IL-8 e TNF-α. A ativação endotelial, por sua vez, foi determinada pela expressão de fator tecidual por RT-PCR em tempo real. Os resultados obtidos demonstraram que a mutante para o gene ugm1, responsável por codificar a enzima UDP-galactopiranose mutase, que converte resíduos de galactopiranose a galactofuranose, apresentou um fenótipo hiperaderente às células endoteliais e um estímulo 10 vezes maior à secreção de TNF-α e 2,5 vezes maior a secreção de IL-6, quando comparada a ativação observada para as cepas selvagens. A galactofuranose é um componente importante de glicoconjugados da parede celular de A. fumigatus. Dessa forma, a ausência desse monossacarídeo na célula fúngica leva a um mecanismo compensatório caracterizado por um aumento na expressão de moléculas de galactosaminogalactana na parede celular. De maneira contrária, mutantes para os genes calA e crzA, apresentaram um fenótipo hipoaderente às HUVECs e uma perda na capacidade de induzir a secreção de citocinas e ativar o endotélio. Essas mutantes apresentam deleções que interferem na via de cálcio/calcineurina, responsável por regular a morfogênese e virulência de A. fumigatus, além de apresentarem alterações no conteúdo de beta-1-3 glucana. Já a cepa ΔprtT, mutante para o fator de transcrição prtT que regula a secreção de múltiplas proteases, apresentou um fenótipo de adesão, estímulo e ativação endotelial semelhante ao observado para as cepas selvagens. A comparação entre a capacidade de conídios e tubos germinativos em ativar células endoteliais, corroborou achados anteriores da literatura que reportam que só hifas são capazes de ativar células endoteliais, independentemente da sua viabilidade. Os dados deste estudo permitiram concluir que dentre os componentes de superfície celular de A. fumigatus, os polímeros de galactose, em especial a galactosaminogalactana, parecem ser responsáveis, pelo menos em parte, pelos mecanismos de interação e ativação endotelial.

Ativação da via central anorexigênica pela Liraglutida (análogo do hormônio GLP-1) em modelo de obesidade induzida por dieta

No presente estudo, foram investigados o mecanismo central e a termogênese pelo tecido adiposo marrom (BAT) envolvidos com a perda de massa corporal (MC) observada com a administração de liraglutida (análoga do hormônio GLP1). Camundongos machos C57BL/6, foram alimentados com dieta padrão e tratados com veículo (SC) ou com liraglutida (SC/Lir) ou com dieta hiperlipídica e tratados com veículo (HF) ou com liraglutida (HF/Lir) Nossos resultados demostram que a administração de liraglutida aumentou o neuropeptídeo anorexigênico pro-opiomelanocortina no hipotálamo e diminuiu a expressão do mRNA da proteína supressora da sinalização de citocinas-3. A administração de liraglutida melhorou os níveis plasmáticos de adiponectina e diminuiu tanto a intolerância à glicose, como a resistência à insulina. Além do mais, tanto o grupo SC como o grupo HF, consumiram a mesma quantidade de comida, já o grupo SC/Lir comeu 17,5 menos comida comparado com o grupo SC e, da mesma forma, o grupo HF/lir diminuiu o consumo alimentar em 22,5% comparado com o grupo HF. A massa corporal final foi 8,5% menor no grupo SC/Lir comparado com o grupo SC e 16% menor no grupo HF comparado com o grupo HF/Lir. Além do mais, a administração de liraglutida aumentou o consumo de oxigênio e a produção de dióxido de carbono, e diminuiu o quociente respiratório. A liraglutida aumentou ainda os níveis do receptor beta 3 adrenérgico, da proteína desacopladora mitocondrial-1, do TC10 e do transportador de glicose estimulado pela insulina (GLUT)-4 no BAT. Em conclusão, a administração de liraglutida em camundongos obesos induzidos por dieta ativou a via anorexigênica, diminuindo o consumo alimentar, atuando sinergicamente com o aumento do gasto energético.

