Encurtamento pelo frio de fibras musculares oxidativas de bovinos pela técnica de NADH-TR

Carcaças bovinas resfriadas rapidamente podem apresentar uma contração muscular conhecida como encurtamento pelo frio. Esse fenômeno, prejudicial à textura da carne, ocorre principalmente nas fibras musculares oxidativas. O objetivo deste trabalho foi disponibilizar uma ferramenta analítica para distinguir essas fibras e determinar com maior precisão a contração do tecido muscular pela mensuração do comprimento dos sarcômeros. Amostras do músculo Longissimus dorsi de 12 novilhas nelore foram coletadas. As amostras obtidas de uma das meias-carcaças foram submetidas a uma refrigeração rápida, e as amostras provenientes da outra meia-carcaça à refrigeração lenta. Foi testado um método analítico, baseado na técnica de coloração por Nicotinamida Adenina Dinucleotídeo - Tetrazolium Redutase (NADH-TR), para mensurar, por microscopia, o comprimento dos sarcômeros das fibras vermelhas. Foram determinadas as velocidades de queda de pH e temperatura, a área do olho de lombo (AOL) e a força de cisalhamento. Os resultados demonstraram que a temperatura é o principal fator responsável pelo comprimento do sarcômero quando a velocidade de resfriamento é rápida, sendo essa influência menor quando a queda de temperatura é mais lenta. Desta forma, demonstrou-se que a técnica de coloração com NADH-TR é capaz de detectar a ocorrência do encurtamento pelo frio nos músculos esqueléticos de bovinos.

Efeito inibidor do soro urêmico sobre o metabolismo oxidativo dos neutrófilos de cães

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Antiulcerogenic effect and cytotoxic activity of semi-synthetic crotonin obtained from Croton cajucara Benth.

Trans-dehydrocrotonin, the major diterpene isolated from the bark of Croton cajucara, has good antiulcerogenic activity which, however, is accompanied by toxic effects. on the basis of these results, a semi-synthetic crotonin, named 4SRC, was prepared to determine whether this substance has similar antiulcerogenic activity with lower or no toxicity. The natural crotonin was also isolated from the bark of C. cajucara but was not used due to the small amount obtained. The cytotoxic effect of semi-synthetic crotonin, expressed as cell viability, was assessed in (a) lung fibroblast cell line (V79) derived from Chinese hamsters, a system commonly used for cytotoxicity studies, and (b) rat hepatocytes isolated from male Wistar rats. After treatment, cell viability was determined by 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide reduction (MTT reduction), total acid content and neutral red uptake assays. To evaluate V79 cell viability, different concentrations of semi-synthetic crotonin were incubated with the cells. To evaluate the antiulcerogenic effects of semi-synthetic crotonin (50, 100 and 200 mg/kg), we used the models of gastric ulcer induced by ethanol/HCl, stress, indomethacin/bethanechol, and ethanol in male Swiss mice and male Wistar rats. The substance had an IC50 = 500 muM in the neutral red uptake and MTT reduction tests and an IC50 = 200 muM in the nucleic acid content test. With regard to hepatocyte viability after treatment with semi-synthetic crotonin at different concentrations, semi-synthetic crotonin had an IC50 = 10-500 muM in the nucleic acid content and MTT reduction tests and an IC50 = 120 muM in the neutral red uptake test. In another experiment, V79 cells were incubated with the metabolites produced by hepatocytes treated with different concentrations of semi-synthetic crotonin. After a 4-h incubation, semi-synthetic crotonin had an IC50 = 500 muM in the MTT reduction and neutral red uptake tests and an IC50 = 370 muM in nucleic acid content test. The substance had significant antiulcerogenic activity in all models studied, suggesting the presence of a possible antisecretory effect combined with a cytoprotective effect. For this reason, the effect of semi-synthetic crotonin was also evaluated on biochemical parameters of gastric juice and gastric wall mucus, both obtained from pylorus-ligated mice. No significant differences were observed in these parameters between semi-synthetic crotonin-treated and control animals. The results obtained with semi-synthetic crotonin are promising, with a significant preventive effect against gastric ulcer induced by different agents. Our data also show that semi-synthetic crotonin was less toxic than dehydrocrotonin and that the cytotoxic effects decreases with the time that isolated hepatocytes were in culture. (C) 2003 Elsevier B.V. B.V. All rights reserved.

