997 resultados para Cellules CD34
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Lacide rtinoque (AR) est le ligand des rcepteurs nuclaires RAR et RXR qui agissent comme facteurs de transcription ligand-inductibles et mdient ses effets biologiques. Il est connu que lAR a des proprits prodiffrenciatrices et antiprolifratives, notamment sur les cellules de lpithlium mammaire. Une perte de sensibilit de lAR a toutefois t mise en vidence dans plusieurs lignes cellulaires mammaires cancreuses, ce qui pourrait faciliter la croissance des tumeurs. Or jusquici cette perte de sensibilit avait t attribue des dfauts de la voie de signalisation de lAR, cause par la perte de lexpression des rcepteurs lAR dans la tumeur, bien que plusieurs lignes de cellules cancreuses y soient tout de mme trs sensibles. Peu dtudes se sont intresses au rle de la voie de synthse de lAR dans la transformation des cellules mammaires. En effet, lAR est synthtis partir de la vitamine A, ou rtinol, son prcurseur sanguin provenant de la dite. Les cellules de lpithlium mammaire normales ont la capacit de synthtiser lAR partir du rtinol. Nos rapportons pour la premire fois que lpithlium mammaire est probablement le sige de la synthse et de la signalisation de lAR. Cela est d, au moins en partie, lexpression dune enzyme de synthse de lAR, RALDH3, dans lpithlium mammaire normal. Dans cette tude, nous dmontrons que les cellules cancreuses de type luminal, qui ont sensibles lAR (et qui expriment le rcepteur des estrognes ER, catgorie qui regroupe 75 % des tumeurs diagnostiques) nont au contraire pas la capacit de sythtiser lAR, probablement en raison dune faible expression de RALDH3 dans les tumeurs, sous leffet des estrognes. Cela pourrait reprsenter un nouveau mcanisme favorisant la croissance des tumeurs luminales dont les cellules prolifrent en prsence du rtinol sanguin. RALDH1, une autre enzyme de la voie de synthse de lAR, et qui partage 70 % didentit de squence avec RALDH3, est un marqueur de tumeurs plus agressives et de la formation de mtastase. Nous montrons au contraire, que RALDH3 est un marqueur dune moindre probabilit de dvelopper des mtastases chez les patientes atteintes dune tumeur luminale. Cela suggre des rles different pour ces deux enzymes dans la glande mammaire. Nos rsultats indiquent que RALDH1 et 3 ont des proprits enzymatiques trs diffrentes, ce qui est en accord avec cette dernire hypothse. Nos donnes suggrent aussi que RALDH1 et 3 pourraient tre des marqueurs de populations distinctes de cellules dans la glande mammaire normale. Nous proposons dexploiter les diffrences entre RALDH1 et 3 afin de mettre au point des mthodes de sparation des diffrentes population de cellules de lpithlium mammaire ce qui pourrait aider comprendre le rle de la synthse dAR dans ce tissu.
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Les protines sont les macromolcules les plus polyvalentes de la cellule. Elles jouent un rle fondamental dans la majorit des processus biologiques travers la formation de complexes multi-protiques. Durant la transcription, une multitude de facteurs sont impliques dans le contrle de lactivit des complexes ARN polymrases. Notre laboratoire sest intress au rseau dinteraction de la machinerie de transcription des ARN polymrases nuclaires, dans le but de mieux comprendre leurs mcanismes de rgulation. Pour ce faire, une procdure protomique comprenant la purification de complexes protiques par affinit couple la spectromtrie de masse et lanalyse bioinformatique a t dveloppe. La mthode de purification TAP (Tandem Affinity Purification) a t adapte pour permettre la purification de complexes protiques solubles assembls in vivo partir de cellules humaines. Lobjectif de mon projet de matrise tait de purifier le complexe de lARN Pol I ainsi que de poursuivre lexpansion du rseau dinteractions protine-protine de la machinerie de transcription de lARN Pol II humaine. laide des protines POLR1E, TWISTNB, POLR2E, PFDN4, MBD2, XPA, CAND1 et PDCD5 tiquetes (TAP-tag) exprimes dans des lignes cellulaires ECR-293, plusieurs complexes protiques solubles ont t purifis et analyss par spectromtrie de masse. Les interactions protiques ont t tries et valides bioinformatiquement pour donner en final une liste dinteractions ayant un haut degr de confiance partir de laquelle des rseaux dinteractions protine-protine ont t crs. Le rseau cr au cours de ce projet connecte plusieurs composantes de la machinerie transcriptionnelle tels que les ARN Pol I, II et III, les complexes RPAP3/R2TP/prefoldin-like, TRiC/CCT, Mi-2/NuRD et des facteurs de transcription et de rparation de lADN. Ce type danalyse nous a permis didentifier et de caractriser de nouveaux rgulateurs de la machinerie de transcription de lARN Pol I et II et de mieux comprendre son fonctionnement.