Papel do bloqueio dos receptores NMDA e da ativação dos receptores GABAA na manifestação dos déficits neurocomportamentais decorrentes da exposição ao etanol durante o período equivalente ao terceiro trimestre de gestação

A exposição gestacional ao etanol produz um amplo espectro de defeitos neurocomportamentais que podem persistir ao longo da vida. Dentre os distúrbios mais comumente observados estão o transtorno do déficit de atenção e hiperatividade (TDAH) e os déficits de aprendizado e memória. Apesar da grande quantidade de estudos, os mecanismos envolvidos com a manifestação destes transtornos permanecem pouco conhecidos. Estudos em roedores vêm demonstrando que o período equivalente ao terceiro trimestre de gestação é critico para o aparecimento destas alterações comportamentais. Durante este período, que é caracterizado por intensa sinaptogênese, a neurotoxicidade do etanol vem sendo atribuída ao bloqueio dos receptores glutamatérgicos do tipo N-metil-D-aspartato (NMDA) e hiperativação dos receptores do ácido gama-aminobutírico do subtipo A (GABAA). Tendo em vista que ao longo do desenvolvimento estes receptores diferem em relação a função e distribuição espaço-temporal, neste estudo avaliamos a contribuição relativa do bloqueio dos receptores NMDA e hiperativação dos receptores GABAA durante o período equivalente ao terceiro trimestre de gestação para a manifestação da hiperatividade locomotora e para os distúrbios de aprendizado e memória de camundongos pré-púberes. Para tanto, este estudo foi realizado em duas etapas. Na primeira, investigamos os efeitos da exposição isolada ao bloqueador NMDA MK801 (MK) e ao agonista GABAA muscimol (MU). Para tanto, em dias alternados do segundo dia pós-natal (PN2) a PN8, os animais receberam uma injeção intraperitoneal de Salina (SAL), MK nas doses de 0,1, 0,3 ou 0,5 mg/kg ou de MU nas doses de 0,1 0,3 ou 0,5 mg/kg. Na segunda etapa investigamos os efeitos da administração simultânea de MK (0,1mg/kg) e MU (doses 0,02, 0,1 ou 0,5 mg/kg). Em PN25, a atividade locomotora foi automaticamente avaliada por 15 min no teste de campo aberto. Em PN31 e PN32, o aprendizado e memória foi avaliado no teste da esquiva passiva inibitória. Em relação aos resultados da exposição isolada a cada uma das drogas, apenas o tratamento com MK promoveu um aumento dose dependente na atividade locomotora. No teste da esquiva passiva inibitória, os animais expostos as maiores doses de MK e MU apresentaram déficits de aprendizado e memória. Em relação aos resultados da exposição combinada de MK e MU, não foram observadas diferenças significativas entre os grupos na atividade locomotora. Na esquiva passiva inibitória, a administração simultânea de MK e MU, em doses que administradas isoladamente não tiveram efeito, promoveu prejuízos de aprendizado e memória. Nossos resultados sugerem que, enquanto a hiperatividade locomotora está associada apenas com o bloqueio dos receptores NMDA, os déficits de aprendizado e memória podem ser produto de uma ação sinergista do etanol nos dois receptores.

Rosuvastatina, doença hepática gordurosa não alcoólica e ativação das células estreladas hepáticas em camundongos

Introdução: A atual epidemia de obesidade tem chamado a atenção para a doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA). Atualmente não existe um medicamento para o tratamento da esteatose hepática, embora as estatinas sejam muito prescritas para pacientes obesos, este medicamento destina-se ao tratamento da hipercolesterolemia. Este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos da rosuvastatina em um modelo de obesidade induzida por dieta, como foco principal a DHGNA e os marcadores hepáticos da lipogênese e beta-oxidação e ativação de células estreladas hepáticas (CEHs) em camundongos. Métodos: Camundongos machos C57BL/6 receberam dieta padrão (SC, 10% de energia como lipídios) ou dieta rica em gorduras (HF, 50% de energia como lipídios) durante 12 semanas. Em seguida, 7 semanas de tratamento, foram feitas, formando os grupos: SC, SCR (SC + rosuvastatina), HF e HFR (HF + rosuvastatina). As análises bioquímicas e técnicas moleculares foram aplicadas para abordar os resultados plasmáticos e moleculares. Resultados: O grupo HF apresentou maiores valores de insulina, colesterol total, triglicerídeos e leptina que o grupo SC, todos os quais foram reduzidos significativamente após o tratamento com Rosuvastatina no grupo HFR. O grupo HF apresentou maior percentual de esteatose, assim como maior ativação das CEHs, enquanto que a rosuvastatina provocou uma redução de 21% na esteatose hepática e atenuou a ativação das CEHs no grupo HFR. Em concordância com os achados histológicos, as expressões de SREBP-1 e PPAR-gama foram aumentados nos animais HF e reduzido após o tratamento no grupo HFR. Por outro lado, a expressão reduzida de PPAR-alfa e CPT-1 foram encontrados nos animais HF, sendo tais parâmetros restaurados após o tratamento no grupo HFR. Conclusão: A rosuvastatina atenua significativamente a ativação das células estreladas na obesidade induzida por dieta, afetando o equilíbrio dos PPARs na lipotoxicidade. Diante desses achados a Rosuvastatina pode ser indicada como alternativa para auxiliar o tratamento da esteatose hepática.

