Modification of the substrate specificity of an acyl-acyl carrier protein thioesterase by protein engineering.

The plant acyl-acyl carrier protein (ACP) thioesterases (TEs) are of biochemical interest because of their roles in fatty acid synthesis and their utilities in the bioengineering of plant seed oils. When the FatB1 cDNA encoding a 12:0-ACP TE (Uc FatB1) from California bay, Umbellularia californica (Uc) was expressed in Escherichia coli and in developing oilseeds of the plants Arabidopsis thaliana and Brassica napus, large amounts of laurate (12:0) and small amounts of myristate (14:0) were accumulated. We have isolated a TE cDNA from camphor (Cinnamomum camphorum) (Cc) seeds that shares 92% amino acid identity with Uc FatB1. This TE, Cc FatB1, mainly hydrolyzes 14:0-ACP as shown by E. coli expression. We have investigated the roles of the N- and C-terminal regions in determining substrate specificity by constructing two chimeric enzymes, in which the N-terminal portion of one protein is fused to the C-terminal portion of the other. Our results show that the C-terminal two-thirds of the protein is critical for the specificity. By site-directed mutagenesis, we have replaced several amino acids in Uc FatB1 by using the Cc FatB1 sequence as a guide. A double mutant, which changes Met-197 to an Arg and Arg-199 to a His (M197R/R199H), turns Uc FatB1 into a 12:0/14:0 TE with equal preference for both substrates. Another mutation, T231K, by itself does not effect the specificity. However, when it is combined with the double mutant to generate a triple mutant (M197R/R199H/T231K), Uc FatB1 is converted to a 14:0-ACP TE. Expression of the double-mutant cDNA in E. coli K27, a strain deficient in fatty acid degradation, results in accumulation of similar amounts of 12:0 and 14:0. Meanwhile the E. coli expressing the triple-mutant cDNA produces predominantly 14:0 with very small amounts of 12:0. Kinetic studies indicate that both wild-type Uc FatB1 and the triple mutant have similar values of Km,app with respect to 14:0-ACP. Inhibitory studies also show that 12:0-ACP is a good competitive inhibitor with respect to 14:0-ACP in both the wild type and the triple mutant. These results imply that both 12:0- and 14:0-ACP can bind to the two proteins equally well, but in the case of the triple mutant, the hydrolysis of 12:0-ACP is severely impaired. The ability to modify TE specificity should allow the production of additional "designer oils" in genetically engineered plants.

Avaliação do potencial de utilização de espécies leguminosas, arbóreas e arbustivas, noduladas e micorrizadas, na revegetação de barragem de rejeitos da Companhia Mineira de Metais, Vazante, MG

O processo de beneficiamento do zinco, extraído em Vazante pela Companhia Mineira de Metais - CMM produz um rejeito alcalino e com baixa disponibilidade de nutrientes. Esta dissertação tem como objetivo avaliar o potencial de utilização de espécies leguminosas noduladas e micorrizadas na revegetação de barragem de rejeito da CMM. Neste sentido, foram instalados dois experimentos de campo onde foi realizado o plantio prévio de Brachiaria sp. O primeiro experimento foi composto por 36 tratamentos que foram formados por uma combinação de 17 espécies + 1 testemunha (ausência de plantas) na presença e na ausência de esterco de curral (2,0 L) na cova de plantio. Cada unidade experimental foi formada por 20 exemplares da mesma espécie que foram plantadas em covas abertas manualmente (25 x 25 x 25 cm) num espaçamento de 2 x 2 m. Todas as covas receberam a adubação básica formada por 125 g de superfosfato simples e 60 g de cloreto de potássio. Entre as 17 espécies avaliadas, 3 não pertencem a família Leguminosae e receberam, além da adubação básica, cerca de 25 g de sulfato de amônio por cobertura. O segundo experimento foi montado com o objetivo de avaliar o potencial de espécies leguminosas beneficiarem o estabelecimento e crescimento de espécies não leguminosas na revegetação de barragem de rejeito da CMM. Foram utilizadas três espécies leguminosas (Enterolobium scomburkii, Acacia mangium e Acacia holosericea) e três não leguminosas (Lithraea brasiliensis, Cinnamomum glaziovii e Eugenia jambolana) num esquema fatorial (3 x 3) + 1 testemunha, formando dez tratamentos distribuídos em blocos ao acaso com três repetições. Cada parcela foi formada por 20 plantas (10 leguminosas + 10 não leguminosas) plantadas em espaçamento 2 x 2 m e com a mesma adubação básica utilizada no primeiro experimento. Todas as espécies leguminosas utilizadas foram previamente inoculadas com estirpes selecionadas de bactérias fixadoras de Nitrogênio atmosférico e com uma mistura de fungos micorrízicos provenientes da Embrapa/Agrobiologia. Os experimentos foram avaliados quanto ao estabelecimento e crescimento de plantas (altura e diâmetro do colo) aos 4, 12 e 24 meses após o plantio. Os resultados obtidos permitem concluir que dentre as espécies avaliadas, as mais indicadas para a primeira etapa da revegetação da barragem de rejeito da CMM são: Acacia holosericea, Acacia farnesiana, Acacia auriculiformis, Mimosa caesalpiniifolia, Leucaena leucocephala, Mimosa birmucronata, Enterolobium schomburkii e Prosopis juliflora. O sucesso do consórcio de espécies leguminosas e não leguminosas depende da escolha das espécies a serem combinadas, de maneira que não exista uma efetiva competição por água, nutrientes e luz que possa prejudicar as espécies de menor plasticidade. Das combinações avaliadas, as de maiores potencialidades para o programa de revegetação das barragens de rejeito da CMM são aquelas envolvendo a espécieLithraea brasiliensis.