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Grce aux nombreuses tudes sur le sujet, nous savons quune stimulation inflammatoire vasculaire excessive entrane un dbalancement des fonctions homostatiques de lendothlium. Ce dbalancement est lorigine dune dysfonction endothliale dfinie comme tant ltape cl contribuant au dveloppement de lathrosclrose. Le Toll-like receptor-2 (TLR2) est impliqu dans lactivation cellulaire via la transcription des gnes lis linflammation. Il reconnat des molcules microbiennes mais galement des facteurs endognes non-infectieux tels que scrts par les tissus endommags provenant de la dysfonction endothliale. Ainsi, lactivation et la signalisation du TLR2 sont en troite relation avec le dveloppement de lathrosclrose. Les tudes pidmiologiques ont confirm le rle athroprotecteur de lstrogne via de nombreux mcanismes daction. Ainsi, nous avons cherch identifier de nouvelles cibles molculaires permettant de mieux interprter les bnfices potentiels de lstrogne sur le systme cardiaque. Pour la premire fois chez les cellules endothliales (CE) vasculaires de souris, nos travaux ont confirm leffet anti-inflammatoire de lstrogne via la diminution de lexpression et de lactivit du TLR2. Nous avons galement dtermin linfluence de lstrogne sur le profil de la rponse inflammatoire de ce rcepteur en mesurant les potentiels endothliaux de migration et dadhsion. De plus, nous avons caractris les voies de signalisation impliques en dmontrant linfluence ngative de lstrogne sur la phosphorylation des kinases actives par le TLR2; illustrant linteraction entre lstrogne et la signalisation de ce rcepteur. Nos travaux amnent ainsi de nouvelles connaissances sur la rgulation endothliale du TLR2 et mettent en lumire les effets anti-inflammatoires et vasculaires rapides de lstrogne.
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La greffe de sang de cordon est de plus en plus utilise et a permis de traiter avec succs chez lenfant des dficits immunitaires ainsi que des hmopathies malignes comme les leucmies. Malgr dimportants avantages tels que labsence de risque pour le donneur ou la plus faible incidence de maladie du greffon contre lhte (GvHD), utiliser le sang de cordon comporte certains inconvnients. En effet, une reconstitution immunitaire retarde, des infections opportunistes en plus grand nombre et un risque de rechute sont des complications qui peuvent survenir et engendrer un risque pour le pronostic vital du patient. Par consquent, de nouvelles stratgies dimmunothrapies doivent tre envisages. Dans le cadre de ce travail, nous nous sommes particulirement intresss aux cellules dendritiques plasmacytoides (pDC) dont les fonctions sont importantes pour linitiation des rponses immunitaires inne et adaptative et particulirement pour leur capacit activer les cellules NK. Afin dlucider le rle et limpact de ces cellules dans les greffes de sang de cordon, le nombre et la fonction des pDC et des NK a t suivi longitudinalement chez des patients ayant subi une greffe de sang de cordon comparativement des patients transplants avec de la moelle osseuse. Nous avons ainsi dmontr que les pDC et les NK apparaissent prcocement suite une greffe de sang de cordon et que ces cellules sont fonctionnelles. Ces rsultats mettent donc en lumire que ces cellules pourraient tre de bons outils pour ltablissement dune immunothrapie aprs greffe de sang de cordon. De plus, la caractrisation fonctionnelle des pDC du greffon de sang de cordon a permis de rvler une plus faible production dIFN- par les pDC, comparativement aux pDC de sang dadulte. Cette diffrence pourrait jouer un rle dans la plus faible incidence de GvHD aprs