Subpopulações e ativação de linfócitos T CD4+ e T CD8+ em crianças e adolescentes HIV positivos vacinados contra Neisseria meningitidis C

Neisseria meningitidis sorogrupo C (MenC) tem sido causador de surtos no Brasil, desde 2005. Vacinas conjugadas contra MenC estão disponíveis desde 1999 nos países desenvolvidos e mais recentemente no Brasil. São vacinas eficazes em pacientes imunologicamente normais, mas pouco se conhece sobre o impacto em pacientes HIV+. O objetivo principal deste estudo foi investigar se há alguma correlação entre a resposta de LT CD4+ de memória e a resposta de anticorpos específicos para o MenC, assim como conhecer as populações de memória dos LT CD8+, em crianças e adolescentes infectados pelo HIV respondedores ou não à vacina MenC conjugada. Amostras de sangue de 36 pacientes HIV+ foram coletadas antes e após imunização, para análises laboratoriais, soros e células coletadas foram congelados e enviados ao nosso laboratório para a análise da resposta imune humoral e celular. Utilizamos o ensaio bactericida para avaliar a resposta humoral e dividir a população de estudo em soroconversor positivo e soroconversor negativo. A citometria de fluxo foi aplicada para identificação das seis subpopulações de LT CD4+ e T CD8+ e avaliação do perfil de ativação. Não encontramos mudanças no perfil de distribuição das subpopulações antes e após a vacinação. A subpopulação LT CD4+ Int correlacionou positivamente com os títulos de anticorpos e a ativação, de um modo geral, estava elevada nos respondedores, conferindo certa importância para essa célula. Semelhanças foram observadas entre as subpopulações LT CD4+ e T CD8+. Em suma, este estudo revelou importantes associações entre a resposta de anticorpos bactericidas após a vacinação, o perfil de distribuição das subpopulações de LT CD4+ LT CD8+ e seu status de ativação.

Study of high performance Re-timing using a 40 Gb/s hybrid-integrated mach-zehnder all-optical regenerator

We experimentally show that a hybrid-integrated Mach-Zehnder switch with a high performance gate profile allows retiming of optical signals with an accuracy of 500-700fs even if the input timing jitter is increased to 3ps. © 2004 Optical Society of America.

Factors influencing the timing and frequency of spawning and fecundity of the goldlined seabream (Rhabdosargus sarba) (Sparidae) in the lower reaches of an estuary

We have studied the reproductive biology of the goldlined seabream (Rhabdosargus sarba) in the lower Swan River Estuary in Western Australia, focusing particularly on elucidating the factors influencing the duration, timing, and frequency of spawning and on determining potential annual fecundity. Our results demonstrate that 1) Rhabdosargus sarba has indeterminate fecundity, 2) oocyte hydration commences soon after dusk (ca. 18:30 h) and is complete by ca. 01:30−04:30 h and 3) fish with ovaries containing migratory nucleus oocytes, hydrated oocytes, or postovulatory follicles were caught between July and November. However, in July and August, their prevalence was low, whereas that of fish with ovaries containing substantial numbers of atretic yolk granule oocytes was high. Thus, spawning activity did not start to peak until September (early spring), when salinities were rising markedly from their winter minima. The prevalence of spawning was positively correlated with tidal height and was greatest on days when the tide changed from flood to ebb at ca. 06:00 h, i.e., just after spawning had ceased. Because our estimate of the average daily prevalence of spawning by females during the spawning season (July to November) was 36.5%, individual females were estimated to spawn, on average, at intervals of about 2.7 days and thus about 45 times during that period. Therefore, because female R. sarba with total lengths of 180, 220, and 260 mm were estimated to have batch fecundities of about 4500, 7700, and 12,400 eggs, respectively, they had potential annual fecundities of about 204,300, 346,100 and 557,500 eggs, respectively. Because spawning occurs just prior to strong ebb tides, the eggs of R. sarba are likely to be transported out of the estuary into coastal waters where salinities remain at ca. 35‰. Such downstream transport would account for the fact that, although R. sarba exhibits substantial spawning activity in the lower Swan River Estuary, few of its early juveniles are recruited into the nearshore shallow waters of this estuary.