Ischaemia and reperfusion effects on skeletal muscle tissue: morphological and histochemical studies

This was a study on the oxidative stress due to ischaemia (I) and reperfusion (R) in skeletal muscle tissue. Using a tourniquet, groups of rats were submitted to ischaemia for 4 h, followed by different reperfusion periods. The animals were divided in four groups: control; 4 h of ischaemia (IR); 4 h of ischaemia plus 1 h reperfusion (IR-1 h); 4 h of ischaemia plus 24 h reperfusion (IR-24 h); and 4 h of ischaemia plus 72 h reperfusion (IR-72 h). At the end of the procedures, samples of soleus muscle were collected and frozen in n-hexane at -70 degrees C. Cryostat sections were submitted to haematoxylin-eosin, succinate dehydrogenase (SDH) and nicotinamide adenine dinucleotide-tetrazolium reductase (NADH-TR) stains. An additional muscle sample was processed for electron microscopy. No alterations were found in control animals. IR group showed fibres had normal aspect besides some round, acidophilic and hypertrophic fibres. There were several fibres with angular outlines and smaller diameters in this group compared with control group. NADH-TR/SDH reaction was moderately intense in most fibres. In some fibres, cytoplasm showed areas without activity and other fibres had very intense reactivity. IR-1 h group showed oedema hypercontracted fibres with disorganized myofibrils, mitochondria with focal lesions and dilated sarcoplasmic reticulum. NADH-TR/SDH reaction was moderate to weak. IR-24 h showed intense inflammatory infiltrate in the endomysium and perimysium. NADH-TR/SDH reaction was similar to IR-1 h. IR-72 h showed necrotic fibres, areas with inflammatory infiltrate, reduced muscle fibres at different stages of necrosis and phagocytosis, and many small round and basophilic fibres characterizing a regeneration process. NADH-TR/SDH reaction was weak to negative. Our results suggest that ischaemia and the subsequent 1-, 24- and 72-h reperfusions induced progressive histological damage. Although progressive, it may be reversible because there were ultrastructural signs of recovery after 72-h reperfusion. This recovery could in part be due to the low oxidative stress identified by the morphological and histochemical analysis.

Cytotoxicity and Genotoxicity of Root Canal Sealers Based on Mineral Trioxide Aggregate

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)

Colorimetric enzymatic assay of L-malic acid using dehydrogenase from baker's yeast

A colorimetric method has been developed and optimized to measure L-malic acid in samples of fruit juices and wine. This method is based on oxidation of the analyte, catalyzed by malate dehydrogenase (MDH) from dry baker's yeast, and in combination with the reduction of a tetrazolium salt (MTT: 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide). In the present study, the method exhibited sensitivity in the range of 500-4000 mu M of L-malic acid in the reaction cuvette, with the lower detection limit of 6.7-10(-2) g/L, the upper limit of 53.6.10(-2) g/L and a maximum standard deviation of only 2.5 % for the analyzed samples. The MDH activity from baker's yeast was also optimized, the enzyme showed a high stability at pH=8.0-9.0 and the activity was maintained completely at temperatures up to 40 degrees C for 1 hour. The results show that the colorimetric method using enzymatic preparations from dry baker's yeast is a simple and low-cost method with possibility of wide application.