les greffes de sang de cordon. Dans le but de prciser les mcanismes molculaires de rgulation ngative de la production dIFN- par les pDC de sang de cordon, nous avons tudi les protines de la voie de signalisation TLR9-IRF7. Lexpression similaire de lARN du TLR9, MyD88, IRAK1 et IRF7 contraste avec la plus faible expression des protines correspondantes. De plus, lexpression des MicroARNs miR-146a et miR-155 est plus lev dans les pDC de sang de cordon comparativement aux pDC de sang dadultes. Ensemble, ces donnes pointent une rgulation ngative post-transcriptionnelle de la voie TLR9-IRF7 qui pourrait expliquer la plus faible production dIFN- des pDC du sang de cordon. Lensemble des ces travaux suggre que les pDC pourraient reprsenter une cible de choix dans le dveloppement de nouvelles approches thrapeutiques dans les greffes de sang de cordon.
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La mmoire et lapprentissage sont des phnomnes complexes qui demeurent encore incertains quant aux origines cellulaire et molculaire. Il est maintenant connu que des changements au niveau des synapses, comme la plasticit synaptique, pourraient dterminer la base cellulaire de la formation de la mmoire. Alors que la potentialisation long-terme (LTP) reprsente un renforcement de lefficacit de transmission synaptique, la dpression long-terme (LTD) constitue une diminution de lefficacit des connexions synaptiques. Des tudes ont mis jour certains mcanismes qui participent ce phnomne de plasticit synaptique, notamment, les mcanismes dinduction et dexpression, ainsi que les changements morphologiques des pines dendritiques. La grande majorit des synapses excitatrices glutamatergiques se situe au niveau des pines dendritiques et la prsence de la machinerie traductionnelle prs de ces protubrances suggre fortement lexistence dune traduction locale dARNm. Ces ARNm seraient dailleurs achemins dans les dendrites par des protines pouvant lier les ARNm et assurer leur transport jusquaux synapses actives. Le rle des protines Staufen (Stau1 et Stau2) dans le transport, la localisation et dans la rgulation de la traduction de certains ARNm est bien tabli. Toutefois, leur rle prcis dans la plasticit synaptique demeure encore inconnu. Ainsi, cette thse de doctorat value limportance des protines Staufen pour le transport et la rgulation dARNm dans la plasticit synaptique. Nous avons identifi des fonctions spcifiques chaque isoforme; Stau1 et Stau2 tant respectivement impliques dans la late-LTP et la LTD dpendante des rcepteurs mGluR. Cette spcificit sapplique galement au rle que chaque isoforme joue dans la morphogense des pines dendritiques, puisque Stau1 semble ncessaire au maintien des pines dendritiques matures, alors que Stau2 serait davantage implique dans le dveloppement des pines. Dautre part, nos travaux ont permis de dterminer que la morphogense des pines dendritiques dpendante de Stau1 tait rgule par une plasticit synaptique endogne dpendante des rcepteurs NMDA. Finalement, nous avons prcis les mcanismes de rgulation de lARNm de la Map1b par Stau2 et dmontr limportance de Stau2 pour la production et lassemblage des granules contenant les transcrits de la Map1b ncessaires pour la LTD dpendante des mGluR. Les travaux de cette thse dmontrent les rles spcifiques des protines Stau1 et Stau2 dans la rgulation de la plasticit synaptique par les protines Stau1 et Stau2. Nos travaux ont permis dapprofondir les connaissances actuelles sur les mcanismes de rgulation des ARNm par les protines Staufen dans la plasticit synaptique. MOTS-CLS EN FRANAIS: Staufen, hippocampe, plasticit synaptique, granules dARN, traduction, pines dendritiques.