The effect of timing of tagging on streamer-tag recapture rates for American lobster (Homarus americanus)

Streamer tags are commonly used to study the ecology and population biology of the American lobster (Homarus americanus). Aquarium observations suggest that streamer tag loss, either through tag-induced mortality or tag shedding, is related to the molt stage of the lobster at the time of tagging, and the molting event itself. Tag-induced mortality, where lobsters did not molt, occurred within eleven and sixteen days following tagging for lobsters tagged in postmolt (4%) and late premolt (10%) stages, respectively; whereas no lobsters tagged in early premolt or intermolt stages died. Taginduced mortality at time of molting was observed for lobsters tagged in late premolt stage (11%), and tag shedding was observed for lobsters tagged both in early (25%) and late premolt (11%) stages, but was significantly higher (P=0.014) for lobsters tagged in early premolt stages. Autopsies revealed that lobsters died mainly of organ perforations (hepato-pancreas and pericardial sac) following the tagging process, and rupture of the dorsal thoraco-abdominal membrane during the molting process. The total tag loss was estimated at 4% for lobsters tagged after molting, and 27% and 31% for lobsters tagged in early and late premolt stages, respectively. There was no tag loss for lobsters tagged in the intermolt stage during four months of laboratory observations (July−October). To minimize streamer tag loss, lobsters should be tagged during the intermolt or postmolt stage. Based on field studies, recapture rates for lobsters tagged in premolt stage are always lower than those of lobsters tagged in postmolt stage. Furthermore, recapture rates during the second year, for lobsters that molt in the year following tagging, were drastically reduced, and no lobster was recaptured after four years at large. Finally, to account for tag loss during the first year at large, a minimal adjustment of 24.9% (SD 2.9%) and 4.4% (SD 1.6%) for the recapture rate of lobsters tagged immediately before and after the molting season, respectively, is recommended. Adjustments beyond one year at large are not recommended for the American lobster at this time.

Quantitative determination of the timing of otolith ring formation from marginal increments in four marine teleost species from northwestern Australia

The sectioned otoliths of four fish species from a tropical demersal trawl fishery in Western Australia revealed a series of alternating trans-lucent and opaque zones in reflected light. The translucent zones, referred to as growth rings, were counted to determine fish ages. The width of the opaque zone on the periphery of the otolith section as a proportion of the width of the previous opaque zone (index of completion) was used to determine the periodicity of growth-ring formation. This article describes a method for modeling changes in the index of ring completion over time, from which a parameter for the most probable time of growth-ring formation (with confidence intervals) can be determined. The parameter estimate for the timing of new growth-ring formation for Lethrinus sp. 3 was from mid July to mid September, for Lutjanus vitta from early July to the end of August, for Nemipterus furcosus from mid July to late September, and for Lutjanus sebae from mid July to mid November. The confidence intervals for the timing of formation of growth rings was variable between species, being smallest for L. vitta, and variable between fish of the same species with different numbers of growth rings. The stock assessments of these commercially important species relies on aging information for all the age classes used in the assessment. This study demonstrated that growth rings on sectioned otoliths were laid down annually, irrespective of the number of growth rings, and also demonstrated that the timing of ring formation for these tropical species can be determined quantitatively (with confidence intervals.

Low short term timing jitter in an integrated monolithic extended cavity semiconductor mode-locked laser

Jitter measurements were performed on a monolithically integrated active/passive cavity multiple quantum well laser, actively mode-locked at 10 GHz via modulation of an absorber section. Sub-10 ps pulses were produced upon optimization of the drive conditions to the gain, distributed Bragg reflector, and absorber sections. A model was also developed using travelling wave rate equations. Simulation results suggest that spontaneous emission is the dominant cause of jitter, with carrier dynamics having a time constant of the order of 1 ns.