Controle de plantas daninhas pelo amicarbazone aplicado na presença de palha de cana-de-açúcar

Considerando que a palha pode alterar a dinâmica e a eficácia dos herbicidas no sistema de cana-crua e complementar a ação destes, o objetivo deste trabalho foi verificar a eficácia do amicarbazone no controle de plantas daninhas presentes em variadas circunstâncias, incluindo a possibilidade de absorção do herbicida diretamente da palha de cana-de-açúcar. Para isso, conduziu-se um experimento em vasos com quatro repetições, em que, além das testemunhas com e sem palha, o amicarbazone foi aplicado em diferentes situações: sobre 5 t ha-1 de palha; sobre o solo posteriormente recoberto com 5 t ha-1 de palha; sobre o solo sem cobertura de palha e com ou sem simulação de distintas quantidades de chuva aplicada antes ou após aplicação do produto. A dose de amicarbazone aplicada foi de 1.400 g ha-1 de ingrediente ativo (i.a.), com consumo de calda equivalente a 200 L ha-1. As plantas daninhas utilizadas foram Brachiaria plantaginea, Brachiaria decumbens, Ipomoea grandifolia e Cyperus rotundus. Avaliaram-se a porcentagem de controle das plantas daninhas aos 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49 e 56 DAA, nos tratamentos em que o amicarbazone foi aplicado em pré-emergência, e aos 3, 10, 17, 24, 31 e 38 DAA, quando o herbicida foi aplicado em pós-emergência; a biomassa seca aos 56 ou 38 DAA; e a viabilidade dos tubérculos de C. rotundus, pelo teste de tetrazólio na última avaliação. Verificou-se que, independentemente da planta daninha avaliada, os maiores índices de controle foram alcançados quando o amicarbazone foi aplicado sobre a palha, simulando-se em seguida precipitação correspondente a 2,5 ou 30 mm de chuva, e nos tratamentos em que o herbicida foi aplicado diretamente no solo desnudo ou recoberto com palha. Dessa forma, para I. grandifolia, B. plantaginea e B. decumbens, patamares mais elevados de controle foram alcançados quando o amicarbazone atingiu o solo, tanto aplicado diretamente como quando lixiviado da palha pela chuva simulada após a aplicação. Já para C. rotundus, as maiores porcentagens de controle foram observadas quando o amicarbazone foi aplicado sobre a palha, com simulação de chuva imediatamente após a aplicação, evidenciando que a lixiviação pode ser um processo fundamental para uma apropriada absorção e eficácia do herbicida avaliado.

Qualidade fisiológica de sementes de soja tratadas com fungicidas durante e após o armazenamento

O presente trabalho teve o objetivo de avaliar o efeito do tratamento fungicida durante e após a armazenagem, na qualidade fisiológica de sementes de soja. Utilizaram-se sementes da cultivar BR-16, produzidas na safra de 1999/2000 e armazenadas em Marechal Cândido Rondon - PR. Para o tratamento utilizou-se a mistura de carbendazin + thiram, na dosage de 30 e 70g de i.a./100kg de semente, respectivamente. Realizou-se o tratamento de amostras mensalmente, de maio a dezembro de 2000, sendo as sementes analisadas imediatamente após o procedimento. Sementes sem tratamento representaram a testemunha. As amostras tratadas e armazenadas foram analisadas e comparadas com as tratadas e analisadas imediatamente antes da semeadura (dezembro de 2000). A qualidade das sementes foi avaliada através dos testes de germinação, de tetrazólio para vigor e viabilidade e emergência em campo. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com quatro repetições por tratamento para cada teste. Realizou-se a comparação das médias através do teste de Tukey a 5% de probabilidade. O teste de germinação e o de tetrazólio não evidenciaram efeito negativo do tratamento fungicida anterior ao período de armazenagem sobre a qualidade das sementes. As sementes tratadas e não apresentaram decréscimo de viabilidade e de vigor, atingindo valores de germinação inferiores a 75%, em dezembro de 2000. Na emergência em campo, constatou-se que as sementes mantidas tratadas por mais de quatro meses apresentaram desempenho inferior comparativamente às tratadas nas demais épocas.