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Les cellules souches embryonnaires (ES) sont porteuses de grands espoirs en recherche biomdicale dans le but dapporter un traitement dfinitif lostoarthrose. Parce que certaines articulations des chevaux sont similaires celles des humains, cet animal reprsente un modle important dans lvaluation de stratgies de rgnration du cartilage. Cependant, pour exprimenter un traitement par les cellules ES chez le cheval, des cellules ES quines (eES) nont toujours pas pu tre drives. Dans ce contexte, lobjectif principal de cette tude est de driver des lignes de cellules eES. Le premier objectif de notre tude consiste optimiser la technique de drivation des cellules eES. Nous dmontrons que la ligne de cellules nourricires et le stade de dveloppement des embryons influencent lefficacit de la technique de drivation tandis que linhibition de voies de signalisation menant la diffrenciation des cellules ES ne linfluence pas sous nos conditions. Le deuxime objectif de notre tude est de caractriser de faon plus approfondie les lignes de cellules eES obtenues. Nous dmontrons que les cellules eES drives expriment autant des marqueurs associs aux cellules pluripotentes quaux cellules diffrencies et que linhibition de voies de signalisation menant la diffrenciation ninfluence pas lexpression de ces marqueurs. Pour conclure, nous confirmons avoir driv des lignes de cellules semblables au cellules eES (eES-like) ne correspondant pas compltement aux critres des cellules ES.
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Les facteurs dADP-ribosylation (ARFs) sont des petites GTPases impliques dans le transport vsiculaire, la synthse des lipides membranaires et la rorganisation du cytosquelette dactine. Les isoformes 1 (ARF1) et 6 (ARF6) sont les plus tudies. ARF1 est connue pour tre distribue lappareil de Golgi, alors quARF6 est confine principalement la membrane plasmique. Rcemment, il a t dmontr quARF6 est hautement exprime et active dans plusieurs cellules de cancer du sein invasif et que celle-ci contrle les processus de migration et dinvasion. Cependant, le rle dARF1 dans ces processus biologiques impliqus dans la formation de mtastases du cancer du sein demeure mconnu. Dans la prsente tude, nous avons utilis comme modle dtude pour ARF1 les MDA-MB-231, une ligne de cellules invasives du cancer du sein exprimant de haut niveau de rcepteurs au facteur de croissance pidermique (EGFR). Afin dvaluer le rle dARF1 dans la migration, dans la transition pithliale msenchymateuse (EMT) et dans la prolifration cellulaire, nous avons procd deux types dapproches exprimentales, soit linhibition de lexpression endogne dARF1 par linterfrence lARN de mme que la surexpression de formes mutantes dominante ngative (ARF1T31N) et constitutivement active dARF1 (ARF1Q71L), qui miment les formes inactive et active de la GTPase, respectivement. De manire intressante, la suppression dARF1 et la surexpression de la forme inactive dARF1 induisent larrt de la migration et de la prolifration des MDA-MB-231 de manire dpendante lactivation de lEGFR et ce, en bloquant lactivation de la voie PI3Kinase. De plus, nous dmontrons quARF1, de mme que les ARF GEFs Cytohsine-1 et Cytohsine-2, contribuent au phnotype invasif des cellules tumorales de cancer du sein. Dans les mmes approches exprimentales, nous montrons que linactivation dARF1 dans les MDA-MB-231 dclenche un arrt de croissance irrversible associ linduction de la snescence et ce, en rgulant la fonction de la protine du rtinoblastome pRb. Enfin, cette tude a permis de mettre en vidence le rle physiologique dARF1 dans les processus de migration et de prolifration cellulaire, deux vnements biologiques responsables de la progression du cancer du sein.