Estudo do efeito de máscara e do efeito terapêutico de dois colutórios na redução da halitose

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Ação terapêutica da canela

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Clarorum hispanorum opuscula selecta et rariora tum latina, tum hispana magna ex parte nunc primum in lucem edita /

Hieronymi Ramiri De raptu innocentis martyris guardiensis libri VI ..., p. 1-101, con una port. propia y pie de imp.: Madriti : apud Petrum Madrigal, 1592. -- Ioannis Gelidae Valentini Burdigalensis Ludimagistri, Epistolae aliquot et carmina, p. 103-156, con una port. propia y pie de imp.: Rochellae : apud Bartholomaeum Bertonem, 1571. -- Academica siue De iudicio erga verum ex ipsis primis fontibus / opera Petri Valentiae ..., p. 157-252, con una port. propia y pie de imp.: Antverpiae : ex officina Plantiniana : apud viduam et Ioannem Moretum, 1596. -- Syntra Aloisiae Sygaeae toletanae : aliaque eiusdem ac nonnullorum praeterea virorum ad eamdem epigrammata : quibus accessit Pauli III P.M. epistola de singulari eius doctrina ac ingenii Praestantia tumulus eiusdem / ab Andrea Resendio et Claudio Monsello concinnatus, [2], p. 257-270, con una port. propia y pie de imp.: Parisiis : ex typographia Dionysii A Prato ..., 1566. -- Apologia Aristotelis adversus eos que aiunt sensisse animam cum corpore exstingui ... / auctore Gasparo Cardillo Villalpandeo ..., p. 271-346, con una port. propia y pie de imp.: Compluti : ex officina Ioannes Britonii, 1560. -- Commentarius praecipuarum rerum quae in conciliis toletanis continentur / auctore Gasparo Cardillo Villalpandeo ..., p. 347-498, con una port. propia y pie de imp.: Compluti : ex officina Ioannis a Villanova, 1570. -- Io. Bapt. Cardonae episcopi Dertosani De Regia S. Laurentii Bibliotheca ; De pontificia Vaticana ; De expungendis haereticorum propriis nominibus ; De diptychis, p. 499-620, con una port. propia y pie de imp.: Tarracone : apud Philippum Mey, 1587. -- Oratio de D. Stephano protomartyre habita in sacello Rom. Pont. anno iubilaei MDLXXV sub Gregorio XIII / a Io. Baptista Cardona ..., p. 621-630, con una port. propia y pie de imp.: Lugduni : excudebat Petrus Rousin, 1575. -- Tratado de las ocho questiones del Templo propuestas por el ... Duque del Infantadgo i respondidas por el doctor Vergara canonigo de Toledo. Segunda impression, [2], 94 p., con una port. sin pie de imp. (pero en p. 92 y 94 hay cartas de 1548)

Tractatus tres selectissimi et absolutissimi : I De vtroque foro ... II De Confessarijs solicitantibus poenitentes ad venerea ad explicatione[m] Constitutionis Greg. XV circa hanc rem editae 30 aug. 1622 ... III De horis Canonicis ex distributionibus quotidianis miro ordine digestus = in duos tomos distributi : accesit : primo eorum Antilogia aduersus Amayam /

Contiene solo el tratado I ; la segunda secuencia de paginación corresponde al "Index verum onnium et verborum ..."