Aplicação do teste de tetrazólio em sementes de Gleditschia amorphoides Taub. Caesalpinaceae

Este trabalho teve como objetivos padronizar a metodologia do teste de tetrazólio e avaliar a aplicabilidade deste para estimar a viabilidade de sementes de Gleditschia amorphoides. Inicialmente, foram avaliados os seguintes tratamentos de pré-condicionamento: semente intacta, escarificação mecânica, escarificação seguida de 24 ou 48 horas de embebição em água, com e sem posterior retirada do tegumento. em seguida, as sementes foram submetidas a 1, 3 ou 6 horas de coloração em solução de 2, 3, 5 trifenil cloreto de tetrazólio às concentrações de 0,025; 0,050; 0,075 ou 0,10% a 35ºC, no escuro. Sementes escarificadas e embebidas por 48 horas, com retirada do tegumento, imersas em solução de tetrazólio a 0,075% por 3 horas apresentaram coloração ideal, possibilitando a identificação das sementes em viáveis e inviáveis. Utilizando o protocolo acima descrito, avaliou-se a adequação do teste de tetrazólio em estimar a viabilidade de sementes de Gleditschia amorphoides através da comparação com o teste de germinação. A comparação não resultou em diferenças significativas entre eles. O teste de tetrazólio utilizando solução a 0,075% por 3 horas pode ser utilizado na estimativa da viabilidade de sementes de Gleditschia amorphoides.

Potencial fisiológico de sementes de milho hidratadas pelo método do substrato de papel toalha

Na avaliação da qualidade de sementes pode ser necessária a hidratação das mesmas, como ocorre no teste de deterioração controlada que requer a uniformização do teor de água na amostra de sementes antes do processo de deterioração. Objetivou-se com o presente trabalho avaliar o potencial fisiológico de sementes de milho após a hidratação pelo método do substrato de papel toalha, sob diferentes temperaturas e quantidades de água no substrato, para elevar o teor de água para 15%, 20% e 25%. Foram avaliadas três quantidades de água no substrato (2,0; 2,5 e 3,0 vezes a massa do papel), sob temperaturas de 20 e 30°C. A qualidade inicial das sementes e após a hidratação foi determinada pelos seguintes testes: teor de água, massa de mil sementes, germinação, massa seca de plântulas, teste de frio, envelhecimento acelerado, condutividade elétrica, tetrazólio, porcentagem e velocidade de emergência das plântulas em campo. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey, a 5%, seguindo o delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial (3x2), independentemente para cada teor de água. A hidratação pelo método do substrato de papel toalha não afetou a germinação de sementes de milho, independentemente da temperatura e das proporções de água no substrato. As proporções de 2,0 e 2,5 vezes a massa do substrato papel toalha em água para a temperatura de 30°C e de 3,0 vezes a massa do substrato para a temperatura de 20°C não alteraram o potencial fisiológico das sementes, mostrando-se adequadas para hidratação de sementes de milho para teores de água de 15, 20 e 25%.

Aplicação do teste de raios x no estudo da morfologia interna e da qualidade fisiológica de aquênios de arnica (Lychnophora pinaster Mart.)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

Contribuição de etapas do beneficiamento na qualidade fisiológica de sementes de dois híbridos de milho

O objetivo do trabalho foi verificar a qualidade fisiológica de sementes durante as após várias etapas do beneficiamento de dois híbridos de milho e a contribuição de cada equipamento na melhoria da qualidade das sementes. Foram coletadas amostras de sementes chatas de dois híbridos, peneira 22 L, na recepção e após as fases de secagem, pré-limpeza, limpeza, separação por espessura, mesa gravitacional e quando as sementes encontravam-se prontas para embalagem, totalizando sete etapas do beneficiamento mais uma testemunha (colheita e debulha manual). Realizou-se o teste de germinação, análise de pureza, primeira contagem, índice de velocidade de germinação, envelhecimento acelerado, teste de tretrazólio, teste de frio, comprimento de raiz primária e parte aérea, matéria seca de plântulas, emergência em solo e deterioração controlada. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com quatro repetições por tratamento/teste, analisando-se cada híbrido separadamente. O beneficiamento promoveu melhoria na qualidade das sementes, sendo que aquelas obtidas após a mesa gravitacional e as prontas para ensaque, foram no conjunto de observações, as que apresentaram melhor qualidade fisiológica.