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La rgulation transcriptionnelle des gnes est cruciale pour permettre le bon fonctionnement des cellules. Afin que les cellules puissent accomplir leurs fonctions, les gnes doivent tre exprims adquatement dans le bon type cellulaire et au stade de dveloppement et de diffrenciation appropri. Un drglement dans lexpression de un ou plusieurs gnes peut entraner de graves consquences sur le destin de la cellule. Divers lments en cis (ex : promoteurs et enhancers) et en trans (machinerie transcriptionnelle et facteurs de transcription) sont impliqus dans la rgulation de la transcription. Les gnes du locus humain beta-globine (hub) sont exprims dans les cellules rythrodes et sont finenement rguls lors du dveloppement et de la diffrenciation. Des mutations dans diffrentes rgions du locus causent entre autres les beta-thalassmies. Nous avons utilis ce modle bien caractris afin dtudier diffrents mcanismes de rgulation favoriss par les facteurs de transcription qui sont exprims dans les cellules rythrodes. Nous nous sommes intresss limportance de llment en cis HS2 du Locus control region. Cet lment possde plusieurs sites de liaison pour des facteurs de transcription impliqus dans la rgulation des gnes du locus hub. Nos rsultats montrent que HS2 possde un rle dans lorganisation de la chromatine du locus qui peut tre dissoci de son rle denhancer. De plus, HS2 nest pas essentiel pour lexpression haut niveau du gne beta alors quil est important pour lexpression des gnes gamma. Ceci suggre que le recrutement des diffrents facteurs au site HS2 lors du dveloppement influence diffrement les gnes du locus. Dans un deuxime temps, nous avons investigu limportance de HS2 lors de la diffrenciation des cellules rythrodes. Il avait t rapport que labsence de HS2 influence grandement la potentialisation de la chromatine du gne beta. La potentialisation dans les cellules prognitrices favorise lactivation transcriptionnelle du gne dans les cellules matures. Nous avons caractris le recrutement de diffrents facteurs de transcription au site HS2 et au promoteur beta dans les cellules prognitrices hmatopotiques (CPH) ainsi que dans les cellules rythrodes matures. Nos rsultats montrent que le facteur EKLF est impliqu dans la potentialisation de la chromatine et favorise le recrutement des facteurs BRG1, p45 et CBP dans les CPH. Lexpression de GATA-1 dans les cellules rythrodes matures permet le recrutement de GATA-1 au locus hub dans ces cellules. Ces donnes suggrent que la combinaison de EKLF et GATA-1 est requise pour permettre une activation maximale du gne beta dans les cellules rythrodes matures. Un autre facteur impliqu dans la rgulation du locus hub est Ikaros. Nous avons tudi son recrutement au locus hub et avons observ que Ikaros est impliqu dans la rpression des gnes gamma. Nos rsultats montrent aussi que GATA-1 est impliqu dans la rpression de ces gnes et quil interagit avec Ikaros. Ensemble, Ikaros et GATA-1 favorisent la formation dun complexe de rpression aux promoteurs gamma. Cette tude nous a aussi permis dobserver que Ikaros et GATA-1 sont impliqus dans la rpression du gne Gata2. De faon intressante, nous avons caractris le mcanisme de rpression du gne Hes1 (un gne cible de la voie Notch) lors de la diffrenciation rythrode. Similairement ce qui a t observ pour les gnes gamma, Hes1 est aussi rprim par Ikaros et GATA-1. Ces rsultats suggrent donc que la combinaison de Ikaros et GATA-1 est associe la rpression de plusieurs de gnes dans les cellules rythrodes. Globalement cette thse rapporte de nouveaux mcanismes daction de diffrents facteurs de transcription dans les cellules rythrodes. Particulirement, nos travaux ont permis de proposer un modle pour la rgulation des gnes du locus hub lors du dveloppement et de la diffrenciation. De plus, nous rapportons pour la premire fois limportance de la collaboration entre les facteurs Ikaros et GATA-1 dans la rgulation transcriptionnelle de gnes dans les cellules rythrodes. Des mutations associes certains des facteurs tudis ont t rapportes dans des cas de beta-thalassmies ainsi que de leucmies. Nos travaux serviront donc avoir une meilleure comprhension des mcanismes daction de ces facteurs afin de potentiellement pouvoir les utiliser comme cibles thrapeutiques.
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L'axe hypothalamo-hypophyso-surrnalien (HPA) permet de maintenir l'homostasie de l'organisme face divers stress. Qu'ils soient de nature psychologique, physique ou inflammatoire/infectieux, les stress provoquent la synthse et la libration de CRH par l'hypothalamus. Les cellules corticotropes hypophysaires peroivent ce signal et en raction, produisent et scrtent l'ACTH. Ceci induit la synthse des glucocorticodes (Gc) par le cortex surrnalien; ces strodes mettent le systme mtabolique en tat dalerte pour la rponse au stress et lagression. Les Gc ont le rle essentiel de contrler les dfenses de l'organisme, en plus d'exercer une rtro-inhibition sur l'axe HPA. L'ACTH est une petite hormone peptidique produite par le clivage d'un prcurseur: la pro-opiomlanocortine (POMC). cause de sa position critique dans la normalisation de l'homostasie, le contrle transcriptionnel du gne Pomc a fait l'objet d'tudes approfondies au cours des dernires dcennies. Nous savons maintenant que la rgion promotrice du gne Pomc permet une expression cible dans les cellules POMC hypophysaires. L'tude du locus Pomc par des technologies gnomiques m'a permis de dcouvrir un nouvel lment de rgulation qui est conserv travers l'volution des mammifres. La caractrisation de cet enhancer a dmontr qu'il dirige une expression restreinte l'hypophyse, et plus particulirement dans les cellules corticotropes. De faon intressante, l'activit de cet lment dpend d'un nouveau site de liaison recrutant un homodimre du facteur de transcription Tpit, dont l'expression est galement limite aux cellules POMC de l'hypophyse. La dcouverte de cet enhancer ajoute une toute nouvelle dimension la rgulation de l'expression de POMC. Les cytokines pro-inflammatoires IL6/LIF et les Gc sont connus pour leur antagonisme sur la raction inflammatoire et sur le promoteur Pomc via l'action des facteurs de transcription Stat3 et GR respectivement. L'analyse gnomique des sites lis ii par ces deux facteurs nous a rvl une interrelation complexe et a permis de dfinir un code transcriptionnel entre ces voies de signalisation. En plus de leur action par interaction directe avec lADN au niveau des squences rgulatrices, ces facteurs interagissent directement entre eux avec des rsultats transcriptionnels diffrents. Ainsi, le recrutement de GR par contact protine:protine (tethering) sur Stat3 tant li l'ADN provoque un antagonisme transcriptionnel. Inversement, le tethering de Stat3 sur GR supporte une action synergique, tout comme leur co-recrutement l'ADN sur des sites contigus ou composites. Lors d'une activation soutenue, ce synergisme entre les voies IL6/LIF et Gc induit une rponse inne de dfense cellulaire. Ainsi lors d'un stress majeur, ce mcanisme de dfense est mis en branle dans toutes les cellules et tissus. En somme, les travaux prsents dans cette thse dfinissent les mcanismes transcriptionnels engags dans le combat de l'organisme contre les stress. Plus particulirement, ces mcanismes ont t dcrits au niveau de la rponse globale des corticotropes et du gne Pomc. Il est essentiel pour l'organisme d'induire adquatement ces mcanismes afin de faire face aux stress et d'viter des drglements comme les maladies inflammatoires et mtaboliques.