Teste de deterioração controlada na avaliação do vigor de sementes de milho

Objetivou-se com este trabalho estudar combinações de tempo e temperatura na adequação do teste de deterioração controlada para avaliação do vigor de sementes de milho com diferentes teores de água. Foram utilizados oito lotes de sementes de milho híbrido CO32, cuja qualidade inicial foi determinada pelos testes de: teor de água, massa de mil sementes, porcentagens de germinação e de plântulas normais na primeira contagem do teste de germinação, massa seca das porções aérea, radicular e total de plântulas, teste de frio, teste de envelhecimento acelerado, teste de condutividade elétrica, tetrazólio, emergência de plântulas no campo e velocidade de emergência de plântulas no campo. A umidade inicial dos lotes de sementes foi ajustada pelo método de imersão em água para 15, 20 e 25%. Para cada teor de água foram avaliadas nove combinações de períodos (16, 24 e 48 horas) e temperaturas de deterioração (42, 45 e 48 °C). Após a deterioração determinou-se o teor de água e a porcentagem de germinação das sementes. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey e análise de correlação aos 5% em esquema fatorial 9X8, sendo nove combinações de tempo e temperatura e oito lotes de sementes. As combinações 24 h-45 °C, 48 h-45 °C e 16 h-45 °C para sementes com teor de água ajustado para 15, 20 e 25%, respectivamente, são eficientes para avaliação do vigor de sementes de milho pelo teste de deterioração controlada.

Viability of recently harvested and stored Xylopia aromatica (Lam.) Mart. (Annonaceae) seeds

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Effects of nandrolone decanoate on the neuromuscular junction of rats submitted to swimming

This study addressed the effects of nandrolone decanoate (ND) on contractile properties and muscle fiber characteristics of rats submitted to swimming. Male Wistar rats were grouped in sedentary (S), swimming (Sw), sedentary+ND (SND), and swimming+ND (SwND), six animals per group. ND (3 mg/kg) was injected (subcutaneously) 5 days/week, for 4 weeks. Swimming consisted of 60-min sessions (load 2%), 5 days/week, for 4 weeks. After this period, the sciatic nerve extensor digitorum longus (EDL) muscle was isolated for myographic recordings. Fatigue resistance was assessed by the percent (%) decline of 180 direct tetanic contractions (30 Hz). Safety margin of synaptic transmission was determined from the resistance to the blockade of indirectly evoked twitches (0.5 Hz) induced by pancuronium (5 to 9 x 10(-7) M). EDL muscles were also submitted to histological and histochemical analysis (haematoxylin-eosin (HE); nicotinamide adenine dinucleotide-tetrazolium reductase (NADH-TR)). Significant differences were detected by two-way ANOVA (p<0.05). ND did not change body mass, fatigue resistance or kinetic properties of indirect twitches in either sedentary or swimming rats. In contrast, ND reduced the safety margin of synaptic transmission in sedentary animals (SND=53.3+/-4.7% vs. S=75.7+/-2.0%), but did not affect the safety margin in the swimming rats (SwND=75.81+/-3.1% vs. Sw=71.0+/-4.0%). No significant difference in fiber type proportions or diameters was observed in EDL muscle of any experimental group. These results indicate that ND does not act as an ergogenic reinforcement in rats submitted to 4 weeks of swimming. on the other hand, this study revealed an important toxic effect of ND, that it reduces the safety margin of synaptic transmission in sedentary animals. Such an effect is masked when associated with physical exercise. (C) 2004 Elsevier B.V. All rights reserved.