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Linfection VIH-1 est associe une forte dpltion des lymphocytes T CD4+ polarisation Th17 au niveau des tissus lymphodes associs aux muqueuses intestinales (GALT, gut-associated lymphoid tissues). Ceci conduit la translocation microbienne, qui est une cause dactivation immunitaire chronique et de progression de la maladie. Les cellules pithliales (CE) jouent un rle critique dans le maintien de lintgrit et de lhomostasie au niveau des muqueuses intestinales via le recrutement des cellules de limmunit inne (e.g., neutrophiles) et adaptative (e.g., cellules Th17). Les neutrophiles produisent des molcules antivirales (e.g., dfensines-) et ont la capacit de limiter la rplication virale au niveau des muqueuses. Les cellules Th17 jouent un double rle lors de linfection VIH. Elles contribuent dune part la dfense contre diffrents pathognes opportunistes en augmentant, via la production dIL-17, la capacit des CE attirer les cellules Th17 et les neutrophiles. Dautre part, les cellules Th17 jouent un rle dltre en tant que cibles de rplication virale et sources de cytokines pro-inflammatoires. La frquence des cellules Th17 est diminue dans les GALT mais pas dans les poumons des patients infects par le VIH, suggrant quil existe des mcanismes diffrents par lesquels les cellules Th17 sont recrutes vers ces sites anatomiques. Nous avons test lhypothse selon laquelle le VIH interfre avec la capacit des CE intestinales et non pas pulmonaires produire des chimiokines (CK) responsables de lattraction des cellules Th17 et des neutrophiles. Nous avons dmontr que les CE intestinales et pulmonaires produisent des CK spcifiques pour les cellules Th17 (CCL20) et les neutrophiles (CXCL8) en rponse des stimuli pro-inflammatoires tels que lIL-1 et le TNF-. Le TNF- agit en synergie avec lIL-17, un signal de danger rcemment identifi, et augmente la capacit des CE intestinales mais pas pulmonaires produire la chimiokine CCL20. Cette synergie sexplique par laugmentation prfrentielle de lexpression du rcepteur lIL-17 la surface des CE intestinales suite la stimulation par le TNF-. Lexposition au VIH naffecte pas la production de CCL20 et de CXCL8 par les CE intestinales, mais altre la capacit des CE alvolaires produire ces chimiokines en accord avec la permissivit slective de ces dernires linfection par le VIH. En conclusion, nos rsultats dmontrent que (i) le VIH ninterfre pas directement avec la capacit des CE intestinales recruter des cellules Th17 et des neutrophils et que (ii) la production de CCL20 par ces cellules est dpendantes de la synergie entre le TNF- et lIL-17. Ainsi, la dpltion des cellules Th17 et la pnurie en IL-17 dans les GALT des sujets infects pourrait causer de faon prfrentielle des altrations fonctionnelles au niveau des CE intestinales, se traduisant par laltration du recrutement des cellules Th17 en rponse au CCL20.
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Le traitement du cancer laide dune exposition aux radiations ionisantes peut mener au dveloppement de plusieurs effets secondaires importants, dont un retard de rparation et de rgnration du tissu hmatopotique. Les mcanismes responsables de ces effets demeurent encore inconnus, ce qui limite le dveloppement de nouvelles approches thrapeutiques. laide dun modle murin de prise de greffe, nos rsultats dmontrent que lendommagement du microenvironnement par lirradiation a un impact limitant sur le nichage hmatopotique. Parce que le microenvironnement est compos principalement de cellules drives des cellules souches msenchymateuses (CSM), nous avons valu le potentiel des CSM rgnrer le tissu hmatopotique par la reconstitution de la niche osseuse. Cette thrapie a men une augmentation remarquable du nichage hmatopotique chez les souris irradies. Les causes molculaires impliques dans le nichage hmatopotiques sont encore inconnues, mais nous avons remarqu laugmentation de la scrtion de la cytokine granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) dans lespace mdullaire suite lirradiation. Le G-CSF est impliqu dans la mobilisation cellulaire et est fort possiblement nuisible une prise de greffe. Nous avons valu le potentiel dune thrapie base de CSM scrtant le rcepteur soluble du G-CSF afin de squestrer le G-CSF transitoirement et les rsultats obtenus dmontrent que le blocage du G-CSF favorise le nichage hmatopotique. Globalement, les donnes prsentes dans ce mmoire dmontrent que le microenvironnement osseux et le niveau de G-CSF dans la moelle sont importants dans le processus de nichage hmatopotique et que la baisse du potentiel de rgnration du tissu hmatopotique suite lirradiation peut tre renverse laide dune thrapie cellulaire de CSM gntiquement modifies ou non.
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Les cellules dendritiques plasmacytodes (pDC) sont des cellules dendritiques spcialises, aussi connues sous le nom de cellules productrices dinterfron- (IFN-). Les pDC jouent un rle essentiel dans linduction de la rponse immunitaire antivirale, en reconnaissant les antignes viraux via les Toll-like receptors (TLR) 7 et 9. Toutefois, les pDC du sang de cordon sont incapables de produire de lIFN- en rponse une stimulation du TLR9, mais leur maturation en cellules prsentatrices dantignes est normale. Dans le cadre de ce travail, nous nous sommes intresss aux effets des facteurs immuno-rgulateurs scrts par le placenta sur la diffrenciation et la fonction des pDC. Nous avons analys leffet, seules ou en combinaison, de la progestrone (PG), de l'interleukine (IL)-10 et du tumor growth factor (TGF)- sur la diffrenciation et la fonction des pDC. Nous dmontrons qu des niveaux supra-physiologiques ces trois facteurs modulent la diffrenciation et la production dIFN- des pDC. des niveaux observs dans le sang de cordon, ces facteurs ont peu dimpact sur les pDC lorsque utiliss individuellement. Toutefois lorsque utiliss en combinaison, ils diminuent la production dIFN-. Nous avons aussi dmontr que la PG, lIL-10 et le TGF- ninduisent pas lexpression des micro-ARN 146a et 155 par les pDC. Finalement nous dmontrons que les niveaux de ces molcules sont plus levs dans le sang de cordon que dans le sang dadulte. Nos rsultats rvlent le rle important des facteurs immuno-rgulateurs scrts par le placenta sur la fonction des pDC et en consquence, sur la rponse immunitaire ftale et nonatale.
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Le neuroblastome (NB) est la tumeur solide extracranienne la plus frquente et mortelle chez les jeunes enfants. Il se caractrise par une rsistance la chimiothrapie possiblement en partie d la prsence de cellules initiatrices de tumeurs (TICs). Des tudes ont mis en vidence le rle de CD133 comme un marqueur des TICs dans divers types de cancers. Les buts de notre travail taient dabord de dmontrer les vertus de TICs des cellules exprimant CD133 et ensuite, en utilisant une analyse globale du gnome avec des polymorphismes nuclotidiques simples (SNPs), deffectuer une analyse diffrentielle entre les TICs et les autres cellules du NB afin den identifier les anomalies gntiques spcifiques. Des lignes cellulaires de NB ont t tries par cytomtrie de flux afin dobtenir deux populations: une enrichie en CD133 (CD133high), lautre faible en CD133 (CD133low). Afin de dterminer si ces populations cellulaires prsentent des proprits de TICs, des essais sur les neurosphres, les colonies en agar mou et les injections orthotopiques de 500 cellules slectionnes dans 11 souris ont t ralises. Aprs une isolation de lADN des populations slectionnes, nous avons effectu une analyse gnotypique par SNP utilisant les puces Affymetrix Genome-Wide Human SNP Array 6.0 . Pour vrifier lexpression des gnes identifis, des Western Blots ont t raliss. Nos rsultats ont dmontr que la population CD133 avait des proprits de TICs in vitro et in vivo. Lanalyse gnotypique diffrentielle a permis didentifier deux rgions communes (16p13.3 and 19p13.3) dans la population CD133high ayant des gains et deux autres rgions (16q12.1 and 21q21.3) dans la population CD133low possdant des pertes dhtrozygoties (LOH). Aucune perte na t observe. Parmi les gnes tudis, lexpression protique dphrine-A2 tait corrle celle de CD133 dans 6 tumeurs et 2 lignes cellulaires de NB. De plus, laugmentation de la concentration danticorps anti-phrine-A2 dans le milieu diminue la taille des neurosphres. Ainsi, la population CD133high, qui a des vertus de TICs, possde des caractristiques gnotypiques diffrentes par rapport celle CD133low. La prsence dphrine-A2 dans les cellules exprimant CD133 souligne son importance dans le dveloppement des TICs. Ces rsultats suggrent la prsence de potentielle cible pour de nouvelles thrapeutiques ciblant les TICs mise en vidence par ltude gnomique.
Resumo:
Thse numrise par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral
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Thse numrise par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral
